外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——超高速離心法。其中超高速離心法是常用的,該方法是被譽(yù)為分離外泌體的“金標(biāo)準(zhǔn)”。因操作簡(jiǎn)單,不需要復(fù)雜的技術(shù)支持,并且成本相對(duì)較低而被廣fan使用。但是該方法耗時(shí)、產(chǎn)率低,得到的外泌體的數(shù)量和質(zhì)量很大程度上受轉(zhuǎn)子的類型、轉(zhuǎn)子沉降角度等因素影響,其中主要的問題就是差速離心法獲得的沉淀物是外泌體,但也會(huì)有其他的囊泡、蛋白質(zhì)或蛋白和RNA的聚集體。所以得到的外泌體的純度和產(chǎn)量都不高。間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體能通過裝載miＲ-132zhiliao心肌缺血。細(xì)胞樣本外泌體載藥實(shí)驗(yàn)參考價(jià)格
間充質(zhì)干細(xì)胞（MSC）的外泌體成為有潛力的天然藥物遞送載體的優(yōu)勢(shì)：與其他來源外泌體的產(chǎn)生機(jī)制一致，即首先由細(xì)胞質(zhì)膜內(nèi)陷形成內(nèi)體，然后內(nèi)體向內(nèi)出芽形成多泡體，而多泡體具有兩種命運(yùn)，一種是移動(dòng)到細(xì)胞表面與質(zhì)膜融合，以胞吐的方式將外泌體釋放到細(xì)胞外;另一種是與溶酶體結(jié)合，將內(nèi)容物降解。MSC-Exo具有外泌體的共同特征，即富含四跨膜蛋白CD9、CD63、CD81，整合素，主要組織相容性復(fù)合物Ⅰ、Ⅱ，熱休克蛋白，多泡體合成相關(guān)蛋白(ALIX、TSG101)，核酸，膽固醇、磷酸甘油酯、鞘磷脂等。此外，MSC-Exo還具有特異性標(biāo)志物，例如，CD29、CD90、CD73和CD44等。MSC-Exo具有與MSCs相似的生物學(xué)功能，而且避免了細(xì)胞移植的風(fēng)險(xiǎn)，易于獲取、儲(chǔ)存和管理;可控性高、免疫原性低、安全性好。黑龍江動(dòng)物細(xì)胞樣本外泌體載藥大概費(fèi)用姜黃素裝載在牛奶來源的外泌體經(jīng)口服方式可以有效地調(diào)控靶細(xì)胞。
大分子蛋白類藥物可以通過以下方法進(jìn)行外泌體載藥。Haney等人采用常溫下共孵育、加入皂素后孵育、反復(fù)凍融、超聲、擠出等多種不同的方法將過氧化氫酶包載到外泌體中。結(jié)果顯示，外泌體通過超聲和擠出兩種方式句有較高的載藥量，分別為26.1％和22.2％，通過被動(dòng)擴(kuò)散方式的載藥量jin為4.9％，但當(dāng)加入句有透皮促進(jìn)作用的皂素后，外泌體的載藥量會(huì)明顯提高至18.5％。值得注意的是，外泌體的載藥量不jin與載yao方式有關(guān)，也取決于藥物的性質(zhì)、外泌體脂質(zhì)的組成，而且不同的載yao方式也會(huì)影響細(xì)胞對(duì)外泌體的攝取。
外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——梯度密度離心法。外泌體的密度在1.1~1.19kg·L-1之間,因此,可以采用密度梯度離心法來分離外泌體。該方法是將超速離心結(jié)合蔗糖密度梯度或蔗糖墊結(jié)合,原理是先除去非囊泡物質(zhì),再通過梯度密度濃縮提取外泌體,該方法可以得到相對(duì)較為純凈的外泌體。傳統(tǒng)的梯度密度方法通常需要離心16h,但是2012年,研究者使用了62~90h才分離出某些確切囊泡,因此,該方法可能不足以沉淀所有的外泌體。如果離心時(shí)間不充足,污染物質(zhì)可能和外泌體保持在相同的密度層,特別是這個(gè)密度范圍又比較寬。負(fù)載姜黃素的外泌體可經(jīng)外泌體轉(zhuǎn)運(yùn)通過血腦屏障, 運(yùn)送到腦組織中, 減輕氧化應(yīng)激，維持腦血管屏障功能。
采用外泌體作為藥物載體，制備一種裝載連翹酯苷A(FTA)的外泌體遞藥系統(tǒng)。細(xì)胞攝取實(shí)驗(yàn)的結(jié)果表明，A549細(xì)胞可以攝取FTA-Exos，并且能維持長(zhǎng)時(shí)間的穩(wěn)定，延長(zhǎng)了半衰期，明顯的提高了連翹酯苷A的生物利用度，為研究連翹酯苷A體外抗中流轉(zhuǎn)移作用打下基礎(chǔ)。經(jīng)典劃痕實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，F(xiàn)TA-Exos組對(duì)于A549細(xì)胞的遷移抑制率高達(dá)90%以上，明顯高于連翹酯苷A組遷移抑制率，證實(shí)含藥外泌體具有更好的體外抑制A549細(xì)胞遷移效果。成功建立了FTA-Exos藥物遞送系統(tǒng)，制備的FTA-Exos性質(zhì)穩(wěn)定優(yōu)越，明顯提高連翹酯苷A的生物利用度，并具有更好的抑制A549細(xì)胞遷移作用。外泌體可負(fù)載小分子化學(xué)藥物、基因藥物用于zhiliao中流及阿爾茨海默癥等疾病。黑龍江組織樣本外泌體載藥實(shí)驗(yàn)服務(wù)
外泌體載藥后可以繞開Ｐ－糖蛋白，明顯降低藥物進(jìn)入細(xì)胞后的外排作用。細(xì)胞樣本外泌體載藥實(shí)驗(yàn)參考價(jià)格
?影響外泌體載藥效率的因素有許多：1外泌體的分離與純化：目前，準(zhǔn)確和標(biāo)準(zhǔn)的外泌體純化方法較少，使用不同方法獲得的外泌體其收率與純度差別較大，需要根據(jù)研究目的不同選擇適當(dāng)?shù)姆蛛x方法，超速離心法是外泌體純化常用的手段，低速離心和高速離心交替進(jìn)行的方法通常用于從大量樣品中分離外泌體，但獲得的外泌體純度不高。外泌體的收率過低與低純度會(huì)影響其對(duì)藥物包載效率，難以實(shí)現(xiàn)大批量生產(chǎn)。2包載方法：根據(jù)包載藥物的分子極性、相對(duì)分子質(zhì)量及自身所帶電荷等性質(zhì)選擇不同的包載方法。不同包載方法對(duì)于同一種藥物的包載效率可能完全不同。細(xì)胞樣本外泌體載藥實(shí)驗(yàn)參考價(jià)格