細(xì)胞分泌外泌體的過程一般分為三個階段: (1) 質(zhì)膜內(nèi)陷, 形成早期內(nèi)吞小泡; (2) 內(nèi)吞小泡向內(nèi)萌發(fā)成熟, 形成多囊泡體; (3) 多囊泡體與質(zhì)膜融合, 并釋放出囊泡內(nèi)容物, 形成外泌體。外泌體具有獨特的理化性質(zhì), 其密度為1.13~1.19 g/mL, 由平均厚度小于5 nm的雙層脂膜所包裹, 具有典型杯狀形態(tài), 呈現(xiàn)為扁平球形。外泌體表面富含多糖鏈, 其質(zhì)膜主要由溶血磷脂酸、磷脂酰絲氨酸、膽固醇、神經(jīng)酰胺和鞘磷脂構(gòu)成, 另有與細(xì)胞來源相關(guān)的部分特殊脂類。外泌體可攜帶蛋白質(zhì)、核酸和脂質(zhì)等生物活性大分子, 其中主要為蛋白質(zhì), 且大部分蛋白為所有來源外泌體所共有, 只有小部分與其來源有關(guān), 為其分泌細(xì)胞的特有蛋白, 能夠反映分泌細(xì)胞的類型和生理病理狀態(tài)。除此之外, 外泌體可攜帶大量mRNA和miRNA等核酸, 并將其運輸?shù)桨屑?xì)胞, 發(fā)揮相應(yīng)的生物學(xué)功能。外泌體可以作為藥物治理的遞送系統(tǒng)。福建細(xì)胞上清外泌體
幾乎所有的細(xì)胞都可以在自發(fā)或在一定刺激條件下產(chǎn)生外泌體，不同的細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體具有不同的功能，這些外泌體參與了一系列生理和病理過程，如ai癥發(fā)生與發(fā)展、抗原呈遞、免疫調(diào)節(jié)、組織愈合等。來自血細(xì)胞(包括血小板、白細(xì)胞和紅細(xì)胞)的外泌體具有參與凝血、提供促血管生成因子、誘導(dǎo)血管生成等生理功能;妊娠期外泌體能夠影響局部血管生成、調(diào)節(jié)分化、激huo免疫、促進胚胎發(fā)育;肝臟細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體有利于維護肝臟內(nèi)穩(wěn)態(tài)。由此可見，正常細(xì)胞產(chǎn)生的外泌體對維持機體的正常生命活動起重要作用。腹膜透析液外泌體芯片各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達，由其決定外泌體被運輸往哪一種細(xì)胞。
利用蛋白質(zhì)免疫印跡和酶聯(lián)免疫吸附分析技術(shù)可以對外泌體標(biāo)志性蛋白質(zhì)進行定性定量分析。其中蛋白免疫印跡是外泌體的經(jīng)典表征手段之一，操作時往往需要細(xì)胞裂解液作為陰性對照。常用的外泌體標(biāo)志性蛋白質(zhì)包括四跨膜蛋白質(zhì)CD63、CD81、CD9、中流易感基因101蛋白(TSG101)、水通道蛋白2(AQP2，尿液中)和凋亡誘導(dǎo)因子6相互作用蛋白(Alix)等，內(nèi)參蛋白質(zhì)可以是肌動蛋白(βActin)或甘油醛－3-磷酸脫氫酶，陰性對照蛋白可以是阻抑素(PHB，線粒體標(biāo)志蛋白)或鈣聯(lián)結(jié)蛋白Calnexin。在酶聯(lián)免疫吸附析法中，外泌體裂解液通過固載有抗體的固相基質(zhì)，隨后與檢測抗體共孵育。兩種方法均存在操作繁瑣、耗時長的問題，相比較而言，酶聯(lián)免疫吸附分析法比蛋白質(zhì)免疫印跡法更加快速，適用于高通量分析。
利用抗ai癥藥物進行中流zhiliao是抑制中流的一個重要方法，不過目前抗ai癥藥物的運載存在著種種挑戰(zhàn)，主要體現(xiàn)在以下幾點:(1)抗ai癥藥物的疏水性;(2)抗ai癥藥物的毒性以及非靶向性;(3)易被人體清chu，體內(nèi)循環(huán)的半衰期很短等。采用外泌體運輸抗ai癥藥物，可以提高藥物體系的水溶性，降低藥物對人體的毒性以及避免被網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)捕捉從而延長其循環(huán)時間。近期，兩種抗ai癥藥物———紫杉醇(PTX)和阿霉素(DOX)已經(jīng)成功被載入外泌體中，并對其抗中流作用進行了研究?？刹扇⊥ㄟ^透射電鏡確定外泌體大小。
在利用外泌體運輸PTX進行抗中流的研究中，由于間充質(zhì)干細(xì)胞可以歸巢(homing)至中流細(xì)胞微環(huán)境并且可以不通過基因操作即可對PTX運輸，因此Pessina等采用間充質(zhì)干細(xì)胞SR4987作為分泌外泌體的母代細(xì)胞，而后將SR4987與PTX共混，使SR4987分泌的外泌體含有PTX，再利用超速離心法將載有PTX的外泌體分離出來，研究其對體外人胰腺ai細(xì)胞株的影響。結(jié)果表明外泌體可以有效的運載PTX并不破壞其功能，小泡(主要指外泌體)溶液的蛋白質(zhì)濃度在0.047～0.095mg/mL之間時可以誘導(dǎo)中流細(xì)胞凋亡50%，這種抑制效果與純PTX對體外ai細(xì)胞的抑制效果相當(dāng)。蛋白質(zhì)分子在外泌體信號傳遞過程中起到了非常重要的作用。杭州外泌體提取
樹突狀細(xì)胞來源的外泌體可有效誘導(dǎo)對寄生蟲和弓形蟲的保護性體液和細(xì)胞免疫應(yīng)答。福建細(xì)胞上清外泌體
外泌體(exosomes)是一類由細(xì)胞分泌到胞外的囊泡。與其他兩種胞外囊泡(微囊泡和凋亡小體)相比，外泌體在產(chǎn)生方式、尺寸、密度和內(nèi)容物等方面存在明顯差異。不同于微囊泡“出芽”的形成方式，外泌體主要通過胞吐過程釋放至細(xì)胞外:首先細(xì)胞膜向內(nèi)凹陷形成早期核內(nèi)體(earlyendosomes)，早期核內(nèi)體進一步內(nèi)陷形成多泡體(multivesicularbodies，MVBs)，其中一部分多泡體與溶酶體(lysosome)融合，進而降解;另一部分與細(xì)胞膜融合，將其內(nèi)部所包含的囊泡釋放至胞外，即為外泌體。外泌體具有獨特的物理化學(xué)性質(zhì)，其直徑為30～200nm，密度為1.13～1.19g/mL，組成包括細(xì)胞來源相關(guān)的脂質(zhì)、蛋白質(zhì)、RNA、DNA等物質(zhì)，在其表面連接有大量的糖鏈，如甘露糖、聚乳糖胺和α2，6-唾液酸等。福建細(xì)胞上清外泌體