外泌體的形成始于細(xì)胞內(nèi)陷，成熟于多囊泡胞內(nèi)體，終于膜融合。細(xì)胞通過內(nèi)吞作用產(chǎn)生小囊泡，小囊泡融合形成早期胞內(nèi)體（earlyendosome），在多個(gè)蛋白的協(xié)同調(diào)控下，早期胞內(nèi)體出芽形成含有多個(gè)腔內(nèi)小囊泡的多泡體（multivesicularbodies，MVB），這個(gè)過程中這些腔內(nèi)小囊泡（intraluminalvesicles，ILVs）會(huì)裝載各種核酸和蛋白質(zhì)等分子，泡內(nèi)體較后在GTPase家族中RAB酶的調(diào)節(jié)下與細(xì)胞膜融合。隨后，這些小囊泡會(huì)被釋放到細(xì)胞外，稱為外泌體。外泌體是通過細(xì)胞內(nèi)吞細(xì)胞膜融合主動(dòng)排除的物質(zhì)，大小均勻，而微泡是由細(xì)胞直接出芽脫落生成，大小不均一。外泌體型PD-L1穩(wěn)定且可與外泌體表面的主要組織相容性復(fù)合體Ⅰ協(xié)同作用。遼寧動(dòng)物組織外泌體提取
Knepper等通過對(duì)透射電鏡得到的200個(gè)囊泡進(jìn)行粒徑分析，結(jié)果表明尿液中外泌體的粒徑分布約為35～40nm，磷脂雙分子層厚度約為直徑的1/5～1/10。透射電鏡結(jié)合免疫金標(biāo)記法能夠得到外泌體表面特征分子的信息，有助于揭示外泌體的產(chǎn)生機(jī)制與來源。動(dòng)態(tài)光散射(dynamiclightscattering，DLS)和納米顆粒跟蹤分析(nanoparticletrackinganaly[1]sis，NTA)都是利用光學(xué)手段獲得囊泡粒徑分布的方法。兩者的不同之處在于動(dòng)態(tài)光散射通過檢測散射光的強(qiáng)度計(jì)算得到顆粒粒徑，而納米顆粒跟蹤分析通過追蹤單個(gè)粒子的運(yùn)動(dòng)軌跡計(jì)算得到樣品濃度、粒徑分布等信息。山東海洋生物組織外泌體粒徑檢測中流細(xì)胞來源的外泌體能促進(jìn)中流的轉(zhuǎn)移。
流式細(xì)胞技術(shù)針對(duì)外泌體的表面抗原標(biāo)記物進(jìn)行檢測，能夠?qū)崿F(xiàn)外泌體的高通量、多通道分析。但是由于外泌體的粒徑小、折射率低，所以采用常規(guī)的流式細(xì)胞儀進(jìn)行檢測時(shí)往往需要將外泌體與beads連接以增大表面積、增強(qiáng)反射，操作耗時(shí)又費(fèi)力。Tian等搭建了一種高靈敏度的流式細(xì)胞儀(HSFCM)，將可檢測的外泌體粒徑降至40nm，能夠在不連接beads的情況下實(shí)現(xiàn)每分鐘10000個(gè)外泌體的檢測，并且能夠結(jié)合免疫熒光的方法進(jìn)行外泌體標(biāo)志蛋白質(zhì)的定量檢測，目前該儀器已商品化。
外泌體攜帶的與疾病進(jìn)展緊密關(guān)聯(lián)的分子標(biāo)志物可用于疾病進(jìn)展的監(jiān)視、檢測和診斷, 是一種潛在的非侵入性生物標(biāo)志物。由于外泌體本身可以作為抗原提呈小泡, 且有較長的循環(huán)半衰期, 可用于免疫學(xué)相關(guān)研究, 同時(shí), 源自ai細(xì)胞的外泌體可以被工程化, 發(fā)揮免疫刺激作用, 可作為中流疫苗應(yīng)用于ai癥的免疫zhiliao。此外, 外泌體穩(wěn)定而廣fan地分布在qi官和組織中, 具有低免疫原性、高耐受性等特點(diǎn), 且良好的膜滲透性可使其通過血腦屏障, 因此可用作組織和qi官特異藥物輸送系統(tǒng), 兼有高輸送效率和低副作用。因此, 外泌體適合用作藥物載體遞送zhiliao劑(如阿霉素或姜黃素), zhiliao性miRNA、siRNA等核酸和蛋白質(zhì), 運(yùn)送至靶位點(diǎn)后實(shí)現(xiàn)靶向zhiliao。外泌體觀察到它們可以在體內(nèi)刺激免疫應(yīng)答。
Vlassov等人發(fā)表的一篇外泌體的提取方法及組成的專利文獻(xiàn)中介紹，通過終濃度為8%的PEG6000與生物體液共孵育14h后，10000xg離心1h，可將直徑在30-150nm之間，且包含豐富RNA的外泌體沉淀下來。因此采用終濃度為8%的PEG6000沉淀血清中的外泌體，為了進(jìn)一步純化胎盤相關(guān)外泌體，將獲得的包含外泌體的沉淀用PBS重新懸浮后，加入非線性蔗糖密度梯度層，10000xg超速離心5h，將分層液采用PEG6000進(jìn)行2次沉淀。經(jīng)過多次實(shí)驗(yàn)反復(fù)驗(yàn)證，確定同時(shí)表達(dá)外泌體標(biāo)志蛋白分子及胎盤特異性蛋白分子的胎盤來源外泌體所在密度層。外泌體能夠影響級(jí)聯(lián)反應(yīng)的每一步，因此可作為病灶治理的靶點(diǎn)。湖北植物組織外泌體蛋白標(biāo)志物檢測
突狀細(xì)胞釋放的外泌體可以強(qiáng)化殺傷性T細(xì)胞對(duì)癥狀細(xì)胞的特異性反應(yīng)。遼寧動(dòng)物組織外泌體提取
當(dāng)外泌體在第1次被發(fā)現(xiàn)的時(shí)候，外泌體被認(rèn)為是細(xì)胞排泄廢物的一種方式，如今隨著大量對(duì)其生物來源、其物質(zhì)構(gòu)成及運(yùn)輸、細(xì)胞間信號(hào)的傳導(dǎo)以及在體液中的分布的研究發(fā)現(xiàn)外泌體具有多種多樣的功能。外泌體的功能取決于其所來源的細(xì)胞類型，其可參與到機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原提呈、細(xì)胞遷移、細(xì)胞分化、瘤侵襲等方方面面。有研究表明瘤來源的外泌體參與到瘤細(xì)胞與基底細(xì)胞的遺傳信息的交換，從而導(dǎo)致大量新生血管的生成，促進(jìn)了瘤的生長與侵襲。遼寧動(dòng)物組織外泌體提取