浙江cck8 碧云天說明書

摸條件包括1、種板數(shù)；2、種板后細(xì)胞的貼壁生長時間；3、加藥后的孵育時間；4、cck8試劑加入量；5、cck8試劑加入后細(xì)胞孵育時間?？雌饋砗芏?，其實這就是一個實驗。而且都是種的空白板，也就是不加藥物，只加細(xì)胞和CCK8。我沒有做過MTT實驗，但其實原理及目的都是一樣的（反應(yīng)機理不一樣）。都說CCK8簡單點而且數(shù)據(jù)更穩(wěn)定，所以就用了這個試劑盒。

當(dāng)然仁者見仁智者見智，我寫的只是個人實驗心得，但供參考。歡迎大家拍磚共同進步。實驗是簡單的，道路是曲折的，時間就是用來浪費的，科研就是自娛自樂使勁折騰。

培養(yǎng)板周圍一圈孔培養(yǎng)液容易揮發(fā)，為減少誤差，建議培養(yǎng)板周圍的四邊每孔只加培養(yǎng)基。浙江cck8 碧云天說明書

在做一些***毒性試驗時，比如做鐵死亡途徑時，我們加入一個***叫C1，這個時候就需要提前換液，其實我們試過，還是會有一些影響。所以這時我們用中性紅檢測。我們實驗室，通常會用20%的硫酸銅溶液放到細(xì)胞孵箱下層，預(yù)防******。理應(yīng)說，硫酸銅分子在水溶液中是硫酸根離子和銅離子，是不會揮發(fā)的。但是每次只要是新?lián)Q的硫酸銅溶液再做CCK-8，結(jié)果總是不好，我也不知道是什么原因。之前在我們實驗室有發(fā)生過這樣的事情，這種有深有淺的才是該有的結(jié)果。我想說的是在有能力選擇范圍內(nèi)，盡量選擇好一點的試劑，免得浪費時間。浙江cck8要無血清CCK8細(xì)胞增殖實驗檢測原理.

培養(yǎng)基對CCK8測定的影響：不同的培養(yǎng)基中含有氧化還原性物質(zhì)不同，（主要是氨基酸的成分及糖含量），會與CCK8發(fā)生反應(yīng)，產(chǎn)生實驗誤差，因此所用培養(yǎng)基要一致，不要更換其他培養(yǎng)基。比如DMEM空白吸收為0.93；1640培養(yǎng)基在0.5左右。另外培養(yǎng)基中有酚紅存在的情況下，會增加空白吸收，但不影響測定，扣除空白吸收即可，可見空白孔非常重要，所以每次實驗均要設(shè)定空白對照。另外，血清不影響測定。有師妹在做一個HIF1a***劑實驗時，多加了這個***劑的濃度，

CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑可用于簡便而準(zhǔn)確的細(xì)胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學(xué)名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】。它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細(xì)胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細(xì)胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細(xì)胞增殖和毒性分析。用酶標(biāo)儀測定在450nm處的吸光度。

貼壁生長的時間我一般就直接讓它貼壁長24h了，這個時間細(xì)胞已經(jīng)貼壁完全，而且這樣設(shè)置時間對自己安排實驗時間也方便。沒人愿意大半夜爬起來做實驗吧。3、加藥后的孵育時間，我的實驗摸了3個時間，24h，48h，72h。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來選擇比較好的時間。太長了就沒有必要了，細(xì)胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了。4、CCK8試劑加入量，說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%。這里有一個問題：假設(shè)我要孔內(nèi)是200微升的體系，即細(xì)胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢，還是細(xì)胞懸液+藥液=200微升，cck8不算在體系內(nèi)呢。關(guān)于這一點文獻報道不一致。本人**終采用的是后者。5、cck8試劑加入后孵育時間，隨著時間的增加，OD值就會增大?？傊瓌t就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。靈敏度高，數(shù)據(jù)可靠，重現(xiàn)性好.北京cck8常溫

這個CCK-8的英文全稱是Cell Counting Kit-8.浙江cck8 碧云天說明書

氧化還原試劑對CCK8測定的影響：CCK8是一個氧化還原反應(yīng)實驗，在整個操作當(dāng)中，如果有氧化還原試劑都會影響**終的結(jié)果。當(dāng)有還原性物質(zhì)存在時會影響CCK8的測定，增加OD值。在有氧化性物質(zhì)存在時會***測定反應(yīng)的發(fā)生，減少OD值。在高中化學(xué)我們就知道金屬是氧化還原反應(yīng)中的重要參與者。各個公司都會告訴你：“終濃度為1mM的氯化亞鉛、氯化鐵、硫酸銅會***5%、15%、90%的顯色反應(yīng)，使靈敏度降低。如果終濃度是10mM的話，將會*****?！蔽?*開始看到這句話時很懵，因為不知道在操作中怎樣會遇到這種情況。下面就分享我能想到或者在操作中真實遇到的。浙江cck8 碧云天說明書