浙江全基因組甲基化重測(cè)序技術(shù)服務(wù)

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2022-01-19

DNA甲基化過(guò)程在一些生物學(xué)現(xiàn)象中起重要作用。例如,在原核生物中,它參與毒力、細(xì)胞周期調(diào)控、基因表達(dá)和對(duì)外源 DNA 導(dǎo)入的保護(hù)(DNA-宿主特異性)等過(guò)程。在高等真核生物中,DNA 甲基化參與調(diào)控染色體穩(wěn)定性、印記、X 染色體失活和cancer 變等多個(gè)細(xì)胞過(guò)程。在哺乳動(dòng)物中,DNA 甲基化主要發(fā)生在胞嘧啶堿基的第五個(gè)碳原子上,形成 5-甲基胞嘧啶或 5-甲基胞嘧啶核苷 (5-mC)。DNA甲基化幾乎只存在于CpG二核苷酸上,是一個(gè)關(guān)鍵的表觀遺傳標(biāo)記和基因表達(dá)調(diào)控因子?;騿?dòng)子或 CpG 島處的甲基化 CpG 簇與基因失活有關(guān)。DNA 甲基化由一個(gè)被稱為 DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶并包括 DNMT1、DNMT3a 和 DNMT3b 的酶家族催化。DNMT3a 和 DNMT3b是從頭合成的甲基轉(zhuǎn)移酶,能夠甲基化之前未甲基化的 CpG二核苷酸。相反,DNMT1是一種維持性甲基轉(zhuǎn)移酶,在復(fù)制過(guò)程中修飾半甲基化的 DNA。甲基化的金標(biāo)準(zhǔn)是亞硫酸氫鹽測(cè)序法.浙江全基因組甲基化重測(cè)序技術(shù)服務(wù)

DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)修飾的主要形式,甲基化模式的異常促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化,參與tumour演進(jìn)。許多基因具有tumour特異性的甲基化表型,一方面基因組普遍的低甲基化引起原cancer基因活化,基因組不穩(wěn)定性增加;另一方面啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化,引起抑cancer基因及錯(cuò)配修復(fù)基因表達(dá)沉默,導(dǎo)致tumour的發(fā)生。研究表明,基因組的低甲基化隨著細(xì)胞惡性度的增加而愈加明顯,是病情診斷的重要指標(biāo);此外,CpG島局部的高甲基化發(fā)生于細(xì)胞惡變之前,能在早期預(yù)測(cè)tumour的發(fā)生,其也能有效地預(yù)測(cè)tumour的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移,在tumour的鑒別診斷中亦發(fā)揮重要作用。因此,檢測(cè)tumour發(fā)生中相關(guān)基因的甲基化模式具有重要意義,現(xiàn)就近年來(lái)中外文獻(xiàn)報(bào)道的甲基化檢測(cè)方法進(jìn)行簡(jiǎn)要的分析總結(jié)。北京目標(biāo)區(qū)段甲基化重測(cè)序哪個(gè)公司做DNA甲基化是在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下將甲基選擇性地添加到胞嘧啶上形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)的過(guò)程。

DNA甲基化屬于表觀遺傳的范疇。表觀遺傳屬于一種可以對(duì)環(huán)境產(chǎn)生應(yīng)答和改變的遺傳機(jī)制。機(jī)體細(xì)胞在經(jīng)歷脅迫、創(chuàng)傷等環(huán)境變化后,會(huì)產(chǎn)生特定的應(yīng)答,并往往會(huì)用DNA甲基化、組蛋白修飾等形式將應(yīng)激的模式記錄在DNA修飾中。這種脅迫記憶可以幫助細(xì)胞在面臨下一次應(yīng)激的時(shí)候快速適應(yīng)。同時(shí),這種表觀修飾可以通過(guò)遺傳的方式傳遞給下一代細(xì)胞。對(duì)于高等動(dòng)植物,通常壽命都比較漫長(zhǎng)。在漫長(zhǎng)的一生中,一方面機(jī)體會(huì)經(jīng)歷大量的環(huán)境應(yīng)答,另一方面細(xì)胞將會(huì)分裂多代。那么機(jī)體就更需要將應(yīng)答的信息,存儲(chǔ)在DNA甲基化中傳遞給后代的細(xì)胞,以提高這個(gè)物種的環(huán)境適應(yīng)能力。

DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾,它是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyl-transferase, DNMT)催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine, SAM)作為甲基供體,將胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?-甲基胞嘧啶(mC)的一種反應(yīng),在真核生物DNA中,5-甲基胞嘧啶是存在的化學(xué)性修飾堿基。CG二核苷酸是**主要的甲基化位點(diǎn),它在基因組中呈不均勻分布,存在高甲基化、低甲基化和非甲基化的區(qū)域,在哺乳動(dòng)物中mC約占C總量的2-7%。甲基化檢測(cè)服務(wù)-亞硫酸氫鈉處理后測(cè)序法 (bisulfite genomic sequencing PCR, BSP)是利用未甲基化的胞嘧啶可以被亞硫酸氫鈉發(fā)生脫氨基變?yōu)槟蜞奏さ脑?,用兩一特異性引物擴(kuò)增后測(cè)序。測(cè)序法克服了只能針對(duì)單個(gè)位點(diǎn)檢測(cè),并且這些位點(diǎn)必須是限制性內(nèi)切酶識(shí)別位點(diǎn)的缺點(diǎn),可以對(duì)任何基因序列的甲基化狀態(tài)進(jìn)行檢測(cè)。DNA甲基化測(cè)序可在全基因組水平上比較大限度的、完整的獲取甲基化狀態(tài)信息和與基因表達(dá)調(diào)控的多重關(guān)系.

亞硫酸氫鈉修飾后測(cè)序法是一種對(duì)DNA進(jìn)行亞硫酸氫鈉處理、聚合酶鏈反應(yīng)擴(kuò)增與DNA測(cè)序相結(jié)合的方法,能夠提供測(cè)定區(qū)域的序列信息,準(zhǔn)確定位甲基化胞嘧啶位點(diǎn);重亞硫酸鹽修飾后,甲基化胞嘧啶保持不變,但非甲基化胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏?,PCR擴(kuò)增后為胸腺嘧啶,其將甲基化狀態(tài)的差異轉(zhuǎn)化成堿基的差異,從而對(duì)胞嘧啶的甲基化狀態(tài)進(jìn)行分析;但在亞硫酸鈉處理的酸性環(huán)境下,單鏈特異性PCR模板穩(wěn)定性下降,容易降解;并且模板鏈CG二核苷酸水平高易形成復(fù)雜的二級(jí)結(jié)構(gòu),常出現(xiàn)非特異性條帶,結(jié)合“巢式PCR法”能明顯提高擴(kuò)增的特異度。DNA甲基化是研究**為普遍的表觀遺傳修飾,它被認(rèn)為在許多生物學(xué)過(guò)程和疾病中有著重要的作用。天津目標(biāo)區(qū)間甲基化重測(cè)序機(jī)構(gòu)

上海翼和生物通過(guò)亞硫酸氫鹽處理,用PCR擴(kuò)增目的片段,并結(jié)合二代測(cè)序平臺(tái)并對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行測(cè)序。浙江全基因組甲基化重測(cè)序技術(shù)服務(wù)

DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)領(lǐng)域研究的重點(diǎn)之一。DNA甲基化是指在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferase, 縮寫DNMT)的作用下,基因組DNA序列上CpG島的二核苷酸5′端胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?′甲基胞嘧啶(5′ methylcytosine, 縮寫5mC)。這種DNA修飾的方式并未改變基因的序列, 但能改變某些基因的表達(dá),從而影響生物學(xué)功能。DNA 甲基化參與眾多的細(xì)胞生命活動(dòng),包括細(xì)胞分化、組織特異性基因表達(dá)、基因組印記、X 染色體失活等。異常的 DNA 甲基化會(huì)導(dǎo)致發(fā)育異常、tumour等疾病的發(fā)生。浙江全基因組甲基化重測(cè)序技術(shù)服務(wù)

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