自基因zhiliao出現(xiàn)之日起，安全性問(wèn)題就隨之產(chǎn)生了，并成為阻礙基因zhiliao研發(fā)的一大障礙，吳寧博士認(rèn)為：“基因zhiliao產(chǎn)品的研發(fā)和上市，安全性會(huì)將是一個(gè)非常重要考量。如果一款產(chǎn)品它安全性有問(wèn)題的話，在市場(chǎng)化道路上就會(huì)受到很大影響。尤其是基因zh...

細(xì)胞分布、遷移和增殖引起的后果。與伴隨zhiliao相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)（伴隨使用或處理并發(fā)癥時(shí)使用免疫抑制劑等）。與給藥程序和給yaofang式有關(guān)的對(duì)患者造成的風(fēng)險(xiǎn)與手術(shù)操作或產(chǎn)品注射相關(guān)的風(fēng)險(xiǎn)。與注射用醫(yī)療器械有關(guān)的用藥錯(cuò)誤或不當(dāng)?shù)娘L(fēng)險(xiǎn)。與產(chǎn)品劑量錯(cuò)誤和/或用藥不...

gRNA的長(zhǎng)度和錯(cuò)配： 17個(gè)核苷酸長(zhǎng)度的gRNA顯示出更高的基因組編輯效率。相比之下，18-20 bp的長(zhǎng)度顯示出較低的基因組編輯效率。在人類(lèi)細(xì)胞中減少潛在脫靶效應(yīng)的指導(dǎo)方針：1) 應(yīng)避免在PAM的7-10 bp范圍內(nèi)靶序列有超過(guò)3個(gè)錯(cuò)配；2) 在PAM的1...

如果iPS細(xì)胞設(shè)計(jì)了機(jī)制以降低致瘤風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)在體內(nèi)試驗(yàn)中確認(rèn)/驗(yàn)證此類(lèi)機(jī)制的功能重編程可能會(huì)誘導(dǎo)細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)改變，其后果尚不完全清楚。為評(píng)估iPS細(xì)胞衍生細(xì)胞的表觀遺傳學(xué)改變所引起的潛在異常特征，應(yīng)采用體外和/或體內(nèi)非臨床研究來(lái)闡明細(xì)胞具有適當(dāng)?shù)男袨楹蜕砉?..

基因重排或重組。當(dāng)基因zhiliao產(chǎn)品所用載體及其攜帶的基因發(fā)生復(fù)制時(shí)，可能出現(xiàn)非zhiliao目的非預(yù)期的基因表達(dá)或改變，或者與相應(yīng)野生型或輔助病毒互補(bǔ)后產(chǎn)生回復(fù)突變或意外復(fù)制或形成6新的病毒。免疫原性。由于基因zhiliao產(chǎn)品在體內(nèi)的持續(xù)暴露或者需要多...

Southern blot 是一種常用的 DNA 定量的分子生物學(xué)方法。其原理是將待測(cè)的 DNA 樣品固定在固相載體（硝酸纖維膜或尼龍膜）上，與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，在與探針有同源序列的固相 DNA 的位置上顯示出雜交信號(hào)，通過(guò)檢測(cè)信號(hào)的有無(wú)、強(qiáng)弱可以對(duì)樣品...

但是由于CHIP-seq實(shí)驗(yàn)本身的難度較高，DISCOVER-seq這類(lèi)方法的接受度并不高。3. 其他特殊方法CRISPR技術(shù)經(jīng)過(guò)這么多年的發(fā)展，其應(yīng)用已經(jīng)不局限于造成DNA雙鏈斷裂，一些不要切割DNA雙鏈的CRISPR衍生技術(shù)（如堿基編輯、先導(dǎo)編輯和CRIS...

使用CRISPR/Cas9、ZFNs和TALENs等設(shè)計(jì)核酸酶進(jìn)行基因組編輯，可以將遺傳物質(zhì)定向?qū)氩溉閯?dòng)物基因組的特定位點(diǎn)。然而，可能會(huì)出現(xiàn)非預(yù)期的靶上和靶外基因組修飾，這可能導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，并破壞正?；虻墓δ?，從而可能導(dǎo)致臨床前和臨床研究中的安全問(wèn)題。...

例如，對(duì)于經(jīng)過(guò)基因修飾的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品如CAR-T，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)和流式細(xì)胞術(shù)（Flowcytometry）進(jìn)行PK分析，分別通過(guò)測(cè)定外源基因拷貝和CAR+細(xì)胞數(shù)量的變化，有助于互相驗(yàn)證檢測(cè)方法的可靠性，可以更duomi...

慢病毒整合事件要素及檢測(cè)方法要求：對(duì)于食藥監(jiān)局指導(dǎo)性文件和既往研究?jī)?nèi)容，我們不難發(fā)現(xiàn)對(duì)于慢病毒整合檢測(cè)所謂整合事件至少包含三個(gè)要素：整合位置；整合方向；特定整合位置和整合方向的juedui克隆數(shù)目；因此檢測(cè)在定性和定量性能方面都有要求，檢測(cè)方法需要結(jié)合臨床樣本...

