特異性探針有三種形式——cDNA、RNA、寡核苷酸。cDNA和寡核苷酸是**常采用的探針。RNA探針用途很廣,也容易獲得,但其不穩(wěn)定性限制了其商業(yè)用途。cDNA探針的獲得是,將特定的基因片段裝載到質(zhì)?;蚴删w中,經(jīng)過(guò)擴(kuò)增、酶切、純化等復(fù)雜的步驟,才能得到一定長(zhǎng)度的cDNA探針。這一過(guò)程比較復(fù)雜,有相應(yīng)條件的實(shí)驗(yàn)室才能做到。寡核苷酸探針是在已知基因序列的情況下,由核酸合成儀來(lái)完成,可廉價(jià)獲得大量的此類探針。質(zhì)量也相對(duì)來(lái)說(shuō)更為穩(wěn)定。由于cDNA探針長(zhǎng)度通常為數(shù)百至數(shù)千個(gè)堿基,所以有良好的信號(hào)放大作用,但其滲透性比較差。寡核苷酸探針一般為十?dāng)?shù)個(gè)至數(shù)十個(gè)堿基,滲透性強(qiáng),但信號(hào)放大作用則較差,合成的多相寡核苷酸探針,敏感性可以達(dá)到cDNA探針?biāo)?。它的作用是選擇和確定分析點(diǎn)。松江區(qū)優(yōu)勢(shì)探針銷售廠家
3 面分析用于測(cè)定某種元素的面分布情況。方法是將X射線譜儀固定在所要測(cè)量的某元素特征X射線信號(hào)的位置上,電子束在樣品表面做光柵掃描,此時(shí)在熒光屏上便可看到該元素的面分布圖像。顯像管的亮度由試樣給出的X射線強(qiáng)度調(diào)制。圖像中的亮區(qū)表示這種元素的含量較高。定量分析定量分析時(shí),先測(cè)得試樣中Y元素的特征X射線強(qiáng)度IY,再在同一條件下測(cè)出已知純?cè)豗的標(biāo)準(zhǔn)試樣特征X射線強(qiáng)度IO。然后兩者分別扣除背底和計(jì)數(shù)器死時(shí)間對(duì)所測(cè)值的影響,得到相應(yīng)的強(qiáng)度值IY和IO,兩者相除得到X射線強(qiáng)度之比KY= IY / IO。 直接將測(cè)得的強(qiáng)度比KY當(dāng)作試樣中元素Y的重量濃度,其結(jié)果還有很大誤差,通常還需進(jìn)行三種效應(yīng)的修正。即原子序數(shù)效應(yīng)的修正,吸收效應(yīng)修正,熒光效應(yīng)修正。經(jīng)過(guò)修正,誤差可控制在±2%以內(nèi)。浦東新區(qū)標(biāo)準(zhǔn)探針推薦貨源能進(jìn)行現(xiàn)場(chǎng)分析。無(wú)需把分析對(duì)象從樣品中取出,可直接對(duì)大塊試樣中的微小區(qū)域進(jìn)行分析。
(1)電子光學(xué)系統(tǒng)。電子束直徑0.1~1μm,電子束穿透深度1~3μm。被激發(fā)原子發(fā)射特征X射線譜過(guò)程如下:圍繞原子核運(yùn)動(dòng)的內(nèi)層電子,被電子束的電子轟擊后,其他外層電子為補(bǔ)充轟擊出的電子而發(fā)生躍遷,在躍遷過(guò)程中釋放出能量,即發(fā)射出X射線。(2)X射線譜儀。測(cè)量各種元素產(chǎn)生的X射線波長(zhǎng)和強(qiáng)度,并以此對(duì)微小體積中所含元素進(jìn)行定性和定量分析。特征X射線圖像顯像管的原理是:X射線束入射到一已知晶面間距的晶體上(X射線分光光度計(jì)的彎曲晶體上),經(jīng)衍射后各種波長(zhǎng)的X射線按不同的布拉格角彼此分開,因此如轉(zhuǎn)動(dòng)晶體,改變衍射角,同時(shí)以兩倍于晶體的轉(zhuǎn)速轉(zhuǎn)動(dòng)計(jì)數(shù)器,就可以依次測(cè)量出各種元素所產(chǎn)生的X射線波長(zhǎng)和強(qiáng)度,達(dá)到定性和定量分析的目的。
