青島鼠尾膠原廠家

鼠尾膠原蛋白Ⅰ型使用說(shuō)明：不含細(xì)胞的三維膠原的制備（以配制1毫升，1mg/ml三維膠為例）：將200ul鼠尾膠原蛋白I型(5mg/ml)加到置于冰浴的離心管中，加入690ulH2O。然后加到12ul0.1mol/LNaOH中（如果反過(guò)來(lái)把12ul0.1mol/LNaOH加到膠原溶液中，會(huì)由于NaOH不能迅速混勻而產(chǎn)生局部的膠原凝結(jié)），立即混勻。再加入100ul10×PBS或10×培養(yǎng)液，混勻后立即加到培養(yǎng)器皿中(混勻后pH為7左右，如果PBS或培養(yǎng)液中沒(méi)有加酚紅，初次使用時(shí)需要用pH試紙測(cè)試)。將培養(yǎng)器皿在室溫(25度左右)下放置20分鐘待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。如果配制中使用的是10×PBS，使用前需要加入適當(dāng)體積的細(xì)胞培養(yǎng)液預(yù)平衡。將培養(yǎng)器皿在室溫放置20min待膠凝固后，轉(zhuǎn)移到培養(yǎng)箱內(nèi)。青島鼠尾膠原廠家

鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原在原代培養(yǎng)耳蝸血管紋邊緣細(xì)胞中的應(yīng)用。目的：建立利用自制的鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法。方法:制作鼠尾膠原,并觀察利用自制的鼠尾膠原所培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的效果。結(jié)果：自制的鼠尾膠原能正常地培養(yǎng)出大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞，細(xì)胞角蛋白18表達(dá)陽(yáng)性，免疫組織化學(xué)結(jié)果和掃描電鏡證實(shí)所培養(yǎng)的細(xì)胞具有典型的分泌上皮細(xì)胞特征。結(jié)論：成功建立了利用自制鼠尾膠原培養(yǎng)大鼠耳蝸邊緣細(xì)胞的方法，并且制作簡(jiǎn)便,成本低廉。上海鼠尾膠原制備鼠尾膠原：吸取上清，分裝成小瓶，4℃保存。

膠原蛋白的提取方法：1.堿法提?。簤A法提取膠原蛋白常用的處理劑為石灰、氫氧化鈉、碳酸鈉等。如Holzer等[5]采用1%～1.5%石灰水浸泡的方法提取膠原蛋白。由于它容易造成肽鍵水解，因此得到的水解產(chǎn)物分子量比較低。所以，若想保留膠原的三股螺旋結(jié)構(gòu)，此法不可取。2.鹽法提?。蝴}法提取膠原蛋白所用的中性鹽有鹽酸-三羥甲基胺基甲烷(Tris-HCl)、氯化鈉、檸檬酸鹽等。在中性條件下，當(dāng)鹽的濃度達(dá)到一定量時(shí)，膠原溶解。并且可采用不同濃度的氯化鈉對(duì)提取的膠原蛋白進(jìn)行鹽析處理，可以沉淀出不同類型的膠原蛋白。

鼠尾膠原醋酸溶解：1．將鼠尾膠原加入到0.1M的醋酸中，制備成濃度為0.1%的溶液。在室溫中攪拌1-3小時(shí)直到完全溶解。2．建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。氯仿的量約為膠原溶液的10%。不要晃動(dòng)或攪拌。在2-8度中放置過(guò)夜。在無(wú)菌條件下轉(zhuǎn)移上層的膠原溶液。我們不建議用過(guò)濾的方法無(wú)菌化。已經(jīng)發(fā)現(xiàn)該方法會(huì)導(dǎo)致丟失蛋白。3．稀釋一定數(shù)量的膠原溶液。4．按照6-10ug/cm2的濃度包被培養(yǎng)瓶。在室溫或37度結(jié)合數(shù)小時(shí)或者2-8度過(guò)夜。5．從包被表面除去多余的液體。過(guò)夜干燥。如果膠原溶液不是無(wú)菌的，這時(shí)候可以在無(wú)菌細(xì)胞操作室中暴光在紫外線下過(guò)夜消毒。在接種細(xì)胞前用無(wú)菌的水漂洗。建議將溶液轉(zhuǎn)移到擰口的玻璃瓶中，并小心的在瓶底鋪上一層氯仿。

對(duì)于生物科研汪們來(lái)說(shuō)，大白鼠、小白鼠們簡(jiǎn)直渾身是寶，從毛發(fā)、皮膚，到心肝脾肺，甚至各種排泄物，都是我們重要的研究對(duì)象。尾巴，自然也是。所以耗子尾汁不僅存在，甚至是我們生物實(shí)驗(yàn)中必不可少的實(shí)驗(yàn)材料和實(shí)驗(yàn)對(duì)象。有不少人靠「耗子尾汁」發(fā)了CNS和頂刊。沒(méi)有「耗子尾汁」，很多課題可能都沒(méi)辦法開(kāi)展。在以小鼠為模式生物進(jìn)行科學(xué)研究的實(shí)驗(yàn)室中，日常和基本的一個(gè)實(shí)驗(yàn)就是提取它們的遺傳物質(zhì)—DNA（脫氧核糖核酸）進(jìn)行基因型鑒定，檢測(cè)這些小動(dòng)物的基因組中是否含有特定的DNA。可以理解為給小動(dòng)物做核酸檢測(cè)。鼠尾膠原，是一種天然培養(yǎng)基，它具有促進(jìn)體外培養(yǎng)細(xì)胞(特別是上皮細(xì)胞)貼壁的作用。蕪湖鼠尾膠原

將無(wú)菌5cm左右的紗布海綿貼在150mm培養(yǎng)皿的蓋子上來(lái)制備氨蒸氣室。青島鼠尾膠原廠家

鼠尾膠原實(shí)驗(yàn)應(yīng)用：鼠尾膠原為底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞培養(yǎng)模式的建立目的建立以鼠尾膠原為貼附底物的人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式，為人鼻腔黏液纖毛運(yùn)輸系統(tǒng)的研究提供科學(xué)有效的方法.方法制備鼠尾膠原并鋪片，以鼠尾膠原為貼附底物組織塊培養(yǎng)法培養(yǎng)人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞，培養(yǎng)7天時(shí)進(jìn)行HE染色及掃描電鏡和透射電鏡觀察細(xì)胞形態(tài)和結(jié)構(gòu)，應(yīng)用高速攝像技術(shù)測(cè)量纖毛擺動(dòng)頻率.結(jié)果鼠尾膠原要平坦均勻，平均厚度約為1mm；HE染色可見(jiàn)上皮細(xì)胞呈單層向周圍爬開(kāi)；掃描電鏡下見(jiàn)纖毛上皮細(xì)胞呈不規(guī)則多角形，纖毛周圍可見(jiàn)微絨毛;透射電鏡下可見(jiàn)纖毛上皮細(xì)胞間為緊密連接；同一細(xì)胞任意兩點(diǎn)纖毛擺動(dòng)頻率是相同的；同一來(lái)源體外培養(yǎng)的鉤突和下鼻甲的纖毛擺動(dòng)頻率是相同的.結(jié)論以鼠尾膠原為貼附底物人鼻腔纖毛上皮細(xì)胞的體外培養(yǎng)模式的成功建立，為今后研究鼻內(nèi)用藥對(duì)纖毛除去功能的影響提供了良好的方法和途徑。青島鼠尾膠原廠家