RNA提?。褐饕噭㏕rizol是一種新型總RNA抽提試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍等物質(zhì),能迅速破碎細(xì)胞,壓制細(xì)胞釋放出的核酸酶。1.Trizol試劑含有苯酚,具有毒性和刺激性,注重操作。2.RNase污染的主要來源是操作過程中手和空氣中的浮沉,注重配帶手套,樣品盡可能蓋嚴(yán)。3.細(xì)胞裂解必需充分且操作迅速。裂解不完全會降低較后得率,因為一部分RNA會殘留在未裂解的細(xì)胞中。細(xì)胞裂解之后要看不見顆粒狀物質(zhì)(結(jié)締組織和骨除外)。在清洗和裂解細(xì)胞時較好在低溫下操作,防止在操作過程中釋放的內(nèi)源RNase降解了RNA。4.酵母和一些細(xì)菌由于細(xì)胞壁的特別結(jié)構(gòu),可以加入Trizol試劑同時加入無RNase的玻璃珠并劇...
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒:1、多糖多酚植物RNA提取試劑盒整合了在提取過程中去除干擾物的技術(shù),已成功用于葡萄,中草藥等多糖含量高的樣品,成功用于棉花等多酚含量高的樣品。另外華越洋還開發(fā)了糖類清理劑,PCR壓制物清理劑,核酸提取優(yōu)化劑,樣品核酸穩(wěn)定劑,RNA組織樣品保存液等核酸提取輔助產(chǎn)品。2、適用材料普遍:尤其適合解決多醣多酚,色素等次級代謝物豐富的植物樣本難題。昆蟲RNA柱式提取試劑盒特點:操作簡單快速,處理一個樣品只需要約十分鐘。RNA純度高,平均OD260/280一般都在2.0左右,能夠有效去除大多數(shù)昆蟲中的多糖污染。適用于各種昆蟲組織,每100mg組織能提取到20~30μg總R...
糞便總RNA快速提取試劑盒:獨特裂解劑/裂解液迅速裂解細(xì)胞和滅活細(xì)胞內(nèi)核酸酶,然后RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于玻璃奶,然后將粗純化的玻璃奶轉(zhuǎn)移到離心柱,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,漂洗液將腐植酸、細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的洗脫緩沖液將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。試劑盒特點:離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好??朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。兼容性強(qiáng),適用于各種不同的土壤、糞便以及其他soil.不需要使用有毒的苯酚等試劑,也不需要乙醇沉淀等步驟。快速,簡捷,單個樣品操作一般可在1小時內(nèi)完成。多次柱漂洗確保高純...
超快速多糖多酚植物RNA提取試劑盒專門針對多糖,多酚等難提的植物RNA樣本提取設(shè)計,適用于棉花,甘薯,番茄,板栗,龍眼,荔枝,葡萄,番茄,龍眼,芒果,草莓,百合,獼猴桃,香蕉,梨,甘蔗,海棠,蘋果,石斛,銀杏,小麥,羊角吊蘭,水稻,玉米牡丹,月季,紅豆杉,馬鈴薯,白松松針,山藥,木瓜,吊蘭葉片RNA提,水仙花、青花菜、地被菊、梅花、石斛、毛桃、海棠、黑加侖、擬南芥、虎、大豆、草莓、冬青、月季、薔薇、沙棘、冬棗、蘆薈、仙人掌、報春花、唐菖蒲、櫻桃、白玉蘭、毛白楊、櫻花、百合花、紫菜、綠藻苧麻、榛子冬青樹,虎仗,黑加侖,黃瓜等農(nóng)作物,果實,花卉,蔬菜等多糖多酚,色素等次級代謝物嚴(yán)重的植物樣本RNA...