細(xì)菌的基因組大小約5×106bp,約含3000個(gè)基因。各種細(xì)菌之間絕大部分DNA是相同的,要獲得某細(xì)菌特異的核酸探針,通常要采取建立細(xì)菌基因組DNA文庫(kù)的辦法,即將細(xì)菌DNA切成小片段后分別克隆得到包含基因組的全信息的克隆庫(kù)。然后用多種其它菌種的DNA作探針來(lái)篩選,產(chǎn)生雜交信號(hào)的克隆被剔除,***剩下的不與任何其它細(xì)菌雜交的克隆則可能含有該細(xì)菌特異性DNA片段。將此重組質(zhì)粒標(biāo)記后作探針進(jìn)一步鑒定,亦可經(jīng)DNA序列分析鑒定其基因來(lái)源和功能。因此要得到一種特異性DNA探針,常常是比較繁瑣的。分析對(duì)象是固體物質(zhì)表面細(xì)小顆?;蛭⑿^(qū)域,小范圍直徑為1μm。
早期采用的RNA探針是細(xì)胞mRNA探針和病毒RNA探針,這些RNA是在細(xì)胞基因轉(zhuǎn)錄或病毒復(fù)制過(guò)程中得到標(biāo)記的,標(biāo)記效率往往不高,且受到多種因素的制約。這類RNA探針主要用于研究目的,而不是用于檢測(cè)。例如,在篩選逆轉(zhuǎn)錄病毒人類免疫缺陷病毒(HIV)的基因組DNA克隆時(shí),因無(wú)DNA探針可利用,就利用HIV的全套標(biāo)記mRNA作為探針,成功地篩選到多株HIV基因組DNA克隆。又如進(jìn)行中的轉(zhuǎn)錄分析(nuclearrunontranscrip-tionassay)時(shí),在體外將細(xì)胞核分離出來(lái),然后在α-32P-ATP的存在下進(jìn)行轉(zhuǎn)錄,所合成mR-NA均摻入同位素而得到標(biāo)記,此混合mRNA與固定于硝酸纖維素濾膜上的某一特定的基因的DNA進(jìn)行雜交,便可反映出該基因的轉(zhuǎn)錄狀態(tài),這是一種反向探針實(shí)驗(yàn)技術(shù)。探針卡應(yīng)用在IC尚未封裝前,針對(duì)裸晶系以探針做功能測(cè)試,篩選出不良品、再進(jìn)行之后的封裝工程。金山區(qū)特制探針銷售廠家
能兼作透射電鏡、能進(jìn)行電子衍射、能作電子熒光觀察等。松江區(qū)優(yōu)勢(shì)探針銷售廠家
③末端標(biāo)記法(又叫尾標(biāo))。利用末端轉(zhuǎn)移酶可進(jìn)行“尾標(biāo)”,尾標(biāo)適用于寡核苷酸探針標(biāo)記,寡核苷酸探針多用于核酸“點(diǎn)”突變的檢測(cè),該探針可用核酸合成儀人工合成,克隆出的探針一般較長(zhǎng),特異性好,標(biāo)記量大,雜交的檢出信號(hào)強(qiáng)。探針合成的注意事項(xiàng)①合成探針的長(zhǎng)短,一般在20~50個(gè)核苷酸之間。合成過(guò)長(zhǎng)成本高,且易出現(xiàn)聚合酶合成錯(cuò)誤,雜交時(shí)間長(zhǎng),合成太短則特異性下降。②堿基組成G-C應(yīng)含40%~60%,一種堿基連續(xù)重復(fù)不超過(guò)4個(gè),以免非特異性雜交產(chǎn)生。③探針自身序列內(nèi)應(yīng)無(wú)互補(bǔ)區(qū)域,以免產(chǎn)生“發(fā)夾”結(jié)構(gòu),影響雜交??傊?,一個(gè)好的探針**終要在實(shí)踐中才能加以確認(rèn)。松江區(qū)優(yōu)勢(shì)探針銷售廠家
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