目前市場上有多個廠家提供HRM分析的儀器，包括IdahoTechnology、Corbett（QIAGEN）、Roche等，有些是HRM的儀器，有些則是附帶HRM功能的定量PCR儀。HRM的發(fā)明者—美國猶他大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Wittwer實驗室曾評估了市場上多臺儀器在基因分型和突變掃描上的性能1。他們發(fā)現(xiàn)，對于大部分儀器的準(zhǔn)確基因分型來說，主要限制在于平板上的空間溫度差異（Tm的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.020-0.264°C）。其它差異如數(shù)據(jù)密度、信噪比和熔解速率，也會影響雜合體的掃描。經(jīng)過比較發(fā)現(xiàn)，空氣加熱型儀器以及樣品溫度單獨控制的儀器有著更低的Tm標(biāo)準(zhǔn)偏差（0.018-0.065），而加熱塊型儀器則在0.092-0.274。SNP應(yīng)該在群體中占一定的比例，比如至少是1%。安徽STR/SSRSNP分型分析
3.HRM法高分辨率熔解曲線分析（HRM）是近幾年興起的SNP研究工具，它通過實時監(jiān)測升溫過程中雙鏈DNA熒光染料與PCR擴增產(chǎn)物的結(jié)合情況，來判斷是否存在SNP，而且不同SNP位點、是否是雜合子等都會影響熔解曲線的峰形，因此HRM分析能夠有效區(qū)分不同SNP位點與不同基因型。這種檢測方法不受突變堿基位點與類型的局限，無需序列特異性探針，在PCR結(jié)束后直接運行高分辨率熔解，即可完成對樣品基因型的分析。該方法無需設(shè)計探針，操作簡便、快速，成本低，結(jié)果準(zhǔn)確，并且實現(xiàn)了真正的閉管操作。山東微衛(wèi)星標(biāo)記SNP分型只是偶是做tumour的，所以提Cancer Research提得比較多。
這種熔解分析只能區(qū)分在片段大小和GC含量上差別較比較明顯的DNA序列，比如檢查PCR擴增產(chǎn)物中是否存在引物二聚體及其他非特異性的擴增。如果要區(qū)分SNP，分辨率還不夠。為什么呢？這里有必要先介紹一下飽和染料和非飽和染料。SYBRGreenI就屬于非飽和性染料，由于它對PCR的抑制作用，在實驗中的使用濃度很低，遠(yuǎn)未將DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中的小溝飽和。這樣，DNA雙鏈高溫變性時，單鏈部分的熒光染料分子發(fā)生重排，熒光染料分子重新結(jié)合到雙鏈DNA的空置位點，造成熒光信號沒有變化，因此出現(xiàn)假陰性，特異性下降。
3、SNP等位基因頻率的容易估計。采用混和樣本估算等位基因的頻率是種高效快速的策略。該策略的原理是：首先選擇參考樣本制作標(biāo)準(zhǔn)曲線，然后將待測的混和樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較，根據(jù)所得信號的比例確定混和樣本中各種等位基因的頻率。4、易于基因分型。SNPs的二態(tài)性，也有利于對其進(jìn)行基因分型。對SNP進(jìn)行基因分型包括三方面的內(nèi)容：（1）鑒別基因型所采用的化學(xué)反應(yīng)，常用的技術(shù)手段包括：DNA分子雜交、引物延伸、等位基因特異的寡核苷酸連接反應(yīng)、側(cè)翼探針切割反應(yīng)以及基于這些方法的變通技術(shù)；（2）完成這些化學(xué)反應(yīng)所采用的模式，包括液相反應(yīng)、固相支持物上進(jìn)行的反應(yīng)以及二者皆有的反應(yīng)。（3）化學(xué)反應(yīng)結(jié)束后，需要應(yīng)用生物技術(shù)系統(tǒng)檢測反應(yīng)結(jié)果。可以根據(jù)以往文獻(xiàn)，在所研究疾病的多個候選基因上面選擇多個SNP，比如選擇DNA修復(fù)通路中幾個基因的重要SNP.
二代測序法主要通過PCR的方法，對目標(biāo)SNP位點進(jìn)行特異性捕獲。為了提型的通量，目前多采用多重PCR的方法同時對多個位點進(jìn)行捕獲（可同時對1-100位點進(jìn)行分型）。由于二代測序通量是足夠滿足數(shù)百數(shù)千樣本的同時測序，因此需要對不同的樣本添加的樣本標(biāo)簽（Barcode），從而在后續(xù)數(shù)據(jù)分析過程中，能夠進(jìn)行樣本拆分。因此在多重PCR完成輪多SNP位點捕獲后，需要進(jìn)行第二輪PCR，在輪PCR產(chǎn)物的基礎(chǔ)上，添加樣本樣本標(biāo)簽及測序接頭等序列。通過PCR條件優(yōu)化，目前亦可實現(xiàn)一次反應(yīng)，兩輪PCR接力完成的效果。SNP數(shù)量多，分布很普遍。浙江微衛(wèi)星標(biāo)記strSNP分型外包服務(wù)
DNA分子雜交、引物延伸、等位基因特異的寡核苷酸連接反應(yīng)、側(cè)翼探針切割反應(yīng)以及基于這些方法的變通技術(shù).安徽STR/SSRSNP分型分析
相比Taqman熒光探針法，KASP技術(shù)只要合成兩個通用熒光探針，兩個通用淬滅探針，通用熒光探針來代替針對位點的熒光探針，極大節(jié)約成本。同時配套SNPline基因分型儀器平臺，可以進(jìn)行高通量的SNP分型規(guī)模。該方法利用多重PCR技術(shù)，同時捕獲數(shù)十上百個SNP位點，Barcode引物區(qū)分不同樣本，實現(xiàn)一次上機測序，完成多位點，大樣本的高通量分型實驗?zāi)康?。多重PCR特性，也極大降低了對樣本量的需求。上海翼和**團隊富有開創(chuàng)精神，朝氣蓬勃，在肖君華博士的帶領(lǐng)下，秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神，為科研用戶提供性價比高、可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。安徽STR/SSRSNP分型分析
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司一直專注于第三方檢測服務(wù)；生物專業(yè)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù)；健康衰老評估；大健康檢測；遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)；生物醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)控檢測技術(shù)技術(shù)服務(wù)；小鼠遺傳品系鑒定；轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定；細(xì)胞點突變檢測；細(xì)胞端粒長度和端粒酶活性檢測。，是一家醫(yī)藥健康的企業(yè)，擁有自己**的技術(shù)體系。一批專業(yè)的技術(shù)團隊，是實現(xiàn)企業(yè)戰(zhàn)略目標(biāo)的基礎(chǔ)，是企業(yè)持續(xù)發(fā)展的動力。公司業(yè)務(wù)范圍主要包括：細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控，大健康檢測，生物技術(shù)服務(wù)等。公司奉行顧客至上、質(zhì)量為本的經(jīng)營宗旨，深受客戶好評。公司憑著雄厚的技術(shù)力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德，樹立了良好的細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控，大健康檢測，生物技術(shù)服務(wù)形象，贏得了社會各界的信任和認(rèn)可。