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒自主研發(fā)生產(chǎn),博取眾家之長,根據(jù)多年來市場反饋不斷進(jìn)行技術(shù)升級和改良得來。具有操作步驟少,實驗快捷,RNA產(chǎn)量純度高,充分滿足后續(xù)實驗要求的需要,適用提取樣品普遍等特點。產(chǎn)量:每100mg樣品提取的RNA平均值在20-50ug不等。純度:OD值一般在1.9以上。得到的RNA無DNA污染,可直接用于反轉(zhuǎn)錄,實時熒光定量PCR(尤其對RNA溶液中DNA非常敏感)等所有后續(xù)實驗。1、快速:多糖多酚植物RNA提取試劑盒提取RNA的整個實驗操作步驟簡化快捷從時間因素考量上較大限度的防止RNA在提取中的降解(一般樣品十多分鐘就能完一個樣RNA的提取,較大縮短了一般試劑盒提取...
如果把一個細(xì)胞比作一個城市,那么DNA就像是一個管理人員,它坐在細(xì)胞核內(nèi),監(jiān)視著“細(xì)胞城”的一舉一動,像哪里細(xì)胞膜破了需要修補(bǔ),什么時候需要合成蛋白質(zhì),顯而易見,光靠我們DNA管理人員一個人自然忙不過來啦,于是我們的DNA管理人員決定給自己找一些“打工仔”,它們就是RNA,但是近年來越來越多的研究發(fā)現(xiàn),這些RNA似乎遠(yuǎn)遠(yuǎn)不止一個普通默默無聞的“公務(wù)員”那樣簡單,它們在基因表達(dá)中發(fā)揮著不亞于DNA的巨大的作用,如2006年諾貝爾獎生理/醫(yī)學(xué)獎就頒發(fā)給了RNA干擾的兩位發(fā)現(xiàn)者。RNA干擾現(xiàn)象的發(fā)現(xiàn)為遺傳研究提供了一種強(qiáng)大的研究手段,這也說明這些對RNA的研究有著巨大的前景.而作為南大較好科研接班人...
昆蟲RNA柱式提取試劑盒使用方法:將50~300mg昆蟲組織放入10~15mL塑料離心管中,加入1mL溶液A,然后用勻漿器勻漿5~20秒。勻漿時會產(chǎn)生泡沫,但不影響提取效果。也可以使用液氮硯磨法破碎昆蟲組織,硯磨完后加入1mL溶液A。注意:溶解溶液A沉淀。溶液A在4℃放置后可能會產(chǎn)生沉淀,使用前必須放在65℃水浴使沉淀徹底溶解并充分搖勻后再取用。將勻漿物或硯磨物轉(zhuǎn)移至干凈的1.5mL塑料離心管中(可以不必轉(zhuǎn)移非液體的細(xì)胞碎片)。在離心管中加入0.3mL的溶液B和0.2mL自備氯仿,在振蕩器上振蕩30秒混勻,此時溶液呈均勻的乳濁狀。振蕩器振蕩時必須使管底溶液震蕩起來。室溫12000rmp離心3~...
酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型):一、原理簡介。改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。二、試劑盒特點:1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好??朔藝a(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點,不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免...
酵母總RNA快速提取試劑盒(離心柱型):一、原理簡介。改進(jìn)的異硫氰酸胍/酚一步法裂解細(xì)胞和滅活RNA酶,然后總RNA在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜,再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,去蛋白液和漂洗液將細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,較后低鹽的RNasefreewater將純凈RNA從硅基質(zhì)膜上洗脫。二、試劑盒特點:1、離心吸附柱內(nèi)硅基質(zhì)膜全部采用進(jìn)口世界有名公司特制吸附膜,柱與柱之間吸附量差異極小,可重復(fù)性好。克服了國產(chǎn)試劑盒膜質(zhì)量不穩(wěn)定的弊端。2、結(jié)合了異硫氰酸胍/酚一步法試劑穩(wěn)定性好,純度高和離心柱方便快捷的優(yōu)點,不需要異丙醇沉淀和乙醇洗滌過程,RNA可以直接從離心柱上洗脫避免...
