外泌體免疫磁珠法,這種方法可以保證外泌體形態(tài) 的完整,特異性高、操作簡單、不需要昂貴的儀器設(shè)備,但是非中性pH 和非 生理性鹽濃度會影響外泌體生物活性, 不便進行下一步的實驗 。PS親和法,該方法將PS(磷脂酰絲氨酸)與磁珠結(jié)合,利用親和原理捕獲外泌體囊泡外的PS。該方法與免疫磁珠法相似,獲得的外泌體形態(tài)完整,純度高。由于不使用變性劑,不影響外泌體的生物活性,外泌體可用于細胞共培養(yǎng)和體內(nèi)注射。2016.9 《Scientific Reports》 雜志發(fā)表了該方法新數(shù)據(jù),表明PS法可提取相當(dāng)高純度的外泌體。色譜法,這種方法分離到的外泌體在 電鏡下大小均 一, 但是需要特殊的設(shè)備 , 應(yīng)用不普遍 。外泌體不只可作為疾病診斷的生物標志,而且可作為天然的藥物傳遞載體。湖北體液外泌體鑒定
一類外泌體中常見的細胞質(zhì)蛋白是Rabs蛋白,是鳥苷酸三磷酸酶(GTPases,)家族的一種。它可以調(diào)節(jié)外泌體膜與受體細胞的融合,有文獻報道稱RAB4,RAB5和RAB11主要出現(xiàn)于早期以及回收的核內(nèi)體中,RAB7和RAB9主要出現(xiàn)于晚期的核內(nèi)體。現(xiàn)有大量的研究發(fā)現(xiàn)外泌體中含有40種RAB蛋白。除了RAB蛋白,外泌體中富含具有外泌體膜交換以及融合作用的膜聯(lián)蛋白(包括膜聯(lián)蛋白1、2、4、5、6、7、11等)。外泌體膜上富含參與外泌體運輸?shù)乃目缒さ鞍准易濉嵝菘说鞍准易?。其它一些外泌體中的蛋白包括多種的代謝類的酶、核糖體蛋白(RPS3)、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)因子(黑色素瘤分化相關(guān)因子,ARF1,CDC42,人類紅細胞膜整合蛋白,SLC9A3R1)、粘附因子、細胞骨架蛋白以及泛素等。浙江腹膜透析液外泌體示蹤外泌體無法分析外泌體具有的生理功能,也是兩種提取方法的問題所在。
外泌體是新型治理劑,瘤轉(zhuǎn)移是一個包括病細胞侵入、血管中存活和殖民化等多步驟的復(fù)雜過程。外泌體能夠影響這個級聯(lián)反應(yīng)的每一步,因此可作為瘤治理的靶點。瘤細胞在轉(zhuǎn)移到其他組織時需要在間質(zhì)細胞間移動并到達血管中,在這個過程中,瘤細胞外泌體通過纖維連接蛋白促進瘤細胞的運動性,再通過蛋白酶促進細胞外基質(zhì)的分解、血管生成,進而促進瘤轉(zhuǎn)移。多數(shù)瘤細胞對轉(zhuǎn)移的組織具有指向性,而外泌體表面的整合素就是決定其指向性的因子,如外泌體αvβ5整合素決定了對肝臟的指向性,而外泌體α6β4?α6β1整合素決定了對肺部的指向性。
外泌體是各種細胞外泌的直徑在30-100nm之間的膜囊泡。因外泌體內(nèi)含mRNA、microRNA等核酸和蛋白質(zhì)對相鄰細胞具有交換信息的功能。作為細胞間信號傳導(dǎo)的通訊工具和作為病等各種疾病的生物標記話題比較熱門。近些年關(guān)于外泌體研究很普遍,但是關(guān)于外泌體相關(guān)的實驗技術(shù),關(guān)于需要改進的課題存在很多。例如,外泌體提純方法中,超速離心法和聚合物沉淀法(市售試劑盒)混入多種雜質(zhì),給后續(xù)實驗產(chǎn)生了許多障礙。抗體親和法和密度梯度離心法,雖然可以提取到高純度的外泌體,但不能提取完整外泌體,無法分析外泌體具有的生理功能,也是兩種提取方法的問題所在。而免疫印跡法(WB)和Elisa檢測法作為被普遍應(yīng)用的外泌體檢測的一般方法,又存在檢測時需使用大量外泌體和難以檢測到低表達水平的標記蛋白。外泌體給后續(xù)實驗產(chǎn)生了許多障礙。
建立記錄各論文實驗條件的數(shù)據(jù)庫也可作為規(guī)避混亂的方法之一。一方面,隨著EV研究倍受世界矚目,各國啟動了大型研究項目。美國啟動NIH戰(zhàn)略性大型項目(Extracellular RNA Communication),國際厲害性學(xué)會——Gordon和Keystone Symposia也從2016開始成立會議小組。受到歐洲藥物研究開發(fā)公司“創(chuàng)新藥物倡議組織(IMI)”的支持推進的CANCER-ID項目,也包含EV研究在內(nèi)。2017年日本選定了EV研究為文部科學(xué)省研究開發(fā)戰(zhàn)略的目標之一,期待會加速今后的研究發(fā)展。無論如何,今后EV研究的根本就是必須有強有力的研究方法和技術(shù),而PS親和法有望成為其中之一。干細胞外泌體可直接促進血管生成,改善大腦缺氧后的損傷。河南血清外泌體small RNA測序
日本和光著眼于巨噬細胞的外泌體受體Tim4蛋白,制備Tim4細胞外域與磁珠結(jié)合的“Tim4磁珠”。湖北體液外泌體鑒定
由于這些胞外囊泡(EV)與生理和病理狀況之間的關(guān)系,人們對EV的興趣呈指數(shù)增長。 EVs對新型診斷和臨床轉(zhuǎn)化有很大希望。近的研究已經(jīng)將這些交流所需的一些任務(wù)歸結(jié)為細胞外囊泡(如外泌體和微泡),主要參與髓鞘膠質(zhì)細胞和神經(jīng)元之間的相互信號傳遞從而促進神經(jīng)元存活、由小膠質(zhì)細胞介導(dǎo)的免疫應(yīng)答、突觸組裝和可塑性。這種囊泡也被認為是神經(jīng)變性疾病和腦病擴散的重要因素。這些細胞外囊泡功能為以前無法識別的神經(jīng)系統(tǒng)內(nèi)跨細胞相互作用增加了新方式。湖北體液外泌體鑒定