外泌體的提取方法在外泌體載藥系統(tǒng)中應(yīng)用——免疫親和層析法。利用生物體內(nèi)存在的抗原、抗體之間高度特異性的親和力進(jìn)行分離的方法,主要用于生物大分子的分離、純化。將其應(yīng)用于外泌體的分離主要是借助外泌體表面的特異性抗體,如TSG101或四跨膜蛋白。此方法的原理是利用抗原抗體的特異性結(jié)合,只有囊泡表面有特異性的抗體才可以被識別,這使得提取的外泌體純度高,但是產(chǎn)量低。分別用超速離心、密度梯度離心和免疫層析法,從血漿和細(xì)胞上清中提取外泌體蛋白,結(jié)果表明,免疫親和層析法得到的外泌體表面存在多種標(biāo)記蛋白(Alix、CD9、CD63),同時(shí),ELISA和PCR結(jié)果也證明了該方法的可行性。裝載紫杉醇的外泌體靶向給藥系統(tǒng)通過微流控技術(shù)純化后可用于抗中流zhiliao。廣西外泌體載藥研究進(jìn)展
利用外泌體進(jìn)行體內(nèi)藥物遞送時(shí)必須考慮以下因素：①外泌體和細(xì)胞之間相互作用的模式是否與所遞送的zhiliao劑作用機(jī)制一致，是否會對所遞送的zhiliao劑功效有所影響；②外泌體廣fan參與了機(jī)體的生物過程，大量的外源性外泌體的存在可能會破壞內(nèi)源性外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間通訊；③一些尚不明了甚至未知的機(jī)制可能會導(dǎo)致不良副作用，如外泌體表面蛋白質(zhì)的脫靶信號轉(zhuǎn)導(dǎo)，還有其他如ai基因和病毒miRNA，或朊病毒顆粒以及外泌體純化過程中未能去除的可溶性顆粒因子等物質(zhì)在外泌體中一起遞送，均有可能產(chǎn)生不良副作用。提示純化方案中采用嚴(yán)格的質(zhì)控與安全性分析使這些復(fù)雜的影響因素小化，對體內(nèi)和體外研究至關(guān)重要。廣東整體實(shí)驗(yàn)外泌體載藥參考價(jià)利用成纖維細(xì)胞樣干細(xì)胞來源的外泌體裝載靶向KRAS的siRNA，可以抑制胰腺ai的生長。
外泌體載藥系統(tǒng)一直是眾多研究者關(guān)注的焦點(diǎn)。外泌體作為一種潛在的理想型藥物遞送載體，可以利用化學(xué)和基因工程等方法對其進(jìn)行內(nèi)部及膜表面工程化改造，將化學(xué)藥物、功能短肽、小干擾RNA等多種生物活性物質(zhì)包載到外泌體中，可實(shí)現(xiàn)特定類型的細(xì)胞或組織的靶向藥物遞送。外泌體的生成是一個(gè)自然過程，與其他人工合成的載藥系統(tǒng)相比，其裝載方案有多種，如分泌前細(xì)胞工程裝載和純化后外泌體裝載。但需要注意的是，外泌體裝載合成的反應(yīng)條件可能會對外泌體及其母細(xì)胞產(chǎn)生不利的影響，而且體外實(shí)驗(yàn)和體內(nèi)動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)都需要大量的母細(xì)胞分泌產(chǎn)生足夠的外泌體。因此，如何提高外泌體載藥系統(tǒng)的產(chǎn)量應(yīng)用于臨床疾病的zhiliao將是一個(gè)挑戰(zhàn)。
通過體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果得出，負(fù)載miＲ-132的間充質(zhì)干細(xì)胞外泌體能夠明顯增加內(nèi)皮細(xì)胞的管腔樣結(jié)構(gòu);在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)中，外泌體預(yù)處理的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞具有更強(qiáng)的血管生成能力。此外，在小鼠缺血心臟中植入的包載miＲ-132的外泌體明顯增強(qiáng)了梗塞周圍區(qū)域新血管生成并保護(hù)了心臟功能。心肌梗死后，移植MSCs的zhiliao作用也可能是由負(fù)載miＲ-125b-5p的外泌體改善自噬流實(shí)現(xiàn)的。有研究利用重組腺病毒介導(dǎo)miＲ-486基因修飾MSCs，結(jié)果發(fā)現(xiàn)，其能夠提高M(jìn)SC-Exo中miＲ-486的水平，而且發(fā)現(xiàn)高表達(dá)miＲ-486的MSC-Exo具有促進(jìn)心肌細(xì)胞增殖、遷移以及抑制心肌細(xì)胞凋亡的作用，有望成為心臟再生修復(fù)的新策略。外泌體具有透過血腦屏障的能力，包載藥物的外泌體可通過鼻腔給藥的方式到達(dá)腦實(shí)質(zhì)zhiliao腦部疾病。
乳腺ai是發(fā)生在乳腺上皮組織的惡性中流，是女性致死率較高的ai種之一。紫杉醇(PTX)是一種高效、廣譜的抗ai藥物，其不jin能殺死中流細(xì)胞，還可以調(diào)節(jié)免疫功能。使用天然殺傷細(xì)胞來源外泌體(NK－Exos)運(yùn)載紫杉醇形成載藥外泌體(PTX－NK－Exos)作用于乳腺ai細(xì)胞的抗中流效果。PTX在包埋過程中會部分嵌入到外泌體的脂質(zhì)雙層中，導(dǎo)致載藥后外泌體的粒徑增加?？怪辛鲗?shí)驗(yàn)表明，與游離PTX相比，相同劑量的PTX－NK－Exos載藥系統(tǒng)對人乳腺aiMCF－7細(xì)胞有較高的抑制率。外泌體可增強(qiáng)PTX的細(xì)胞內(nèi)化，提高zhiliao效果。姜黃素裝載在牛奶來源的外泌體經(jīng)口服方式可以有效地調(diào)控靶細(xì)胞。廣西外泌體載藥研究進(jìn)展
MHS來源外泌體裝載連翹苷（phil）對外泌體的特異蛋白（CD63,Alix）的表達(dá)無影響。廣西外泌體載藥研究進(jìn)展
去甲斑蝥素（NTCD）是中藥斑蝥所含活性成分斑蝥素的小分子去甲基化衍生物。研究表明，NTCD能在一定程度上提高ai細(xì)胞線粒體的呼吸控制率（PCR）及溶酶體酶的活性，干擾ai細(xì)胞分裂，抑制其ＤＮＡ合成，對原發(fā)性肝ai、胃ai、食管ai、白血病、結(jié)腸ai及乳腺ai等有明顯的zhiliao作用。目前NTCD在臨床上主要有口服和靜脈滴注２種給藥途徑，但由于NTCD被機(jī)體吸收后廣fan分布于各組織qi官，不jin對泌尿qi官有較強(qiáng)的毒性，而且對胃、腸道也會產(chǎn)生嚴(yán)重的不良反應(yīng)。外泌體是由細(xì)胞活化或受到一定刺激時(shí)分泌到細(xì)胞外的粒徑為40-100nm的囊泡。利用外泌體包載NTCD，能使NTCD即使處在惡劣的胞外環(huán)境中，也能受到保護(hù)而不被稀釋和降解，進(jìn)一步延長其在生物體內(nèi)的留存時(shí)長，并能逃過網(wǎng)狀內(nèi)皮系統(tǒng)的捕獲和qing除，使中流細(xì)胞內(nèi)的藥物濃度增加，提高生物利用度。廣西外泌體載藥研究進(jìn)展