總RNA提取試劑試劑能促進(jìn)不同種屬不同分子量大小的多種RNA的析出。例如,從大鼠肝臟抽提的RNA瓊脂糖凝膠電泳并用溴化乙啶染色,可見許多介于7kb和15kb之間不連續(xù)的高分子量條帶(mRNA和hnRNA成分),兩條優(yōu)勢核糖體~5kb(28S)和~2kb(18S),低分子量RNA介于0.1和0.3kb之間(tRNA,5S)。當(dāng)抽提的RNA用TE稀釋時其A260/A280比值≥1.8。注意如果是普通瓊脂糖凝膠電泳,28S的位置大約在2kb,18S大約在1kb的位置,不同濃度的凝膠位置變化較大。注意事項:樣品用總RNA提取試劑勻漿后,如果不即刻加入氯仿之前,置于-70°C下可放置一個月以上。保存在7...
RNA的提取:眾所周知,Trizol是一種RNA提取試劑,內(nèi)含異硫氰酸胍和酚等物質(zhì),能迅速破碎細(xì)胞和溶解細(xì)胞中的其他成分,壓制細(xì)胞釋放出核酸酶,維持細(xì)胞中RNA的穩(wěn)定性,我們可以在反應(yīng)物中加入Trizol后搖勻,在加入氯仿離心,這樣的話我們的RNA就進(jìn)入了水相中,再用異丙醇沉淀水相中的RNA,即可達(dá)到提取總RNA的目的了。首先我們需要稱取一定量的預(yù)處理好的廢酵母配10%左右的酵母溶液,在一定溫度下,加入一定濃度的氯化鈉,之后加入NaOH溶液調(diào)節(jié)反應(yīng)的pH,攪拌抽提一定時間后,離心分離上清液,調(diào)節(jié)pH至等電點,經(jīng)酒精沉淀獲得核糖核酸,用水定容至100mL取1m適當(dāng)稀釋,調(diào)pH7.0,這樣的話RN...
RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構(gòu)成。在細(xì)胞中,RNA種類繁多。根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA、rRNA,以及mRNA。mRNA是依據(jù)DNA序列轉(zhuǎn)錄而成的蛋白質(zhì)合成模板;tRNA是mRNA上遺傳密碼的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運者;rRNA是組成核糖體的部分,而核糖體是蛋白質(zhì)合成的場所。細(xì)胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,像是組成剪接體(spliceosome)的snRNA,負(fù)責(zé)rRNA成型的snoRNA,以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等,可調(diào)節(jié)基因表達(dá)。主要取決于離心柱對核酸的吸附能力。成都正規(guī)RNA提取試劑...
RNA是核糖核酸,是存在于生物細(xì)胞以及部分病菌、類病菌中的遺傳信息載體。RNA是由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成的長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子則由磷酸,核糖和堿基構(gòu)成。在細(xì)胞中,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA、rRNA,以及mRNA。mRNA是依據(jù)DNA序列轉(zhuǎn)錄而成的蛋白質(zhì)合成模板;tRNA是mRNA上遺傳密碼的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運者;rRNA是組成核糖體的部分,而核糖體是蛋白質(zhì)合成的機(jī)械。細(xì)胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,可調(diào)節(jié)基因表達(dá)。而其他如I、II型內(nèi)含子、HDV、核糖體RNA等等都有催化生化反應(yīng)過程的活性,即具有酶的活性,這類RNA被稱為核酶。細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞...
與DNA不同,RNA一般為單鏈長分子,不形成雙螺旋結(jié)構(gòu),但是很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結(jié)構(gòu)乃至三級結(jié)構(gòu)來行使生物學(xué)功能。RNA的堿基配對規(guī)則基本和DNA相同,不過除了A-U、G-C配對外,G-U也可以配對。在細(xì)胞中,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA(轉(zhuǎn)運RNA),rRNA(核糖體RNA),mRNA(信使RNA)。mRNA是合成蛋白質(zhì)的模板,內(nèi)容按照細(xì)胞核中的DNA所轉(zhuǎn)錄;tRNA是mRNA上堿基序列(即遺傳密碼子)的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運者;rRNA是組成核糖體的組分,是蛋白質(zhì)合成的工作場所。細(xì)胞質(zhì)和細(xì)胞核RNA提取試劑盒特點:有效分離和提取細(xì)胞質(zhì)RNA,與細(xì)...
