通過改變外泌體的溶解性或者分散性, 可以將它們從體液或細(xì)胞培養(yǎng)液中沉淀出來。常見的方法是使用聚乙二醇或凝集素來沉淀樣品中的外泌體。聚乙二醇是一種水溶性非離子化合物, 不含水的聚乙二醇可以通過“劫持”水分子增加疏水性蛋白和脂質(zhì)分子的相互結(jié)合力, 從而迫使其脫離溶液, 進(jìn)而在低速離心條件下發(fā)生沉降。凝集素是一種具有高度特異性的碳水化合物結(jié)合蛋白, 可通過與外泌體質(zhì)膜糖蛋白上的糖鏈結(jié)合來改變外泌體的溶解性。此外, 還可使用魚精蛋白、醋酸鈉、有機溶劑沉淀等方法進(jìn)行沉淀分離。蛋白質(zhì)分子在外泌體信號傳遞過程中起到了非常重要的作用。上海外泌體wb檢測
雖然外泌體在疾病的診斷上有天然優(yōu)勢，但在臨床應(yīng)用上仍有一些限制：外泌體的提取方法金標(biāo)準(zhǔn)仍然是差速離心法，但這種方法費時費力且提取效率較低，難以進(jìn)行臨床推廣和應(yīng)用；而商業(yè)化的試劑盒質(zhì)量參差不齊，往往導(dǎo)致提取物雜質(zhì)過多，且其售價較高。外泌體的定量是采用顆粒濃度定量，蛋白濃度定量，亦或是核酸濃度定量，目前仍存有爭議。由于傳統(tǒng)的內(nèi)參并不適用于外泌體，在實時熒光定量PCR檢測靶分子含量時內(nèi)參的選擇尚沒有統(tǒng)一的標(biāo)準(zhǔn)。外泌體分子標(biāo)志物的研究還處于初級階段。目前外泌體研究的整個流程中成本都很高。天津外泌體wbNTA技術(shù)已被外泌體研究領(lǐng)域認(rèn)可為外泌體表征手段之一。
外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙，快速直達(dá)基底層起效；富含100+多種胞外基質(zhì)蛋白、胞外基質(zhì)酶以及細(xì)胞黏附分子；能夠有效促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞（HDFs）中I型膠原蛋白、成纖維蛋白，促進(jìn)皮膚有效快速再生（Rejuvenation）；能夠有效促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞（HDFs）彈性蛋白生成，保持皮膚飽滿和彈性；有效降低皮膚成纖維細(xì)胞（HDFs）中膠原蛋白酶(MMP-1)的生成從而防止皮膚間質(zhì)中IIIIII型膠原蛋白被降解；富含活性物質(zhì)能夠促進(jìn)皮膚有些血管的修復(fù)與重建再生。
臨床上，干細(xì)胞外泌體主要治理燒傷、燙傷、皮膚潰瘍、再生健康皮膚。在護膚方面，主要是對外傷受損、衰老進(jìn)行修復(fù)，比較全的調(diào)理皮膚、改善膚質(zhì)，令肌膚恢復(fù)年輕、健康的狀態(tài)。干細(xì)胞外泌體可以再生皮膚和強化皮膚屏障，具有比較好的再生效果，且沒有其它副作用。干細(xì)胞外泌體或?qū)⒊蔀橹?、特異性皮炎等寬泛炎癥性皮膚疾病的一種有效且安全可靠的治理方法。如今，干細(xì)胞外泌體已在幾種不同類型的疾病中顯示出令人鼓舞的治理效果，包括腎損傷、心臟損傷、腦損傷和肝肺損傷等。主要機制可能是外泌體介導(dǎo)了MSC的旁分泌/自分泌機制。外泌體由于包含的內(nèi)容物具有明顯的組織特異性，為其能成為瘤早期診斷的生物標(biāo)志物提供了重要保障。
人體內(nèi)多種細(xì)胞及體液均可分泌外泌體，包括內(nèi)皮細(xì)胞、免疫細(xì)胞、血小板、平滑肌細(xì)胞等。當(dāng)其由宿主細(xì)胞被分泌到受體細(xì)胞中時，外泌體可通過其攜帶的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等來調(diào)節(jié)受體細(xì)胞的生物學(xué)活性。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊主要通過以下三種方式：一是外泌體膜蛋白可以與靶細(xì)胞膜蛋白結(jié)合，進(jìn)而喚醒靶細(xì)胞細(xì)胞內(nèi)的信號通路。二是在細(xì)胞外基質(zhì)中，外泌體膜蛋白可以被蛋白酶剪切，剪切的碎片可以作為配體與細(xì)胞膜上的受體結(jié)合，從而喚醒細(xì)胞內(nèi)的信號通路。有報道稱一些外泌體膜上蛋白在其來源細(xì)胞膜上未能檢測出。三是外泌體膜可以與靶細(xì)胞膜直接融合，非選擇性的釋放其所含的蛋白質(zhì)、mRNA以及microRNA。在細(xì)胞通訊過程中，細(xì)胞分泌的大小在40～100nm之間的外泌體具有負(fù)載“貨物”并將其傳遞給靶細(xì)胞的能力。天津外泌體wb
示蹤病毒使用CD9作為生物標(biāo)記，通過將CD9與熒光蛋白偶聯(lián)，帶熒光的膜蛋白會在表達(dá)至外泌體膜上。上海外泌體wb檢測
目前市面上開發(fā)的外泌體提取試劑盒，是根據(jù)外泌體表面由類似于細(xì)胞膜的脂質(zhì)雙分子層具有一定疏水性這一特性，用試劑捆綁水分子，從而可通過常規(guī)離心收集沉淀獲取外泌體。這種快速提取外泌體的方法雖簡便快捷、樣本需求少、對設(shè)備要求低，但與差速離心方法類似，其分離得到的沉淀包含其他細(xì)胞分泌的囊泡，且血清中含有大量血清蛋白分子，成分復(fù)雜，很可能摻雜一些未知的疏水大分子物質(zhì)。Sabapatha等曾根據(jù)來源于胎盤的外泌體表面特異表達(dá)PLAP這一特性，使用耦合到磁珠的抗PLAP抗體，采用磁珠分選方法分離血漿中胎盤來源外泌體。此法可以提取的胎盤外泌體量少，不適用于大規(guī)模提取制備，且免疫磁珠價格昂貴，不利于提取技術(shù)的普及。上海外泌體wb檢測