細(xì)胞和基因療法可進(jìn)一步分為體內(nèi)zhiliao和體外zhiliao，體外zhiliao是將患者的體細(xì)胞從體內(nèi)分離，在體外進(jìn)行培養(yǎng)并使用攜帶有正常基因片段的載體修復(fù)突變基因，通過(guò)注射的方法將改良后的細(xì)胞回輸入患者體內(nèi)以進(jìn)行疾病的zhiliao。體內(nèi)zhiliao是...

使用核酸載體進(jìn)行基因轉(zhuǎn)導(dǎo)或修飾時(shí)，應(yīng)持續(xù)關(guān)注細(xì)胞產(chǎn)品中載體系統(tǒng)的殘留情況，分析外源在基因組中的插入位置、拷貝數(shù)等，監(jiān)控基因編輯用酶的細(xì)胞內(nèi)持續(xù)表達(dá)時(shí)間等，并在受試者給藥后進(jìn)行長(zhǎng)期安全性監(jiān)測(cè)。當(dāng)基因zhiliao產(chǎn)品在生殖qiguan持續(xù)存在時(shí)，需要進(jìn)一步研究確...

物流：夠低溫嗎？CGT 供應(yīng)鏈本質(zhì)上是以患者為中心的，因?yàn)榛颊呒瓤梢允侵圃斓纳嫌我部梢允窍掠?。通過(guò)自體療法，從體內(nèi)提取細(xì)胞，進(jìn)行操作，然后將其注射回同一位患者體內(nèi)，從而創(chuàng)建了一個(gè)被稱為“靜脈到靜脈”的供應(yīng)鏈。一個(gè)完美的 CGT 供應(yīng)鏈需要從頭到尾進(jìn)行嚴(yán)格的流程...

在細(xì)菌細(xì)胞中，某種特定基因的數(shù)目。一般檢測(cè)方法有若是測(cè)序結(jié)果，可選用censor軟件檢測(cè)相關(guān)拷貝數(shù)。Southernblot是一種常用的DNA定量的分子生物學(xué)方法。其原理是將待測(cè)的DNA樣品固定在固相載體（硝酸纖維膜或尼龍膜）上，與標(biāo)記的核酸探針進(jìn)行雜交，在與...

長(zhǎng)期隨訪的觀察時(shí)間長(zhǎng)期隨訪的持續(xù)時(shí)間應(yīng)確保足以觀察到受試者因產(chǎn)品特性、暴露情況（生物分布和給藥途徑）等導(dǎo)致的風(fēng)險(xiǎn)，應(yīng)不短于遲發(fā)性不良反應(yīng)的預(yù)期發(fā)生時(shí)間。一般而言，針對(duì)不同類(lèi)型的基因zhiliao產(chǎn)品建議如下：?具有基因組整合活性的載體（例如γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病...

使用CRISPR/Cas9、ZFNs和TALENs等設(shè)計(jì)核酸酶進(jìn)行基因組編輯，可以將遺傳物質(zhì)定向?qū)氩溉閯?dòng)物基因組的特定位點(diǎn)。然而，可能會(huì)出現(xiàn)非預(yù)期的靶上和靶外基因組修飾，這可能導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，并破壞正?；虻墓δ?，從而可能導(dǎo)致臨床前和臨床研究中的安全問(wèn)題。...

基因zhiliao產(chǎn)品特有的可能會(huì)引起遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)因素包括：基因組整合活性基因zhiliao產(chǎn)品可能會(huì)采用修飾宿主基因組的技術(shù)，并有可能在宿主細(xì)胞或組織中持續(xù)存在。很多基因zhiliao載體的基因整合不會(huì)指向基因組的特定位點(diǎn)，可能在整合位點(diǎn)處產(chǎn)生插入突...

2020年9月發(fā)布的《細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品申請(qǐng)臨床試驗(yàn)藥學(xué)研究和申報(bào)資料的考慮要點(diǎn)》“生產(chǎn)工藝開(kāi)發(fā)的技術(shù)要求”及“質(zhì)量研究和質(zhì)量控制中的安全性研究”部分要求提供目的基因在染色體中的整合情況及提供細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化（成瘤性和致瘤性）進(jìn)行安全性研究和評(píng)估內(nèi)容。2020...

CAR或TCR修飾的免疫細(xì)胞對(duì)于嵌合抗原受體（Chimericantigenreceptor，CAR）或T細(xì)胞受體（Tcellreceptor，TCR）修飾的免疫細(xì)胞，應(yīng)盡可能采用多種方法評(píng)估其靶點(diǎn)相關(guān)毒性和脫靶毒性風(fēng)險(xiǎn)。對(duì)于靶點(diǎn)相關(guān)毒性，應(yīng)采用體外方法深入分...

關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產(chǎn)品，例如轉(zhuǎn)座子元件、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒及其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉(zhuǎn)座子的載體在體外修飾的細(xì)胞，長(zhǎng)期隨訪中需格外關(guān)注基因zhiliao產(chǎn)品的基因組整合風(fēng)險(xiǎn)，建議申辦方分析基因...