提取RNA的詳細(xì)步驟:首先,將研缽晾干夠,倒入1/3體積的液氮,加入0.2g均質(zhì)的植物材料,充分研磨后轉(zhuǎn)入一個含有300微升GMT的1.5ml的離心管中,搖勻。然后,加入30微升2mol/lNaAc進(jìn)行搖勻,加入300微升酸酚搖勻,加入100微升的氯仿?lián)u勻。然后,在四攝氏度12000r/min下離心二十分鐘,吸取上清液的3/4,加入等體積的異丙醇,于冰上放置十五分鐘。然后,在四攝氏度12000r/min下離心十分鐘,將沉淀懸浮于含100微升的4mol/lLiCl小試管中,于-20攝氏度下放置過夜。然后,在4攝氏度13000r/min下離心10-15min,將沉淀溶于0.4mlDEPC處理水中,...
ScRNA存在于細(xì)胞質(zhì)中,與蛋白質(zhì)結(jié)合成復(fù)合體后發(fā)揮生物學(xué)功能。ScRNA-seq技術(shù)應(yīng)用普遍,于2017年就有科學(xué)家利用scRNA繪制出首張小腸細(xì)胞圖譜,這不僅增強(qiáng)了我們對腸道細(xì)胞產(chǎn)生物體和其他信號的理解,還為腸道如何對不同入侵病原菌做出應(yīng)答提供了新的線索??茖W(xué)家還通過scRNA-seq技術(shù)揭示了之前位置的細(xì)胞亞型,并詳細(xì)說明了病菌和病原體入侵傳染時小腸上皮的變化。ScRNA-seq技術(shù)為更詳細(xì)地研究細(xì)胞和組織及疾病提供了新的途徑。siRNA即小干擾RNA,約20-25個核苷酸,由兩條互補(bǔ)的核酸鏈組成,在RNA干擾過程中通過互補(bǔ)的核苷酸序列來干擾特定基因的表達(dá)。siRNA與載體結(jié)合已應(yīng)用于基...
RNA提取真正需要注意的要點:你的植物組織樣本采樣、保存正常嗎?組織裂解充分了嗎?組織起始量是否過大?起始量過大的話,他們得帶進(jìn)去多少RNase呀,導(dǎo)致裂解液不能充分壓制內(nèi)源性的RNase,失敗就在預(yù)料之中!你的細(xì)胞活性好嗎?細(xì)胞都到衰亡期了,你提什么RNA呀;細(xì)胞加的那么多,破壁不充分,怎么裂解的好呢,他們本身得帶進(jìn)去多少內(nèi)源性RNase污染呀!轉(zhuǎn)移液體時吸到沉淀了嗎?吸水相時碰到中間層了嗎?乙醇干燥凈了嗎?裂解樣本的過程是重中之重液氮研磨(手工):要先加液氮預(yù)冷一下研缽,然后研磨,研磨過程要保證研缽中一直有少量液氮,研磨完成一個樣本后,直接加入裂解液渦旋震蕩后放常溫,或者直接丟到液氮中,全...
拭子RNA提取試劑的選擇?拭子樣本的量與提取的核酸量成正比,如果要提高核酸得率,也可通過增加樣本量來實現(xiàn)。一般先取一根拭子的涮洗液樣本,然后進(jìn)行提取,如結(jié)果不理想可考慮增加樣本量或重新采樣。但如果增加樣本量或重新采樣還不能得到滿意結(jié)果,應(yīng)及時考慮更換試劑盒。目前國內(nèi)常用的拭子核酸提取試劑有Q、Biog等。根據(jù)我們的經(jīng)驗,Q和T品牌試劑盒的拭子RNA提取得率(一根口腔拭子在口咽部來回刮擦10次)在0.5-3.5ug。同樣處理的口咽拭子,Biog試劑盒的提取得率在1-4ug,基本上都能滿足下游PCR相關(guān)實驗的要求。很多RNA也需要通過堿基配對原則形成一定的二級結(jié)構(gòu)乃至三級結(jié)構(gòu)來行使生物學(xué)功能。合肥...
