高通量二代測(cè)序法SNP基因分型——你有我有，你沒(méi)有我也有：上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司通過(guò)自主研發(fā)的高重PCR技術(shù)，擴(kuò)增引物經(jīng)修飾及優(yōu)化，克服了傳統(tǒng)多重PCR擴(kuò)增效率不均一問(wèn)題，95%以上擴(kuò)增子的測(cè)序深度在平均測(cè)序深度的0.2X范圍，保證測(cè)序通量的有效利用?；诔咧豍CR技術(shù)平臺(tái)的高通量二代SNP分型服務(wù)，適用于多種遺傳學(xué)研究領(lǐng)域，如疾病與基因的關(guān)聯(lián)分析，臨床分子診斷研究，QTL定位及分子育種等大規(guī)模多位點(diǎn)大樣本的SNP分析。但是只要這個(gè)突變?nèi)簺](méi)有達(dá)到總?cè)后w的1%，它就只是一個(gè)突變株/系。達(dá)到了1%就是多態(tài)性了。無(wú)錫微衛(wèi)星STRSNP分型技術(shù)服務(wù)
1.TaqMan探針?lè)ㄡ槍?duì)染色體上的不同SNP位點(diǎn)分別設(shè)計(jì)PCR引物和TaqMan探針，進(jìn)行實(shí)時(shí)熒光PCR擴(kuò)增。探針的5’-端和3’-端分別標(biāo)記一個(gè)報(bào)告熒光基團(tuán)和一個(gè)淬滅熒光基團(tuán)。當(dāng)溶液中存在PCR產(chǎn)物時(shí)，該探針與模板退火，即產(chǎn)生了適合于核酸外切酶活性的底物，從而將探針5’-端連接的熒光分子從探針上切割下來(lái)，破壞兩熒光分子間的PRET，發(fā)出熒光。通常用于少量SNP位點(diǎn)分析。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司按公司利用的就是此方案。公司公眾號(hào)：上海翼和生物安徽基因SNP分型外包服務(wù)SNP這個(gè)概念被提出時(shí)，是為了描述一個(gè)群體內(nèi)不那么罕見的堿基突變。
這種熔解分析只能區(qū)分在片段大小和GC含量上差別較比較明顯的DNA序列，比如檢查PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中是否存在引物二聚體及其他非特異性的擴(kuò)增。如果要區(qū)分SNP，分辨率還不夠。為什么呢？這里有必要先介紹一下飽和染料和非飽和染料。SYBRGreenI就屬于非飽和性染料，由于它對(duì)PCR的抑制作用，在實(shí)驗(yàn)中的使用濃度很低，遠(yuǎn)未將DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中的小溝飽和。這樣，DNA雙鏈高溫變性時(shí)，單鏈部分的熒光染料分子發(fā)生重排，熒光染料分子重新結(jié)合到雙鏈DNA的空置位點(diǎn)，造成熒光信號(hào)沒(méi)有變化，因此出現(xiàn)假陰性，特異性下降。
單核苷酸多態(tài)性（singlenucleotidepolymorphism，SNP），主要是指在基因組水平上由單個(gè)核苷酸的變異所引起的DNA序列多態(tài)性。它是人類可遺傳的變異中，常見的一種。占所有已知多態(tài)性的90%以上。SNP在人類基因組中比較常見存在，平均每500～1000個(gè)堿基對(duì)中就有1個(gè)，估計(jì)其總數(shù)可達(dá)300萬(wàn)個(gè)甚至更多。SNP所表現(xiàn)的多態(tài)性只涉及到單個(gè)堿基的變異，這種變異可由單個(gè)堿基的轉(zhuǎn)換（transition）或顛換（transversion）所引起，也可由堿基的插入或缺失所致。但通常所說(shuō)的SNP并不包括后兩種情況。SNP等位基因頻率的容易估計(jì)。
SNP位點(diǎn)信息：人類基因組需SNP位點(diǎn)的rs號(hào)；其它物種如牛、雞、魚、水稻、玉米等無(wú)rs號(hào)的，需SNP位點(diǎn)上下游各250bp的確切序列、SNP位點(diǎn)突變類型、以及位點(diǎn)上下游25bp內(nèi)是否存在其它位點(diǎn)。（二代測(cè)序SNP基因分型）送樣注意事項(xiàng)：1.此分型方法適用于15-500個(gè)位點(diǎn)，樣本數(shù)目為數(shù)百至數(shù)千的高通量檢測(cè)；2.樣本寄送前請(qǐng)與本公司工作人員取得聯(lián)系，確認(rèn)樣本寄送時(shí)間、方式、數(shù)量和收件人信息；3.請(qǐng)?jiān)偃_認(rèn)盛放樣本的容器密封，可使用封口膜，不推薦錫箔紙、保鮮膜等密封方式；SNP本身是針對(duì)“群體”而言的（within a population）。浙江SSRSNP分型外包服務(wù)
這種選擇具有準(zhǔn)確性高的特點(diǎn)，能夠有效避免形態(tài)學(xué)和環(huán)境因素的干擾，從而極大的縮短育種進(jìn)程。無(wú)錫微衛(wèi)星STRSNP分型技術(shù)服務(wù)
TaqMan熒光探針?lè)▋?yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性高（閉管進(jìn)行，減少污染），判讀也很方便，認(rèn)可度高；適合多樣本，少位點(diǎn)。但是其也有不可忽視的限制性，如探針合成耗時(shí)較長(zhǎng)，價(jià)格昂貴，為了保證探針的穩(wěn)定質(zhì)量，一般大家會(huì)選擇A公司合成。TaqMan熒光探針?lè)ㄒ话銥橹挥袔讉€(gè)位點(diǎn)時(shí)適用，并且對(duì)樣本的質(zhì)量要求較高，除了樣本無(wú)降解外，要需要濃度盡可能的一致。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司，地址：上海市松江區(qū)龍騰路1015弄中星創(chuàng)意園2號(hào)502無(wú)錫微衛(wèi)星STRSNP分型技術(shù)服務(wù)
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司致力于醫(yī)藥健康，是一家服務(wù)型公司。翼和生物致力于為客戶提供良好的細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控，大健康檢測(cè)，生物技術(shù)服務(wù)，一切以用戶需求為中心，深受廣大客戶的歡迎。公司秉持誠(chéng)信為本的經(jīng)營(yíng)理念，在醫(yī)藥健康深耕多年，以技術(shù)為先導(dǎo)，以自主產(chǎn)品為重點(diǎn)，發(fā)揮人才優(yōu)勢(shì)，打造醫(yī)藥健康良好品牌。翼和生物秉承“客戶為尊、服務(wù)為榮、創(chuàng)意為先、技術(shù)為實(shí)”的經(jīng)營(yíng)理念，全力打造公司的重點(diǎn)競(jìng)爭(zhēng)力。