外泌體label free

來源: 發(fā)布時(shí)間:2021-02-12

外泌體本身的惰性相當(dāng)高,但它們與細(xì)胞膜融合可將所攜帶的物質(zhì)和信號(hào)傳遞到受體細(xì)胞并改變其生物學(xué)功能,因此,外泌體是納米藥物遞送或基因治理的潛在載體。外泌體作為功能性小RNA和蛋白質(zhì)的天然載體也引起了藥物遞送領(lǐng)域的極大興趣,因?yàn)樗梢岳眠@些囊泡治理性遞送各種核糖核酸分子、肽和合成藥物。外泌體作為疾病診斷標(biāo)志物的潛在應(yīng)用依賴于基于外泌體的藥物遞送系統(tǒng)的技術(shù)突破,要將其用于臨床治理,外泌體的大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)還面臨很大的挑戰(zhàn)。首先,對(duì)外泌體的具體合成機(jī)制、功能了解并不是非常詳細(xì)。其次,現(xiàn)在缺乏經(jīng)濟(jì)有效的外泌體分離技術(shù)。泌體是細(xì)胞內(nèi)源性的小囊泡,由大多數(shù)細(xì)胞分泌。外泌體label free

外泌體的miRNA或蛋白質(zhì)等遺傳分子與肝臟病理息息相關(guān),在肝臟疾病診斷中可作為潛在的治理靶點(diǎn)或分子標(biāo)志物。對(duì)外泌體的研究,將有利于闡述肝臟及其疾病的發(fā)生和發(fā)展機(jī)制,為尋求臨床可用的biomarkers和開發(fā)新的治理方法提供支持。外泌體可以通過轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白和miRNAs進(jìn)行細(xì)胞間交流,從而作用于周圍的細(xì)胞并改變肝臟的微環(huán)境。細(xì)胞內(nèi)多泡體(MVBs)與細(xì)胞膜融合,釋放內(nèi)部的外泌體到細(xì)胞外,被其他細(xì)胞攝取,通過細(xì)胞膜融合或內(nèi)吞作用釋放攜帶的內(nèi)含物,在受體細(xì)胞中調(diào)控生理活動(dòng)。外泌體介導(dǎo)的細(xì)胞間交流可以改變瘤的生長(zhǎng)、細(xì)胞遷移、抗病毒等生理過程。浙江血漿外泌體small RNA測(cè)序外泌體被工程化改造后,具有靶向特定細(xì)胞類型或組織的功能。

外泌體早見于1981年,EG Trams 等在體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中發(fā)現(xiàn)了有膜結(jié)構(gòu)的小囊泡,并命名為 exosome。對(duì)于外泌體的作用,當(dāng)時(shí)推測(cè)為細(xì)胞排泄廢物的一種方式。1996年G Raposo 等發(fā)現(xiàn)類似于B 淋巴細(xì)胞的免疫細(xì)胞也會(huì)分泌抗原呈遞外泌體(antigen presenting vesicle),所分泌的外泌體可以直接刺激效應(yīng)CD4+ 細(xì)胞的抗種瘤反應(yīng)。2007 年H Valadi 等進(jìn)一步發(fā)現(xiàn)細(xì)胞之間可以通過外泌體中RNA 交換遺傳物質(zhì)。隨著有關(guān)外泌體研究越來越多,研究者發(fā)現(xiàn)它普遍參與了機(jī)體免疫應(yīng)答、抗原呈遞、細(xì)胞分化、種瘤生長(zhǎng)于侵襲等各種生物過程中。

從細(xì)胞培養(yǎng)物中富集的總外泌體(使用“總外泌體分離”試劑或超速離心)可以通過免疫磁珠捕獲進(jìn)一步純化特定的亞群。使用基于Dynabeads的CD9、CD63、CD81或EpCam特異性試劑,或?qū)㈡溍褂H和素試劑與您選擇的生物素化抗體結(jié)合,以基于表面抗原,純化所有群體。外泌體是指包含了復(fù)雜 RNA 和蛋白質(zhì)的小膜泡 (30-150nm),現(xiàn)今,其特指直徑在40-100nm的盤狀囊泡。1983年,外泌體初次于綿羊網(wǎng)織紅細(xì)胞中被發(fā)現(xiàn), 1987年Johnstone將其命名為“exosome”。多種細(xì)胞在正常及病理狀態(tài)下均可分泌外泌體。其主要來源于細(xì)胞內(nèi)溶酶體微粒內(nèi)陷形成的多囊泡體,經(jīng)多囊泡體外膜與細(xì)胞膜融合后釋放到胞外基質(zhì)中 。各種細(xì)胞粘著分子在外泌體膜表面表達(dá),由其決定外泌體被運(yùn)輸往哪一種細(xì)胞。

全自動(dòng)外泌體熒光檢測(cè)分析系統(tǒng)的基本原理是一種基于特異性免疫捕獲技術(shù),允許研究者直接分析特定群體的外泌體或外囊泡。通過配套的試劑盒,客戶一次性能夠分析多達(dá)9個(gè)不同的樣本,很大節(jié)省了時(shí)間和經(jīng)濟(jì)成本。全自動(dòng)外泌體熒光檢測(cè)分析系統(tǒng)兼容各種生物樣本,除了純化的外泌體之外,對(duì)于血液、尿液、腹水中的外泌體也可直接檢測(cè)分析,很大拓展了研究范圍。全自動(dòng)的可對(duì)單個(gè)外泌體進(jìn)行表征分析的全新設(shè)備。該設(shè)備能夠提供全部的外泌體表征信息,包括外泌體粒徑大小、計(jì)數(shù)、分布、攜帶蛋白表達(dá)、生物標(biāo)志物(CD9,CD81,CD63等)共定位等。操作簡(jiǎn)單,結(jié)果可靠。一經(jīng)推出,便引起了外泌體領(lǐng)域科研工作者的普遍關(guān)注,短短兩年時(shí)間在全球已有50多個(gè)實(shí)驗(yàn)室采用該技術(shù),發(fā)表重要文獻(xiàn)近百篇。外泌體作為腦內(nèi)種瘤和神經(jīng)退行性疾病的新型標(biāo)記物。安徽體液外泌體small RNA測(cè)序

目前,提取外泌體的方法主要有超速離心法、PEG沉淀法。外泌體label free

外泌體(Exosome)是由活細(xì)胞分泌的直徑約為30-150 nm的小囊泡,具有典型的脂質(zhì)雙分子層結(jié)構(gòu);存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清液、血清、血漿、唾液、尿液、羊水以及其它生物體液中;外泌體攜帶有多種蛋白質(zhì)、脂類、RNA等重要信息,不只在細(xì)胞與細(xì)胞間的物質(zhì)和信息傳遞中起重要作用,更有望成為多種疾病的早期診斷標(biāo)志物。外泌體(Exosomes)是細(xì)胞分泌到胞外的一種囊泡(Extracellular Vesicles,EVs),其大小為30-150nm,具有雙層膜結(jié)構(gòu)和茶托狀形態(tài),含有豐富的內(nèi)含物(包括核酸、蛋白和脂質(zhì)等),參與細(xì)胞間的分子傳遞。外泌體普遍存在于細(xì)胞培養(yǎng)上清以及各種體液中,包括血液、林巴液、唾液、尿液、、乳汁等,同時(shí)也存在于組織樣本中,如腦組織、肌肉組織、脂肪組織等。外泌體label free