成都目標(biāo)甲基化重測序怎么解決

來源: 發(fā)布時間:2022-01-18

目標(biāo)區(qū)域甲基化重測序(Hi-Methylseq)結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴增子高通量測序技術(shù),可實現(xiàn)多區(qū)段、多位點的甲基化精確定量分析,特別適合隊列樣本目標(biāo)區(qū)域的甲基化分析,測序深度高,結(jié)果更加準(zhǔn)確。適用于感興趣目的片段甲基化研究;適用于在大樣本中進一步確認(rèn)全基因組甲基化研究挑選的陽性位點(DMR)。農(nóng)口上:表觀遺傳學(xué)研究、品種鑒定、品種改良;醫(yī)口上:tumour早期診斷、表觀遺傳學(xué)生物標(biāo)志物開發(fā)、tumour復(fù)發(fā)的 預(yù)測因子。DNA復(fù)制后胞嘧啶的甲基化會改變DNA的構(gòu)象,使DNA的大溝無法與DNA結(jié)合蛋白正常結(jié)合。成都目標(biāo)甲基化重測序怎么解決

上海翼和生物甲基化測序采用的是重亞硫酸鹽擴增子測序法(Bisulfite Amplicon Sequencing, BSAS),重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化是研究DNA甲基化的金標(biāo)方法,該技術(shù)基于非甲基化胞嘧啶(C)向尿嘧啶(U)的化學(xué)轉(zhuǎn)化,即用重亞硫酸鹽處理基因組DNA,非甲基化胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而甲基化胞嘧啶不發(fā)生這種轉(zhuǎn)化,從而能夠在單核苷酸水平上確定DNA甲基化(圖1)。轉(zhuǎn)化后的序列可以進行多種分析,包括重亞硫酸鹽測序、焦磷酸測序、甲基化特異性PCR、高分辨率熔解曲線分析、基于微陣列的方法和下一代測序。北京目標(biāo)甲基化重測序機構(gòu)DNA甲基化可引起基因組中相應(yīng)區(qū)域染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化,使DNA失去核酶限制性內(nèi)切酶的切割位點,。

DNA(主要是CpG的)甲基化是其遺傳機制和表型效應(yīng)**為明確的表觀遺傳性機制。DNA甲基化譜式的變化不僅指導(dǎo)在正常發(fā)育過程中細(xì)胞譜系特化所依據(jù)的基因組轉(zhuǎn)錄譜式的改變,且在疾病發(fā)生和發(fā)展的基因表達(dá)異化中起著決定性的作用。為了高效準(zhǔn)確的分析基因組中所有的甲基化位點,可采用全基因組甲基化(Whole Genome Bisulfite Sequence,WGBS)。亞硫酸氫鹽處理是一種分類5-甲基胞嘧啶和非甲基化堿基的有效方法之一,包括基于序列、熔化溫度和交互的分析,WGBS是通過重亞硫酸氫鹽使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)脫氨基轉(zhuǎn)變?yōu)槟蜞奏ぃ║),而甲基化的胞嘧啶保持不變,再經(jīng)PCR將U轉(zhuǎn)變?yōu)門,結(jié)合NGS便可高效準(zhǔn)確地分析基因組中所有甲基化位點。

DNA甲基化屬于表觀遺傳的范疇。表觀遺傳屬于一種可以對環(huán)境產(chǎn)生應(yīng)答和改變的遺傳機制。機體細(xì)胞在經(jīng)歷脅迫、創(chuàng)傷等環(huán)境變化后,會產(chǎn)生特定的應(yīng)答,并往往會用DNA甲基化、組蛋白修飾等形式將應(yīng)激的模式記錄在DNA修飾中。這種脅迫記憶可以幫助細(xì)胞在面臨下一次應(yīng)激的時候快速適應(yīng)。同時,這種表觀修飾可以通過遺傳的方式傳遞給下一代細(xì)胞。對于高等動植物,通常壽命都比較漫長。在漫長的一生中,一方面機體會經(jīng)歷大量的環(huán)境應(yīng)答,另一方面細(xì)胞將會分裂多代。那么機體就更需要將應(yīng)答的信息,存儲在DNA甲基化中傳遞給后代的細(xì)胞,以提高這個物種的環(huán)境適應(yīng)能力。DNA甲基化在DNA復(fù)制起始、錯配修復(fù)以及轉(zhuǎn)座子的失活等過程中對維持遺傳信息的穩(wěn)定性發(fā)揮著重要的作用。

DNA甲基化是一種重要的表觀遺傳學(xué)標(biāo)記,在調(diào)控基因表達(dá)、細(xì)胞的分化與發(fā)育等過程中發(fā)揮著關(guān)鍵作用。使用基于重亞硫酸氫鹽測序的方法進行DNA甲基化評估:首先用亞硫酸氫鹽處理基因組DNA可將未甲基化胞嘧啶轉(zhuǎn)化為尿嘧啶(黃色字母),而甲基化胞嘧啶保留為胞嘧啶(白色字母);然后進行兩輪PCR:first輪PCR分別放大每個樣本的每個區(qū)域,并添加8個隨機核苷酸(N8)用于重復(fù)數(shù)據(jù)消除和適配體序列;在匯集每個生物樣本的擴增子后,第二輪PCR完成帶有樣本barcode的序列庫,用于多樣本NGS測序。上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽處理,用PCR擴增目的片段,并結(jié)合二代測序平臺并對PCR產(chǎn)物進行測序。浙江目標(biāo)甲基化重測序技術(shù)服務(wù)

上海翼和生物甲基化測序采用的是重亞硫酸鹽擴增子測序法,重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化是研究DNA甲基化的金標(biāo)方法。成都目標(biāo)甲基化重測序怎么解決

DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)的重要內(nèi)容。DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。DNA甲基化修飾對于維持正常細(xì)胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發(fā)育以及人類tumour發(fā)生,起著至關(guān)重要的作用。甲基化研究成為表觀遺傳學(xué)的熱點,相應(yīng)的技術(shù)也是層出不窮,根據(jù)實驗?zāi)康牡牟煌?,這些技術(shù)大體能夠分成兩類:全基因組甲基化檢測技術(shù)以及特異性位點甲基化檢測技術(shù)。翼和特色內(nèi)容目標(biāo)區(qū)域甲基化測序自主知識產(chǎn)權(quán)超高重PCR為基礎(chǔ),目標(biāo)甲基化區(qū)段特異性捕獲,更具針對性,經(jīng)濟型基于二代測序,可以獲得目標(biāo)區(qū)域內(nèi)所有C的甲基化數(shù)據(jù)~500X的測序深度,精確計算每個位點C的甲基化程度通量高,可同時對成百上千個區(qū)域進行甲基化程度分析適用于大樣本多區(qū)域的DNA甲基化水平檢測Q30>80%檢出率90%以上,90%以上測序片段測序深度>10X。成都目標(biāo)甲基化重測序怎么解決

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