(1)電子光學(xué)系統(tǒng)。電子束直徑0.1~1μm,電子束穿透深度1~3μm。被激發(fā)原子發(fā)射特征X射線譜過程如下:圍繞原子核運動的內(nèi)層電子,被電子束的電子轟擊后,其他外層電子為補充轟擊出的電子而發(fā)生躍遷,在躍遷過程中釋放出能量,即發(fā)射出X射線。(2)X射線譜儀。測量各種元素產(chǎn)生的X射線波長和強度,并以此對微小體積中所含元素進行定性和定量分析。特征X射線圖像顯像管的原理是:X射線束入射到一已知晶面間距的晶體上(X射線分光光度計的彎曲晶體上),經(jīng)衍射后各種波長的X射線按不同的布拉格角彼此分開,因此如轉(zhuǎn)動晶體,改變衍射角,同時以兩倍于晶體的轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)動計數(shù)器,就可以依次測量出各種元素所產(chǎn)生的X射線波長和強度,達到定性和定量分析的目的。電子探針和掃描電鏡在電子光學(xué)系統(tǒng)的構(gòu)造基本相同,它們常常組合成單一的儀器。楊浦區(qū)標準探針生產(chǎn)廠家
基因探針,即核酸探針,是一段帶有檢測標記,且順序已知的,與目的基因互補的核酸序列(DNA或RNA)?;蛱结樛ㄟ^分子雜交與目的基因結(jié)合,產(chǎn)生雜交信號,能從浩瀚的基因組中把目的基因顯示出來。根據(jù)雜交原理,作為探針的核酸序列至少必須具備以下兩個條件:①應(yīng)是單鏈,若為雙鏈,必須先行變性處理。②應(yīng)帶有容易被檢測的標記。它可以包括整個基因,也可以**是基因的一部分;可以是DNA本身,也可以是由之轉(zhuǎn)錄而來的RNA。DNA探針根據(jù)其來源有3種:一種來自基因組中有關(guān)的基因本身,稱為基因組探針(genomic probe);另一種是從相應(yīng)的基因轉(zhuǎn)錄獲得了mRNA,再通過逆轉(zhuǎn)錄得到的探針,稱為cDNA探針(cDNA probe)。與基因組探針不同的是,cDNA探針不含有內(nèi)含子序列。此外,還可在體外人工合成堿基數(shù)不多的與基因序列互補的DNA片段,稱為寡核苷酸探針。松江區(qū)優(yōu)勢探針銷售廠家能進行現(xiàn)場分析。無需把分析對象從樣品中取出,可直接對大塊試樣中的微小區(qū)域進行分析。
探針的標記方式有放射性標記和非放射性標記。標記物質(zhì)有放射性元素(如32P等)和非放射性物質(zhì)(如生物素、地高辛等)。32P是**常用的核苷酸標記同位素,被標記的dNTP本身就帶有磷酸基團,便于標記。特點是比活性高,可達9000Ci/mmol;發(fā)射的β射線能量高。用它標記的探針自顯影時間短,靈敏度高。32P的半壽期短,雖使用不方便,但為廢棄物的處理減輕了壓力。非放射性標記法有酶標法和化學(xué)物標記法。酶標方法與免疫測定ELISA方法相似,只是被標記的核酸代替了被標記的抗體,事實上被標記的抗體也稱為探針,現(xiàn)有許多商品是生物素、地高辛標記的。
在不損耗試樣的情況下,電子探針通常能分析直徑和深度不小于1微米范圍內(nèi)、原子序數(shù)4以上的所有元素;但是對原子序數(shù)小于12的元素,其靈敏度較差。常規(guī)分析的典型檢測相對靈敏度為萬分之一,在有些情況下可達十萬分之一。檢測的***靈敏度因元素而異,一般為10-14~10-16克。用這種方法可以方便地進行點、線、面上的元素分析,并獲得元素分布的圖象。對原子序數(shù)高于10、濃度高于10%的元素,定量分析的相對精度優(yōu)于±2%。電子探針儀是 X射線光譜學(xué)與電子光學(xué)技術(shù)相結(jié)合而產(chǎn)生的。1948年法國的R.卡斯坦制造了***臺電子探針儀。1958年法國首先制造出商品儀器。電子探針儀與掃描電子顯微鏡在結(jié)構(gòu)上有許多共同處。70年代以來生產(chǎn)的電子探針儀上一般都帶有掃描電子顯微鏡功能,有的還附加另一些附件,使之除作微區(qū)成分分析外,還能觀察和研究微觀形貌、晶體結(jié)構(gòu)等。掃描電子探針儀是美國于1960年制成,不僅能對試樣作點或微區(qū)分析,而且能對樣品表面微區(qū)進行掃描。
探針DNA克隆的篩選也可采用血清學(xué)方法,所不同的是所建DNA文庫為可表達性,克隆菌落或噬斑經(jīng)裂解后釋放出表達抗原,然后用來源細菌的多克隆抗血清篩選陽性克隆,所得到多個陽性克隆再經(jīng)其它細菌的抗血清篩選,***只與本細菌抗血清反應(yīng)的表達克隆即含有此細菌的特異性基因片段,它所編碼的蛋白是該菌種所特有的。用這種表達文庫篩選得到的顯然只是特定基因探針。對于基因探針的克隆尚有更快捷的途徑。這也是許多重要蛋白質(zhì)的編碼基因的克隆方法。該方法的第一步是分離純化蛋白質(zhì),然后測定該蛋白的氨基或羥基末端的部分氨基酸序列,然后根據(jù)這一序列合成一套寡核苷酸探針。由分光晶體所分散的單一波長X射線被X射線檢測器接受,常用的檢測器一般是正比計數(shù)器。楊浦區(qū)特制探針銷售廠家
電子探針可以對試樣中微小區(qū)域(微米級)的化學(xué)組成進行定性或定量分析。楊浦區(qū)標準探針生產(chǎn)廠家
細菌的基因組大小約5×106bp,約含3000個基因。各種細菌之間絕大部分DNA是相同的,要獲得某細菌特異的核酸探針,通常要采取建立細菌基因組DNA文庫的辦法,即將細菌DNA切成小片段后分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫。然后用多種其它菌種的DNA作探針來篩選,產(chǎn)生雜交信號的克隆被剔除,***剩下的不與任何其它細菌雜交的克隆則可能含有該細菌特異性DNA片段。將此重組質(zhì)粒標記后作探針進一步鑒定,亦可經(jīng)DNA序列分析鑒定其基因來源和功能。因此要得到一種特異性DNA探針,常常是比較繁瑣的。楊浦區(qū)標準探針生產(chǎn)廠家
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