細胞分泌外泌體的過程一般分為三個階段: (1) 質(zhì)膜內(nèi)陷, 形成早期內(nèi)吞小泡; (2) 內(nèi)吞小泡向內(nèi)萌發(fā)成熟, 形成多囊泡體; (3) 多囊泡體與質(zhì)膜融合, 并釋放出囊泡內(nèi)容物, 形成外泌體。外泌體具有獨特的理化性質(zhì), 其密度為1.13~1.19 g/mL, 由平均厚度小于5 nm的雙層脂膜所包裹, 具有典型杯狀形態(tài), 呈現(xiàn)為扁平球形。外泌體表面富含多糖鏈, 其質(zhì)膜主要由溶血磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、膽固醇、神經(jīng)酰胺和鞘磷脂構(gòu)成, 另有與細胞來源相關(guān)的部分特殊脂類。外泌體可攜帶蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)等生物活性大分子, 其中主要為蛋白質(zhì), 且大部分蛋白為所有來源外泌體所共有, 只有小部分與其來源有關(guān), 為其分泌細胞的特有蛋白, 能夠反映分泌細胞的類型和生理病理狀態(tài)。除此之外, 外泌體可攜帶大量mRNA和miRNA等核酸, 并將其運輸?shù)桨屑毎? 發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)功能。PD-L1除表達于細胞膜外，還可以外泌體型或可溶型形式分泌到細胞外。福建細胞外泌體WB
瘤釋放的外泌體可以通過削弱免疫效應(yīng)細胞的反應(yīng)和激發(fā)免疫抑制細胞的擴增，來營造一個免疫抑制的環(huán)境。瘤釋放的外泌體可以替代瘤細胞接受免疫系統(tǒng)的攻擊，從而幫助瘤細胞逃過免疫系統(tǒng)的識別。瘤釋放的外泌體可以引發(fā)炎癥，利用基質(zhì)浸潤細胞的反應(yīng)營造出利于瘤生長的微環(huán)境。研究表明，在過去短短的5年里，對外泌體的研究已經(jīng)取得了比較好的的進展。如今，收集并分析瘤釋放的外泌體已經(jīng)成為液體活檢的一個重要研發(fā)方向。靶向瘤釋放外泌體的治理策略將對改善病癥患者的命運發(fā)揮出舉足輕重的影響。江西血清外泌體提取可以通過檢測CD9、CD63和CD81等外泌體標志物來判斷外泌體是否存在。
外泌體基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)和臨床應(yīng)用的探索和深入研究對如何準確及高純度提取外泌體, 并完整保存提出了更高的技術(shù)要求。外泌體可通過差速超速離心在不同離心力下沉淀樣品中不同的雜質(zhì)組分, 并在100 000 ×g~200 000 ×g的轉(zhuǎn)速下獲取較純的外泌體。差速超速離心技術(shù)被認為是外泌體分離的“金標準”, 也是目前常用的外泌體分離和濃縮方法。該方法可通過結(jié)合0.22 μm或0.45 μm孔徑濾膜進行超濾來提高產(chǎn)物純度減少外泌體的聚集, 其分離效率容易受到加速度、轉(zhuǎn)子類型、旋轉(zhuǎn)半徑、沉降路徑長度以及樣品黏度等多種因素影響。
前列腺ai患者尿液外泌體中的miR-574-3p、miR-141-5p和miR-21-5p的表達水平明顯上升，表明這些miRNAs可用于前列腺ai的早期篩查。膽管ai是惡性程度較高的消化系統(tǒng)中流，發(fā)展隱蔽且臨床癥狀及體征出現(xiàn)晚，故給早期診斷帶來困難。高通量小RNA測序篩查了來自膽管ai和膽囊ai患者外泌體中一系列差異表達的miRNA，小RNA長度在正常個體、膽管ai患者和膽囊ai患者之間的分布存在明顯差異，膽管ai患者的外泌體中miR-96-5p、miR-151a-5p、miR-191-5p、miR-4732-3p明顯升高，而膽囊ai患者的外泌體中miR-151a-5p略有升高，為膽管ai和膽囊ai提供了一套新的生物診斷標志物。干細胞外泌體因在上皮組織的增殖、遷移、再生、炎癥和瘢痕控制等方面的作用。
為獲得外泌體的大小、濃度、形態(tài)及蛋白質(zhì)組成等信息，可以通過電鏡、動態(tài)光散射、納米顆粒跟蹤分析儀、蛋白質(zhì)免疫印跡、酶聯(lián)免疫吸附法、流式細胞儀等對外泌體進行表征。通過電鏡可獲得外泌體的形態(tài)信息，不同類型的顯微鏡由于操作環(huán)境不同，得到的外泌體形態(tài)存在差異。例如，在掃描電鏡、透射電鏡和原子力顯微鏡中，外泌體呈現(xiàn)囊泡獨有的茶托形，可能由于樣品在固定或染色過程中極度脫水，導(dǎo)致外泌體塌陷所致。與之相反，在冷凍電鏡中外泌體呈現(xiàn)圓形，由于不會脫水變性，所得的外泌體形態(tài)可能更加接近囊泡的真實狀態(tài)。另外，由于透射電鏡和原子力顯微鏡具有較高分辨率，也能夠提供外泌體磷脂雙分子層厚度、粒徑分布等信息。流式細胞分選法純度高，能特異性分選某種細胞來源的外泌體，不適于大體積樣本的分選。河南腦脊液外泌體
細胞外囊泡（EVs）表示了細胞間通訊的一個重要模式。福建細胞外泌體WB
外泌體含有的信號分子能反映分泌細胞的生理狀態(tài)和功能狀態(tài),甚至還會包含細胞病態(tài)相關(guān)的分子信息,從而提供了豐富的潛在的生物標志物分子源。瘤細胞分泌的外泌體通過對大分子物質(zhì)的轉(zhuǎn)移和傳遞調(diào)節(jié)臨近或遠處瘤生長的微環(huán)境,對促瘤生成及瘤增生、轉(zhuǎn)移發(fā)揮著不同的調(diào)節(jié)作用。瘤細胞分泌的外泌體還可以通過誘導(dǎo)耐藥和免疫抑制來促進瘤的發(fā)展。外泌體能在4℃保存96h,或是在-70℃下保存更長時間,這些特點使得外泌體可應(yīng)用于瘤的早期診斷和預(yù)后判斷。靶向瘤的外泌體的標志物可能為瘤疾病的診斷和治理提供新的指標和途徑,對高危人群早期診斷和早期治理以降低或減緩瘤病例的發(fā)生上發(fā)揮著重要的作用。福建細胞外泌體WB