RNA是核糖核酸,是存在于生物細(xì)胞以及部分病菌、類病菌中的遺傳信息載體。RNA是由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成的長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子則由磷酸,核糖和堿基構(gòu)成。在細(xì)胞中,根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA、rRNA,以及mRNA。mRNA是依據(jù)DNA序列轉(zhuǎn)錄而成的蛋白質(zhì)合成模板;tRNA是mRNA上遺傳密碼的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運者;rRNA是組成核糖體的部分,而核糖體是蛋白質(zhì)合成的機(jī)械。細(xì)胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,可調(diào)節(jié)基因表達(dá)。而其他如I、II型內(nèi)含子、HDV、核糖體RNA等等都有催化生化反應(yīng)過程的活性,即具有酶的活性,這類RNA被稱為核酶。拭子RNA提...
通用多糖多酚植物RNA提取試劑盒:1、多糖多酚植物RNA提取試劑盒整合了在提取過程中去除干擾物的技術(shù),已成功用于葡萄,中草藥等多糖含量高的樣品,成功用于棉花等多酚含量高的樣品。另外華越洋還開發(fā)了糖類清理劑,PCR壓制物清理劑,核酸提取優(yōu)化劑,樣品核酸穩(wěn)定劑,RNA組織樣品保存液等核酸提取輔助產(chǎn)品。2、適用材料普遍:尤其適合解決多醣多酚,色素等次級代謝物豐富的植物樣本難題。昆蟲RNA柱式提取試劑盒特點:操作簡單快速,處理一個樣品只需要約十分鐘。RNA純度高,平均OD260/280一般都在2.0左右,能夠有效去除大多數(shù)昆蟲中的多糖污染。適用于各種昆蟲組織,每100mg組織能提取到20~30μg總R...
RNA提取試劑的選擇:首先,要確定材料的可用性。盡管現(xiàn)有的RNA提取試劑都用壓制RNase的成分,但提取的材料仍需謹(jǐn)慎處理。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關(guān)鍵,但是由于種種原因無法立即從新鮮材料中提取RNA時,使用Takara公司的樣品保護(hù)劑SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低溫冰箱的不便,同時也可以有效解決組織、細(xì)胞樣品的短時間保存及運輸問題。此外,如果將不同時期收集的樣品都預(yù)先存放于本試劑中,可以做到立即終止并固定RNA表達(dá)的時序變化,減少實驗組間的誤差。拭子RNA提取試劑的選擇?離心柱的硅膠膜RNA吸附性能好、裂解液細(xì)胞裂解能力強(qiáng)。南昌正規(guī)RNA...
RNA提取試劑的選擇:首先,要確定材料的可用性。盡管現(xiàn)有的RNA提取試劑都用壓制RNase的成分,但提取的材料仍需謹(jǐn)慎處理。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關(guān)鍵,但是由于種種原因無法立即從新鮮材料中提取RNA時,使用Takara公司的樣品保護(hù)劑SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低溫冰箱的不便,同時也可以有效解決組織、細(xì)胞樣品的短時間保存及運輸問題。此外,如果將不同時期收集的樣品都預(yù)先存放于本試劑中,可以做到立即終止并固定RNA表達(dá)的時序變化,減少實驗組間的誤差。RNA提取試劑注意事項:耐高溫器物可150℃烘烤4小時以去除RNA酶。青島RNA提取試劑產(chǎn)品介...
