推動(dòng)關(guān)系中自噬并不直接參與誘導(dǎo)細(xì)胞死亡,而是作為能量供應(yīng)者保障凋亡順利進(jìn)行。例如細(xì)胞在營養(yǎng)匱乏的情況下,通過上調(diào)自噬維持胞內(nèi)ATP水平,使得胞內(nèi)磷脂酰絲氨酸向胞外暴露釋放出凋亡信號(hào)。凋亡小體形成的膜出泡過程依賴于ATP驅(qū)動(dòng)肌動(dòng)球蛋白收縮,如若阻止自噬會(huì)阻礙這類ATP依賴性凋亡特征發(fā)生,但對(duì)其它凋亡反應(yīng)并無影響。細(xì)胞自噬與細(xì)胞凋亡交互作用的重要調(diào)節(jié)子凋亡與自噬的多重交互作用方式必然存在共同的信號(hào)通路和調(diào)節(jié)蛋白,研究人員將其稱為交互作用調(diào)節(jié)。由于自噬體膜形成過程中需要LC3,因此通過標(biāo)記LC3可以識(shí)別自噬體。河南自噬GFP-LC3B
高蛋白飲食可以通過抑制NIX介導(dǎo)的線粒體自噬途徑加速巨噬細(xì)胞凋亡,從而促進(jìn)線粒體自噬;真核起始因子2α通過抑制Parkin誘導(dǎo)的線粒體自噬途徑加重高脂血癥引起的動(dòng)脈粥樣yin化炎癥;在主動(dòng)脈內(nèi)皮細(xì)胞中,氧化型低密度脂蛋白可以導(dǎo)致核受體NR4A1過表達(dá),從而引起Parkin介導(dǎo)的線粒體自噬過度激huo,導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞因線粒體數(shù)量過度減少、細(xì)胞能量供給不足而凋亡,從而加重動(dòng)脈粥樣yin化。綜上所述,在動(dòng)脈粥樣yin化的發(fā)病過程中,線粒體自噬扮演關(guān)鍵角色,有望通過調(diào)節(jié)線粒體自噬來減緩甚至逆轉(zhuǎn)動(dòng)脈粥樣yin化的進(jìn)展,可能成為zhiliao動(dòng)脈粥樣yin化的新靶點(diǎn)。浙江自噬慢病毒包裝姜黃素可誘導(dǎo)HUVECs細(xì)胞自噬保護(hù)內(nèi)皮細(xì)胞的氧化應(yīng)激損傷。
自噬體是自噬的標(biāo)志性結(jié)構(gòu)。自噬體屬于亞細(xì)胞結(jié)構(gòu),直徑一般為300~900nm,平均500nm,普通光鏡下看不到。通過透射電子顯微鏡發(fā)現(xiàn)自噬體一直是觀察自噬現(xiàn)象常用的方法,是自噬檢測(cè)的“金標(biāo)準(zhǔn)”。透射電子顯微鏡(Transmission Electron Microscope,TEM)是使用較多的一類電鏡。通過發(fā)射電子束從而穿過超薄的樣品,同時(shí)與樣本相互作用,既而形成圖像。透射電鏡具有分辨率高和放大倍數(shù)高的優(yōu)點(diǎn)。其分辨率為0.1-0.2nm,放大倍數(shù)為幾萬到幾十萬倍。
在熒光顯微鏡下采用GFP-LC3等融合蛋白來示蹤自噬形成(常用):GFP-LC3單熒光指示體系。由于電鏡耗時(shí)長(zhǎng),不利于監(jiān)測(cè)(Monitoring)自噬形成。我們利用LC3在自噬形成過程中發(fā)生聚集的現(xiàn)象開發(fā)出了GFP-LC3指示技術(shù):無自噬時(shí),GFP-LC3融合蛋白彌散在胞漿中;自噬形成時(shí),GFP-LC3融合蛋白轉(zhuǎn)位至自噬體膜,在熒光顯微鏡下形成多個(gè)明亮的綠色熒光斑點(diǎn),一個(gè)斑點(diǎn)相當(dāng)于一個(gè)自噬體,可以通過計(jì)數(shù)來評(píng)價(jià)自噬活性的高低。研載生物已開發(fā)出高效的評(píng)價(jià)用GFP-LC3病毒載體,通過瞬時(shí)高效傳染細(xì)胞,配合活細(xì)胞工作站成功評(píng)價(jià)自噬流。錦燈籠的有效成分酸漿苦素A可上調(diào)Beclin-1、LC3蛋白表達(dá)誘導(dǎo)黑色素中流細(xì)胞A375-S2自噬。
