讀數(shù)前可在搖床上溫柔混勻，酶標儀在 450nm 波長處檢測每孔的吸光度。
***率（％）= [（對照孔吸光度-實驗孔吸光度）/（對照孔吸光度-空白孔吸光度）]×100=IC50
注意事項
CCK8法檢測細胞生長情況基于的原理是脫氫酶催化的反應，如果實驗處理條件中存在還原劑的影響，應事先去除。如果實驗條件中存在還原物質(zhì)，需單獨測定還原物質(zhì)的空白吸光度。如果還原物質(zhì)的吸光度很小，可以忽略不計；但如果吸光度很大，則需要去除培養(yǎng)基，再用培養(yǎng)基洗滌細胞3次，然后再加入新的 100ul培養(yǎng)基和10ul CCK-8 溶液進行檢測。 水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細胞.北京cck8細胞增殖實驗過程
當使用標準96孔板時，貼壁細胞的**小接種量至少為1000 個/孔(100μl培養(yǎng)基)。檢測白細胞時的靈敏度相對較低，因此推薦接種量不低于2500 個/孔(100μl培養(yǎng)基)。酚紅和血清對CCK8法的檢測不會造成干擾，可以通過扣除空白孔中本底的吸光度而消去。
注意事項CCK8可以檢測大腸桿菌，但不能檢測酵母細胞。在細胞增殖實驗每次測定的過程中需要避免細菌污染，以免影響結(jié)果。CCK-8在0-5℃下能夠保存至少6個月，在-20℃下避光可以保存1年。當在培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)時，培養(yǎng)板**外一圈的孔**容易干燥揮發(fā)，由于體積不準確而增加誤差。一般情況下，**外一圈的孔只加培養(yǎng)基，不作為測定孔用。在培養(yǎng)基中加入CCK8，培養(yǎng)一定的時間，測定450 nm的吸光度即為空白對照。 北京cck8英文說明書代謝率低了以后，細胞呼吸減弱，NAD+產(chǎn)生減少，測出的Formazan也會減少。
細胞增殖實驗就是對細胞生長的測定，常用的方法有MTT、CCK8以及流式檢測。閱讀大量文獻發(fā)現(xiàn)，如果想證明一個***或者說是一個作用條件對細胞生長的影響，基本上大家都采用MTT或CCK8結(jié)合流式的雙標準來證明作用效果。所以，***先給大家介紹一下MTT和CCK8比色法的實驗操作和注意事項。
MTT實驗操作
1、在96孔板中培養(yǎng)細胞，設置對照組（細胞+無血清培養(yǎng)基）、實驗組和空白組（無血清培養(yǎng)基），可以采用如下圖的排版方式：
2、在對照組和實驗組中，每孔加入細胞懸液100ul,培養(yǎng)24小時；
貼壁生長的時間我一般就直接讓它貼壁長24h了，這個時間細胞已經(jīng)貼壁完全，而且這樣設置時間對自己安排實驗時間也方便。沒人愿意大半夜爬起來做實驗吧。3、加藥后的孵育時間，我的實驗摸了3個時間，24h，48h，72h。然后根據(jù)數(shù)據(jù)的穩(wěn)定性（RSD）、OD值的范圍（1.0左右）這些來選擇比較好的時間。太長了就沒有必要了，細胞呆在孔里幾天不換液結(jié)果可想而知了。4、CCK8試劑加入量，說明書中明確寫出建議加入量為培養(yǎng)基體積的10%。這里有一個問題：假設我要孔內(nèi)是200微升的體系，即細胞懸液+藥液+CCK8=200微升呢，還是細胞懸液+藥液=200微升，cck8不算在體系內(nèi)呢。關于這一點文獻報道不一致。本人**終采用的是后者。5、cck8試劑加入后孵育時間，隨著時間的增加，OD值就會增大。總之原則就是把OD值控制在1.0左右。這里我考察了0.5h、1.0h、2.0h。在CCK-8試劑盒中，**主要的化學藥品是WST-8.
CCK-8的原理
所以粗略的可以認為生成的甲瓚物的顏色的深淺與活細胞的數(shù)量成正比。為什么是粗略的呢，因為這里沒有考慮到細胞代謝水平的高低，有些細胞在***處理后，可能活細胞數(shù)不變，但是代謝率低了以后，細胞呼吸減弱，NAD+產(chǎn)生減少，測出的Formazan也會減少，所以此時怎么算呢（此時我就比較懷戀中性紅了）？當然也有解決的辦法，下期給大家介紹。因此可利用這個原理進行細胞增殖和毒性分析，在吸光度為450時檢測讀數(shù)。顏色也會越深 請問合適的種板數(shù)是怎么定義的呢?北京cck8吸光度范圍
CCK-8試劑中含有WST–8.北京cck8細胞增殖實驗過程
實驗材料及試劑
96 孔板、CO2培養(yǎng)箱、酒精燈、移液***、酶標儀等；細胞、CCK8等。
實驗內(nèi)容取生長狀態(tài)良好的對數(shù)生長期細胞，每孔按 4×103個接種至 96 孔板中，每組設置8個復孔，置于細胞培養(yǎng)箱中培養(yǎng)，待細胞貼壁后轉(zhuǎn)染相應質(zhì)粒后。繼續(xù)培養(yǎng) 48h 后，棄含藥培養(yǎng)基，每孔加入新鮮配制的含 10ｕL的毒性檢測液CCK8，置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng) 4h 后，用酶標儀測波長為450 nm的OD值。實驗重復 3 次， 取實驗結(jié)果的平均值作為**終實驗結(jié)果。按公式計算生長***率＝[(對照組 OD－實驗組 OD)/對照組 OD] ×**，以分組為橫坐標，生長***率為縱坐標，繪制細胞生長***率柱狀圖。 北京cck8細胞增殖實驗過程