RNA的全稱是什么?核酸是一個叫米歇爾的瑞士青年化學(xué)家發(fā)現(xiàn)的,那還是1869年的事,到了1909年,一位美國生化學(xué)家又發(fā)現(xiàn)核酸中的碳水化合物有兩種核糖分子,因此核酸也有兩種,一種叫脫氧核糖酸,英文縮寫就是DNA,另一種是核糖核酸,英文縮寫是RNA。DNA一般只在細(xì)胞核中,而RNA除了在細(xì)胞核中外,還分布在細(xì)胞質(zhì)中。rna通過什么生成的?1、先是合成與RNA互補(bǔ)的DNA單鏈,然后DNA單鏈在DNA聚合酶的作用下繼續(xù)合成為DNA雙鏈。zhuan2、逆轉(zhuǎn)錄(reversetranscription)是以RNA為模板shu合成DNA的過程,即RNA指導(dǎo)下的DNA合成。是RNA病菌的復(fù)制形式,需逆轉(zhuǎn)錄酶...
總RNA提取試劑是一種快速從組織細(xì)胞中提取總RNA的單相試劑。在樣品裂解過程中TRIzol能夠壓制RNA酶活性保持RNA完整性;加入氯仿后離心,RNA相將與DNA和蛋白質(zhì)分離,隨后用異丙醇沉淀RNA。如果需要還可以繼續(xù)提取DNA和蛋白質(zhì)。純化的總RNA可用于RT-PCR、NorthernBlot、RNA酶保護(hù)、Poly(A)mRNA純化、體外翻譯等實驗。是一種快速從組織細(xì)胞中提取總RNA的單相試劑。在樣品裂解過程中TRIzol能夠壓制RNA酶活性保持RNA完整性;加入氯仿后離心,RNA相將與DNA和蛋白質(zhì)分離,隨后用異丙醇沉淀RNA。如果需要還可以繼續(xù)提取DNA和蛋白質(zhì)。純化的總RNA可用于R...
RNA提取濃度不高或質(zhì)量不佳原因及解決辦法:1、RNA降解:可能是提取樣本本身降解,或者是在提取過程中導(dǎo)致的降級;應(yīng)當(dāng)盡可能使用新鮮樣本進(jìn)行RNA提取,采集的樣本應(yīng)當(dāng)及時置于液氮或者-80℃冰箱凍存,并減少反復(fù)凍融。在RNA提取過程中應(yīng)當(dāng)使用RNase/DNasefree的吸頭、離心管及其他材料,提取過程盡可能的快,提取后的RNA應(yīng)置于冰盒上并及時放于-80凍存。如提取后的RNA需要進(jìn)行凝膠電泳檢測,則應(yīng)提取好后立刻進(jìn)行電泳,電泳緩沖液應(yīng)更換新配制的。2、鹽及有機(jī)溶劑殘留:提取試劑中含有酚及胍鹽,洗滌液中含有乙醇,在提取過程中裂解液吸棄不徹底,洗液沒有充分晾干導(dǎo)致的,殘留的鹽及有機(jī)溶劑對后續(xù)的...
游離RNA(或稱循環(huán)RNA,cell-freeRNA,簡稱cfRNA),即存在于細(xì)胞外的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物,包括mRNA和RNA,在人的多種體液中被普遍研究并成為疾病無創(chuàng)性診斷和研究的新分子標(biāo)志物。文獻(xiàn)總結(jié)了以下兩個方面,一方面游離RNA主要來源于tumour細(xì)胞,另一方面tumour細(xì)胞來源有凋亡、壞死、主動釋放三種機(jī)制,目前認(rèn)為以凋亡為主。游離RNA的生物學(xué)特征:游離RNA的結(jié)構(gòu)RNA相對DNA而言,更易被普遍存在的核糖核酸酶所降解,而且病癥患者血清中含有更高濃度的核糖核酸酶,病癥患者血清中以RNA-蛋白脂復(fù)合物化學(xué)組成來保護(hù)RNA,半衰期大約為2天。本試劑盒采用獨特的配方和添加劑,能高效的分離血清...