根據(jù)細(xì)胞物質(zhì)運(yùn)到溶酶體內(nèi)的途徑不同,自噬分為以下幾種。①大自噬:由內(nèi)質(zhì)網(wǎng)、高爾基體或細(xì)胞質(zhì)膜等來源的膜包繞待降解物形成自噬體,然后與溶酶體融合并降解其內(nèi)容物;②小自噬:溶酶體的膜直接包裹長(zhǎng)壽命蛋白等,并在溶酶體內(nèi)降解;③分子伴侶介導(dǎo)的自噬(chaperonemediatedautophagy,CMA):胞質(zhì)內(nèi)蛋白結(jié)合到分子伴侶后被轉(zhuǎn)運(yùn)到溶酶體腔中,然后被溶酶體酶消化。CMA的底物是可溶的蛋白質(zhì)分子,在清理蛋白質(zhì)時(shí)有選擇性,而前兩者無明顯的選擇性。自噬過程啟動(dòng)后,要在度過危機(jī)后適時(shí)停止,否則將導(dǎo)致細(xì)胞發(fā)生不可逆的損傷。西安細(xì)胞自噬電鏡檢測(cè)
對(duì)不同的細(xì)胞,自噬的作用可能不同。河南自噬GFP-LC3B
在做有氧運(yùn)動(dòng)時(shí)(低強(qiáng)度的運(yùn)動(dòng)),這個(gè)低強(qiáng)度運(yùn)動(dòng)只需要足夠的額外能量,提供給身體能提高一點(diǎn)效率的需要;為了提高效率,它舍棄了那些我們不需要的廢棄細(xì)胞部分。如果增加運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度,身體會(huì)進(jìn)入高壓模式,自噬的效果開始減弱。因此,保持適當(dāng)運(yùn)動(dòng)強(qiáng)度才可以提高身體的自噬能力,主要原因是:(1)乙酰輔酶A的耗竭。當(dāng)你用盡燃料(葡萄糖)時(shí),身體開始啟動(dòng)自噬;當(dāng)用盡蛋白質(zhì)、脂肪、碳水化合物時(shí),身體開始提高自噬作用(因?yàn)闆]有食物可用)。(2)降低mTOR。mTOR是自噬的啟動(dòng)信號(hào),當(dāng)舉重、增肌,甚至增脂時(shí)就會(huì)釋放出自噬的信號(hào)。它們的關(guān)系很像胰島素和血糖的關(guān)系,當(dāng)自噬高時(shí),mTOR會(huì)低,而當(dāng)mTOR高時(shí),自噬能力會(huì)低,兩者不斷地保持一種平衡。當(dāng)你在做一些輕松的運(yùn)動(dòng),mTOR低,自噬能力提高;當(dāng)你做比較強(qiáng)的度運(yùn)動(dòng),mTOR升高,自噬能力降低。因?yàn)樯眢w只是在試圖修復(fù)和建造,而不是要消化所有儲(chǔ)備的能量。(3)提高AMPK。AMPK是體內(nèi)能量傳感器,當(dāng)你用盡燃料時(shí),這個(gè)傳感器將把開關(guān)打開,開始從體內(nèi)脂肪和整個(gè)身體中吸收能量,包含吸收老舊細(xì)胞,這就是自噬,這也是心肺運(yùn)動(dòng)如此強(qiáng)大的地方。河南自噬GFP-LC3B