外泌體的形成始于細胞內陷,成熟于多囊泡胞內體,終于膜融合。細胞通過內吞作用產生小囊泡,小囊泡融合形成早期胞內體(earlyendosome),在多個蛋白的協(xié)同調控下,早期胞內體出芽形成含有多個腔內小囊泡的多泡體(multivesicularbodies,MVB),這個過程中這些腔內小囊泡(intraluminalvesicles,ILVs)會裝載各種核酸和蛋白質等分子,泡內體較后在GTPase家族中RAB酶的調節(jié)下與細胞膜融合。隨后,這些小囊泡會被釋放到細胞外,稱為外泌體。外泌體是通過細胞內吞細胞膜融合主動排除的物質,大小均勻,而微泡是由細胞直接出芽脫落生成,大小不均一。外泌體天然的可以攜帶遺傳到靶細胞中,從而在生物學和致病過程中誘導遺傳修飾。江蘇植物莖組織外泌體分離
外泌體含有的信號分子能反映分泌細胞的生理狀態(tài)和功能狀態(tài),甚至還會包含細胞病態(tài)相關的分子信息,從而提供了豐富的潛在的生物標志物分子源。瘤細胞分泌的外泌體通過對大分子物質的轉移和傳遞調節(jié)臨近或遠處瘤生長的微環(huán)境,對促瘤生成及瘤增生、轉移發(fā)揮著不同的調節(jié)作用。瘤細胞分泌的外泌體還可以通過誘導耐藥和免疫抑制來促進瘤的發(fā)展。外泌體能在4℃保存96h,或是在-70℃下保存更長時間,這些特點使得外泌體可應用于瘤的早期診斷和預后判斷。靶向瘤的外泌體的標志物可能為瘤疾病的診斷和治理提供新的指標和途徑,對高危人群早期診斷和早期治理以降低或減緩瘤病例的發(fā)生上發(fā)揮著重要的作用。河南植物組織外泌體干細胞外泌體可以再生皮膚和強化皮膚屏障,具有很好的再生效果,且沒有其它副作用。
l 親脂染料標記外泌體:目前已發(fā)表的外泌體文章中,外泌體大多使用親脂性染料進行標記,體內和體外都有較多應用。親脂性染料主要分為兩大類,一類是PKH67(綠色熒光)/PKH26(紅色熒光),由于它們可以與外泌體的脂質雙層膜穩(wěn)定結合,所以染色效果較好,應用較普遍。第二類是Di系列的親脂性染料,包括DiI(橙色熒光)、DiO(綠色熒光)、DiD(紅色熒光)、DiR(深紅色熒光)。其中DiR的紅外熒光可穿透細胞和組織,在活成像中用來示蹤。
外泌體(Exosome)開始被認為是毫無作用的“垃圾”,但隨著研究的不斷深入,人們發(fā)現(xiàn)事實并非如此,外泌體(Exosome)是具有功能活性并可進行細胞間信息傳遞的微囊泡。外泌體(Exosome)介導瘤細胞的免疫耐受。瘤細胞來源的外泌體(Exosome)本身可作為瘤抗原,因此,瘤來源的外泌體(Exosome)既是一種抗原呈遞系統(tǒng),同時也是瘤排斥抗原的來源。瘤來源的外泌體(Exosome)能夠通過傳遞某些抑制信號,在機體免疫應答過程中起負性調節(jié)作用,誘導瘤細胞形成免疫耐受,從而逃避免疫細胞的殺傷。干細胞外泌體可直接促進血管生成,改善大腦缺氧后的損傷。
外泌體目前被視為特異性分泌的膜泡,參與細胞間通訊,對外泌體的研究興趣日益增長,無論是研究其功能還是了解如何將其用于微創(chuàng)診斷的開發(fā)。外泌體富含膽固醇和鞘磷脂。2007年, Valadi等發(fā)現(xiàn)鼠的肥大細胞分泌 的 exosome可以被人的肥大細胞捕獲,并且其攜帶的mRNA成分可以進入細胞漿中可以被翻譯成蛋白質,不只是是mRNA,exosomes所轉移的microRNA同樣具有生物活性,在進入靶細胞后可以靶向調節(jié)細胞中mRNA的水平。這一發(fā)現(xiàn)使得研究人員對exosome的研究熱情激增,截止目前已經通過286項研究發(fā)現(xiàn)了41860種蛋白質、2838種microRNA、3408種mRNA。外泌體能負載的治理物質包括小分子化合物、蛋白質、寡核苷酸等,且在體液中寬泛分布且具有定向歸巢能力。江蘇植物莖組織外泌體分離
科學家也嘗試利用外泌體的壓制發(fā)病機制功能。江蘇植物莖組織外泌體分離
外泌體的提取主要包括以下幾種方式:一是超速離心法,這是目前外泌體提取常用的方法 。此種方法得到的外泌體量多,但是純度不足,電鏡鑒定時發(fā)現(xiàn)外泌體聚集成塊, 由于微泡和外泌體沒有非常統(tǒng)一的鑒定標準,也有一些研究認為此種 方法得到的是微泡不是外泌體 。二是過濾離心, 這種操作簡單、省時,不影響外泌體的生物活性 ,但同樣存在純度不足的問題。三是密度梯度離心法, 用此種方法分離到 的外泌體純度 高,但是前期準備工作繁雜,耗時,量少。江蘇植物莖組織外泌體分離