l 慢病毒介導(dǎo)CD63-GFP表達(dá):將外泌體的特定蛋白CD63和綠色熒光蛋白GFP的表達(dá)元件構(gòu)建成質(zhì)粒再包裝到慢病毒中,隨后用此慢病毒傳播細(xì)胞,使細(xì)胞分泌的外泌體帶有綠色熒光。外泌體功能研究:將標(biāo)記的外泌體加入受體細(xì)胞培養(yǎng)基中,與受體細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng),觀察細(xì)胞的功能變化,如細(xì)胞增殖、遷移與侵襲、細(xì)胞凋亡等;或者將外泌體注射入動(dòng)物模型中,觀察動(dòng)物表型變化和檢測(cè)動(dòng)物相關(guān)指標(biāo)。外泌體(exosomes)是一種能被機(jī)體內(nèi)大多數(shù)細(xì)胞分泌的微小膜泡,具有脂質(zhì)雙層膜,直徑大約為 30-150 nm。外泌體普遍存在并分布于各種體液中,攜帶和傳遞重要的信號(hào)分子,形成了一種全新的細(xì)胞-細(xì)胞間信息傳遞系統(tǒng),影響細(xì)胞的生理狀態(tài)并與多種疾病的發(fā)生與進(jìn)程密切相關(guān)。干細(xì)胞外泌體對(duì)多種類型的免疫細(xì)胞均具有免疫調(diào)節(jié)作用。吉林體液外泌體small RNA測(cè)序
外泌體的生物發(fā)生途徑主要包括三個(gè)關(guān)鍵的檢查點(diǎn):ILV的形成,阻止MVEs的降解以及MVEs和細(xì)胞膜的融合,這三個(gè)檢查點(diǎn)都包含在內(nèi)體相關(guān)的囊泡運(yùn)輸過程中。RABGTPase定位到特定膜結(jié)構(gòu)的表面,通過招募效應(yīng)因子來調(diào)節(jié)相應(yīng)膜結(jié)構(gòu)的囊泡運(yùn)輸,例如,在內(nèi)體溶酶體運(yùn)輸網(wǎng)絡(luò)中,RAB5調(diào)節(jié)早期內(nèi)體的形成及相互融合;內(nèi)體膜上RAB5到RAB7的轉(zhuǎn)換調(diào)節(jié)早期向晚期內(nèi)體的轉(zhuǎn)變;RAB7調(diào)節(jié)晚期內(nèi)體/MVEs與溶酶體的融合來降解ILVs;RAB27調(diào)節(jié)MVEs與細(xì)胞膜的對(duì)接和融合來釋放ILVs形成外泌體。內(nèi)吞的膜蛋白,特別是受體酪氨酸激酶家族的表皮生長因子受體,定位到內(nèi)體和MVEs,通過MVEs和溶酶體融合來進(jìn)入溶酶體降解,此過程受多種RABGTPases和ESCRT復(fù)合體的調(diào)控。吉林外泌體示蹤外泌體研究相對(duì)困難,需要盡快開發(fā)操作簡單、可提取高純度外泌體的技術(shù)。
外泌體及活性蛋白能直接穿透皮膚間隙,快速直達(dá)基底層起效;富含100+多種胞外基質(zhì)蛋白、胞外基質(zhì)酶以及細(xì)胞黏附分子;能夠有效促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞(HDFs)中I型膠原蛋白、成纖維蛋白,促進(jìn)皮膚有效快速再生(Rejuvenation);能夠有效促進(jìn)皮膚成纖維細(xì)胞(HDFs)彈性蛋白生成,保持皮膚飽滿和彈性;有效降低皮膚成纖維細(xì)胞(HDFs)中膠原蛋白酶(MMP-1)的生成從而防止皮膚間質(zhì)中IIIIII型膠原蛋白被降解;富含活性物質(zhì)能夠促進(jìn)皮膚有些血管的修復(fù)與重建再生。
外泌體是細(xì)胞在特定條件下分泌的小囊泡,是細(xì)胞間傳遞信號(hào),相互溝通和影響的重要工具,它可以直接進(jìn)入受體細(xì)胞影響細(xì)胞功能。外泌體PK細(xì)胞因子:磷脂雙層膜結(jié)構(gòu),可保護(hù)內(nèi)容物,包含多種細(xì)胞因子可直接進(jìn)入受體細(xì)胞。外泌體PK干細(xì)胞:無免疫排斥,體積小穿透力強(qiáng),可避免倫理道德爭議。年輕的脂肪組織中提取外泌體,在特定條件下擴(kuò)大培養(yǎng)出具有調(diào)控毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞功能的外泌體,包含多種細(xì)胞因子的外泌體直接進(jìn)入毛發(fā)根部的囊細(xì)胞,恢復(fù)毛發(fā)根部的囊干細(xì)胞的正常功能。外泌體是一種由活細(xì)胞分泌的,直徑約為40~160nm的具有雙層膜結(jié)構(gòu)的生物活性囊泡。
理論上,所有促進(jìn)肺病細(xì)胞分泌外泌體的機(jī)制都可以被用來作為肺病醫(yī)治的潛在靶點(diǎn),但目前關(guān)于其可行性的研究還比較少。有研究表明,種瘤來源的外泌體對(duì)種瘤免疫的調(diào)控具有一定的影響作用,包括免疫壓制和免疫開啟兩個(gè)方面。Romagnoli等研究發(fā)現(xiàn),肺病細(xì)胞可以刺激樹突狀細(xì)胞等抗原提呈細(xì)胞產(chǎn)生攜帶特異抗原的外泌體,這些外泌體可以遷移到區(qū)域淋巴結(jié),進(jìn)而開啟CD4+T與CD8+T細(xì)胞產(chǎn)生抗種瘤免疫反應(yīng),進(jìn)而壓制種瘤生長。Besse等研究發(fā)現(xiàn),在晚期NSCLC患者中,裝載有IFN-γ,MHC I和MHCⅡ限制抗原的樹突狀細(xì)胞外泌體增強(qiáng)了NK細(xì)胞的抗種瘤免疫功能,研究證實(shí)外泌體參與相關(guān)種瘤生理病理過程,在NSCLC免疫醫(yī)治中有著重要的臨床應(yīng)用價(jià)值,為NSCLC的醫(yī)治打開了新的視野。實(shí)際上,用PS親和法提取的人白血病細(xì)胞釋放的外泌體。吉林血漿外泌體提取
泌體是細(xì)胞內(nèi)源性的小囊泡,由大多數(shù)細(xì)胞分泌。吉林體液外泌體small RNA測(cè)序
外泌體本身的惰性相當(dāng)高,但它們與細(xì)胞膜融合可將所攜帶的物質(zhì)和信號(hào)傳遞到受體細(xì)胞并改變其生物學(xué)功能,因此,外泌體是納米藥物遞送或基因治理的潛在載體。外泌體作為功能性小RNA和蛋白質(zhì)的天然載體也引起了藥物遞送領(lǐng)域的極大興趣,因?yàn)樗梢岳眠@些囊泡治理性遞送各種核糖核酸分子、肽和合成藥物。外泌體作為疾病診斷標(biāo)志物的潛在應(yīng)用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術(shù)突破,要將其用于臨床治理,外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)還面臨很大的挑戰(zhàn)。首先,對(duì)外泌體的具體合成機(jī)制、功能了解并不是非常詳細(xì)。其次,現(xiàn)在缺乏經(jīng)濟(jì)有效的外泌體分離技術(shù)。吉林體液外泌體small RNA測(cè)序