基因zhiliao產(chǎn)品特有的可能會(huì)引起遲發(fā)性不良反應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)因素包括：基因組整合活性?；騴hiliao產(chǎn)品可能會(huì)采用修飾宿主基因組的技術(shù)，并有可能在宿主細(xì)胞或組織中持續(xù)存在。很多基因zhiliao載體的基因整合不會(huì)指向基因組的特定位點(diǎn)，可能在整合位點(diǎn)處產(chǎn)生插入...

對(duì)于CAR修飾的免疫細(xì)胞，應(yīng)采用多種體外方法評(píng)估其胞外抗原識(shí)別區(qū)的脫靶風(fēng)險(xiǎn)。TCR修飾免疫細(xì)胞的脫靶毒性可通過(guò)評(píng)估TCR與人體自身抗原肽的交叉識(shí)別能力來(lái)評(píng)估。首先，應(yīng)采用體外試驗(yàn)測(cè)定TCR修飾的免疫細(xì)胞與人自身抗原肽-HLA（與遞呈靶抗原肽的HLA等位基因相同...

例如，對(duì)于經(jīng)過(guò)基因修飾的免疫細(xì)胞zhiliao產(chǎn)品如CAR-T，采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(qPCR)和流式細(xì)胞術(shù)（Flowcytometry）進(jìn)行PK分析，分別通過(guò)測(cè)定外源基因拷貝和CAR+細(xì)胞數(shù)量的變化，有助于互相驗(yàn)證檢測(cè)方法的可靠性，可以更duomi...

自基因zhiliao出現(xiàn)之日起，安全性問(wèn)題就隨之產(chǎn)生了，并成為阻礙基因zhiliao研發(fā)的一大障礙，吳寧博士認(rèn)為：“基因zhiliao產(chǎn)品的研發(fā)和上市，安全性會(huì)將是一個(gè)非常重要考量。如果一款產(chǎn)品它安全性有問(wèn)題的話，在市場(chǎng)化道路上就會(huì)受到很大影響。尤其是基因zh...

當(dāng)基因zhiliao產(chǎn)品在生殖qiguan持續(xù)存在時(shí)，需要進(jìn)一步研究確定其在生殖細(xì)胞（例如卵母細(xì)胞、精子）的暴露水平。根據(jù)載體類(lèi)型、復(fù)制能力、基因組整合特性、劑量水平、給藥途徑等因素，分析評(píng)估基因zhiliao產(chǎn)品生殖系整合風(fēng)險(xiǎn)。遺傳毒性，基因zhiliao產(chǎn)...

穿梭質(zhì)粒：是指一類(lèi)人工構(gòu)建的具有兩種不同復(fù)制起點(diǎn)和篩選，因而可以在兩種不同類(lèi)群宿主中存活和復(fù)制的質(zhì)粒載體。此概念不僅用于不同的微生物菌群之間，也可以推廣到真核生物表達(dá)載體的構(gòu)建，如用于枯草的pBE2、酵母的pPIC9K、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體pMT2和用于植物細(xì)胞的...

物流：夠低溫嗎？CGT 供應(yīng)鏈本質(zhì)上是以患者為中心的，因?yàn)榛颊呒瓤梢允侵圃斓纳嫌我部梢允窍掠?。通過(guò)自體療法，從體內(nèi)提取細(xì)胞，進(jìn)行操作，然后將其注射回同一位患者體內(nèi)，從而創(chuàng)建了一個(gè)被稱為“靜脈到靜脈”的供應(yīng)鏈。一個(gè)完美的 CGT 供應(yīng)鏈需要從頭到尾進(jìn)行嚴(yán)格的流程...

關(guān)于整合性載體的特殊考慮如受試者接受整合性載體基因zhiliao產(chǎn)品，例如轉(zhuǎn)座子元件、γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒及其他逆轉(zhuǎn)錄病毒載體，或利用整合性載體或基于轉(zhuǎn)座子的載體在體外修飾的細(xì)胞，長(zhǎng)期隨訪中需格外關(guān)注基因zhiliao產(chǎn)品的基因組整合風(fēng)險(xiǎn)，建議申辦方分析基因...

如何檢測(cè)脫靶效應(yīng)？在gRNA修飾中，截短的sgRNA是一種減少脫靶效應(yīng)的簡(jiǎn)單方法，并且基于RNP的遞送在大多數(shù)情況下適用于獲得更高的目標(biāo)活性。此外，選擇合適的Cas變體對(duì)于減少脫靶效應(yīng)也至關(guān)重要。但選擇合適的脫靶檢測(cè)工具，也是重中之重。脫靶預(yù)測(cè)結(jié)合PCR檢測(cè)法...

在國(guó)家藥典委員會(huì)公布的《人用基因制品總論》（草案）的3.1條款中，特別指出：“應(yīng)檢測(cè)重組載體基因組或質(zhì)粒的完整性和均一性，載體和zhiliao序列的遺傳穩(wěn)定性”；“對(duì)于病毒載體，適當(dāng)情況下應(yīng)測(cè)定插入位點(diǎn)，并充分評(píng)估插入突變的可能性和相關(guān)風(fēng)險(xiǎn)”。對(duì)此，可分別采用...