血液外泌體circRNA測序

外泌體有很多潛在優(yōu)勢，但是外泌體在藥物遞送中的應(yīng)用研究才剛剛起步，尚有許多問題需解決：如何修飾外泌體的靶向性：缺氧瘤細(xì)胞來源的外泌體傾向于向缺氧瘤組織內(nèi)募集；此外，還可通過在外泌體膜表面設(shè)計與靶細(xì)胞特異性結(jié)合的抗體、配體或受體來實現(xiàn)。如何提高藥物裝載效率：目前主要有①前裝載方法（首先將藥物加載到母細(xì)胞中，隨后外泌體形成并包裹藥物分泌到細(xì)胞外，常用的方法如轉(zhuǎn)染、共孵育等）；②后裝載方法（直接將藥物加載到外泌體中，例如孵育、電穿孔、超聲、擠出、凍融循環(huán)等）；③其他裝載方法（主要是通過生物工程修飾母細(xì)胞來實現(xiàn)）。如何實現(xiàn)外泌體的大量生產(chǎn)：目前大規(guī)模生產(chǎn)外泌體的方法主要是自發(fā)生產(chǎn)和非自發(fā)生產(chǎn)。外泌體可攜帶蛋白質(zhì)、脂類、核酸（miRNAs，ncRNAs）等多種生物功能大分子。血液外泌體circRNA測序

外泌體起源于多泡體,以細(xì)胞管腔內(nèi)囊泡的形式存在.細(xì)胞的胞吞形成帶有外源性抗體的內(nèi)體小泡,在高爾基體等細(xì)胞器的作用下形成早期核內(nèi)體,早期核內(nèi)體的囊膜內(nèi)陷、突入形成多個小囊泡,并選擇性的接受細(xì)胞內(nèi)的蛋白質(zhì)、核酸、脂類等成分,較終形成晚期核內(nèi)體,晚期核內(nèi)體與細(xì)胞膜融合,并將外泌體排出胞外。這是一個連續(xù)而又復(fù)雜的過程,從內(nèi)體小泡到成熟外泌體,需要在各細(xì)胞器間傳遞并包裝,包括:TSG101、Alix蛋白、CD63、CD81、神經(jīng)酰胺、膽固醇等。外泌體的排出跟其他胞內(nèi)小泡大致相同,受到Rab家族蛋白的調(diào)控,敲除細(xì)胞的Rab27a和Rab27b蛋白后,外泌體不能排出,且從高爾基體到晚期核內(nèi)體的囊泡運輸不受影響。福建外泌體lncRNA測序外泌體是細(xì)胞分泌囊泡的一種亞型，存在于生物體液中，并參與多種生理和病理過程。

外泌體由于包含的內(nèi)容物具有明顯的組織特異性，為其能成為瘤早期診斷的生物標(biāo)志物提供了重要保障。但目前對于外泌體miRNA、LnkRNA等的檢測方法還不成熟，限制了外泌體用于疾病診斷中的應(yīng)用?；谕饷隗w的診斷產(chǎn)品獲得FDA批準(zhǔn)上市，很大程度的增加了研發(fā)企業(yè)的信心。外泌體的異質(zhì)性又決定了外泌體藥物遞送系統(tǒng)不能提供一個普適的遞藥策略，必須根據(jù)所傳遞治理物質(zhì)的類型、目標(biāo)組織的特點等進行針對性的進行策略調(diào)整。良好的生物兼容性、穩(wěn)定性和內(nèi)在靶向性等使外泌體在藥物遞送方向大有潛力。

尺寸排除色譜法是使用聚合物凝膠或類似的固定相柱進行外泌體分離的技術(shù), 樣品以重力滴落的方式收集。流體力學(xué)半徑較小的樣品組分進入凝膠孔隙后, 需耗費相對較長的時間通過凝膠柱, 導(dǎo)致延遲洗脫, 實現(xiàn)不同粒徑大小顆粒分離。尺寸排除色譜法可以與差速離心法結(jié)合而不會明顯損失外泌體, 保證產(chǎn)量的同時可有效去除雜質(zhì)蛋白, 更適合目標(biāo)蛋白質(zhì)組學(xué)和miRNA的分析。靜水過濾透析法主要利用靜水壓力迫使樣品中不同特定大小分子先后通過透析管, 其中溶劑和小溶質(zhì)很容易通過透析管, 而較大的顆粒, 如外泌體和其他囊泡, 仍留在透析管中而被收集。前列腺ai患者的血漿和尿液中的外泌體含有更多的前列腺特異抗原(PSA)。

外泌體(Exosome)是由細(xì)胞分泌而來的微小囊泡，直徑約為30-200 nm，形態(tài)也呈現(xiàn)出多樣性。長鏈非編碼RNA（long non-coding RNA）是一類轉(zhuǎn)錄本長度超過200nt、不編碼蛋白的RNA。 近年來的研究表明lncRNA能在標(biāo)貫遺傳、轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后水平上調(diào)控基因表達(dá)，參與了X染色體沉默、基因組印記以及染色質(zhì)修飾、轉(zhuǎn)錄jihuo、轉(zhuǎn)錄干擾、核內(nèi)運輸?shù)榷喾N重要的調(diào)控過程，與人類疾病的發(fā)生、發(fā)展和防治都有著密切聯(lián)系。 lncRNA芯片對lncRNA進行功能研究也被更多的關(guān)注，通過設(shè)計不同的lncRNA探針，可以更加快速、高通量地篩選出疾病或特定生物學(xué)過程中差異表達(dá)的lncRNA和mRNA信息，找到lncRNA的靶基因位點深入分析調(diào)控機制。外泌體作為細(xì)胞間信號傳導(dǎo)的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標(biāo)記話題比較熱門。吉林CD81外泌體慢病毒包裝

結(jié)果表明，PS親和法可以檢測到許多目前為止都無法檢測的外泌體蛋白質(zhì)和RNA。血液外泌體circRNA測序

外泌體的提取方法：免疫磁珠法，這種方法可以保證外泌體形態(tài)的完整，特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備，但是非中性pH和非生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性，不便進行下一步的實驗。PS親和法，該方法將PS（磷脂酰絲氨酸）與磁珠結(jié)合，利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似，獲得的外泌體形態(tài)完整，純度較高。由于不使用變性劑，不影響外泌體的生物活性，外泌體可用于細(xì)胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。色譜法，這種方法分離到的外泌體在電鏡下大小均一，但是需要特殊的設(shè)備，應(yīng)用不寬泛。血液外泌體circRNA測序