RNA提取試劑的選擇:首先,要確定材料的可用性。盡管現(xiàn)有的RNA提取試劑都用壓制RNase的成分,但提取的材料仍需謹(jǐn)慎處理。提取的材料的新鮮度是獲取完整RNA的關(guān)鍵,但是由于種種原因無法立即從新鮮材料中提取RNA時,使用Takara公司的樣品保護(hù)劑SampleProtectorforRNA/DNA可以免去使用液氮或超低溫冰箱的不便,同時也可以有效解決組織、細(xì)胞樣品的短時間保存及運輸問題。此外,如果將不同時期收集的樣品都預(yù)先存放于本試劑中,可以做到立即終止并固定RNA表達(dá)的時序變化,減少實驗組間的誤差~提取的RNA樣品中不應(yīng)存在對酶存在壓制作用的有機(jī)溶劑及過高濃度的金屬離子。成都RNA提取試劑廠...
RNA提取試劑注意事項:1、需自備氯仿,異丙醇,DEPC,75%乙醇(DEPC水配制),和DEPC水。2、所有離心管,泵頭及相關(guān)溶液都必須無RNA酶污染。耐高溫器物可150℃烘烤4小時以去除RNA酶,其它器物去除RNA酶可考慮用0.01%的DEPC水浸泡過夜,然后滅菌,烘干。溶液需用DEPC水配制。加0.01%(體積比)diethylpyrocarbonate(DEPC)至重蒸水或MiliQ級水中,處理過夜,滅菌即成DEPC水。3、使用凍存的細(xì)胞或組織抽提總RNA的效果通常比新鮮的細(xì)胞或組織差一些。因為在細(xì)胞或組織凍融過程中一些細(xì)胞或組織內(nèi)的RNase會被釋放出來并剪切樣品。如果不能及時抽提R...
植物RNA提取:植物組織中,富含酚類化合物,或富含多糖,或含有某些尚無法確定的次級代謝產(chǎn)物,或RNase的活性較高。這些物質(zhì)在細(xì)胞裂解后與RNA緊密結(jié)合形成難溶復(fù)合物或者膠狀沉淀,很難將其去除。所以我們在提取植物組織時,要選取針對植物的試劑盒,試劑盒里的裂解液能有效解決多酚易氧化、多糖化合物與核酸分離等難題。1、植物的果皮、果肉、種子、葉片等要在研缽中充分研磨,研磨過程中液氮要及時補(bǔ)充,避免樣品融化,研磨后的樣品應(yīng)迅速加入裂解液中震蕩混勻,避免RNA降解。2、像水稻及小麥葉片等富含纖維的樣本,則應(yīng)適當(dāng)減少提取用量,否則組織研磨及裂解不徹底,會使提取的RNA產(chǎn)量較低。3、含水分較多的植物組織例如...
RNA由核糖核苷酸經(jīng)磷酸二酯鍵縮合而成長鏈狀分子。一個核糖核苷酸分子由磷酸,核糖和堿基構(gòu)成。在細(xì)胞中,RNA種類繁多。根據(jù)結(jié)構(gòu)功能的不同,RNA主要分三類,即tRNA、rRNA,以及mRNA。mRNA是依據(jù)DNA序列轉(zhuǎn)錄而成的蛋白質(zhì)合成模板;tRNA是mRNA上遺傳密碼的識別者和氨基酸的轉(zhuǎn)運者;rRNA是組成核糖體的部分,而核糖體是蛋白質(zhì)合成的場所。細(xì)胞中還有許多種類和功能不一的小型RNA,像是組成剪接體(spliceosome)的snRNA,負(fù)責(zé)rRNA成型的snoRNA,以及參與RNAi作用的miRNA與siRNA等,可調(diào)節(jié)基因表達(dá)。植物花總RNA提取試劑盒:可以從多糖多酚植物的根、莖、葉...