CCK-8盒子的選購還記得***次做CCK-8的實驗時研究生二年級的時候，當時用的***個盒子是Sigma的，當時的Sigma-Aldrich就是Sigma-Aldrich，還不是現(xiàn)在的Millipore-Sigma。那個盒子給了我莫大的鼓勵，因為在那之前做分子克隆一直都不是很順利。這個盒子是我的碩士老板從美國帶回來的，品質(zhì)有保證，***的結(jié)果也是很好的。后面在做CCK-8的實驗時，我們在有選擇的情況下都會買sigma，下圖2是sigma官網(wǎng)的截圖。其實也不貴，只是到貨時間太慢。MTT與CCK8區(qū)別是什么?上海cck8曲線
CCK8檢測細胞增殖/毒性的注意事項：1.加入CCK8溶液時不要在孔中生成氣泡，它們會影響OD值的讀數(shù)；2.要設(shè)計空白對照組；3.對于大多數(shù)情況，加入CCK8溶液后，孵育2h左右就可以了；4.使用酶標儀之前要提前開啟10min預(yù)熱；5.若連續(xù)多天檢測，必須保持所有條件一致。相關(guān)鏈接：CCK8的特性、保存方法以及與BrdU的區(qū)別CCK8空白對照，測定參比波長的設(shè)定以及OD值的合適范圍CCK8標準曲線、檢測時間、終止反應(yīng)以及減少加樣誤差的方法外界因素(金屬/***/細菌/培養(yǎng)基/培養(yǎng)板)對CCK8測定的影響細胞因素(預(yù)培養(yǎng)/生長方式/狀態(tài)/細胞數(shù)/死細胞)對CCK8測定的影響細胞增殖到底用MTT還是CCK8呢?江蘇cck8 缺點水溶性，不需要換液，尤其適合于懸浮細胞.
經(jīng)驗總結(jié)及分享：
CCK8的說明書大家一定要認真閱讀，里面很多細節(jié)的問題都有提到。而且說明書里提供的一些關(guān)于各種細胞的種板數(shù)都很有參考價值，因為那是反復(fù)驗證過的比較好數(shù)值。但無論如何，做這個試驗一定要摸條件。你就算再懶，這個懶不得，否則你都只是在做無用功。以下言論全部以細胞毒性試驗為前提， 如果你做的是促進細胞生長的***的藥效實驗?zāi)蔷土懋攧e論了。
摸條件包括1、種板數(shù)；2、種板后細胞的貼壁生長時間；3、加藥后的孵育時間；4、cck8試劑加入量；5、cck8試劑加入后細胞孵育時間?？雌饋砗芏?，其實這就是一個實驗。而且都是種的空白板，也就是不加***，只加細胞和CCK8。
、***濃度的確定需要做一個時間梯度，鋪板和上述相同，只需把各個實驗組改成各個作用時間就可以了。至于說***濃度的確定，網(wǎng)上有很多確認方法，個人建議以IC50值作為***濃度即可。計算方法，某園子里都有，就不在這里介紹了。
MTT作用之后，一定要小心吸走培養(yǎng)液，以免將孔內(nèi)的紫色結(jié)晶吸走。有條件的實驗室，這一步可以采用離心機將沉淀充分離心到孔底，防止被吸出。如果沒有這種類型的離心機，可以在測量吸光度的時候，將酶聯(lián)免疫的機器震蕩時間調(diào)制5分鐘，**起碼可以保證沉淀充分溶解。 CCK8細胞增值檢測實驗簡介.
CCK8檢測細胞增殖和毒性實驗佰歐晶生物專注于生命科學、醫(yī)學及藥學科研咨詢和技術(shù)服務(wù)，致力于疾病關(guān)鍵基因功能研究，中藥功能及機理研究，納米靶向***研究，**研究整體方案服務(wù)。CellCountingKit-8（簡稱CCK-8）試劑用于簡便而準確的細胞增殖和毒性分析。其基本原理為：該試劑中含有WST-8【化學名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑單鈉鹽】，它在電子載體1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-MethoxyPMS）的作用下被細胞中的脫氫酶還原為具有高度水溶性的黃色甲瓚產(chǎn)物（Formazandye）。生成的甲瓚物的數(shù)量與活細胞的數(shù)量成正比。因此可利用這一特性直接進行細胞增殖和毒性分析。各有千秋!CCK8之外的選擇除了MTT,還可以是LDH.天津cck8 同仁
用酶聯(lián)免疫檢測儀在450nm波長處測定其光吸收值.上海cck8曲線
CCK8檢測細胞增殖/毒性的方法：
1.將處于對數(shù)生長期的各實驗組細胞胰酶消化后，完全培養(yǎng)基重懸成細胞懸液，并計數(shù)。
2.根據(jù)細胞生長快慢決定鋪板細胞密度（多數(shù)為1000-2000 cell/well），每組3-5重復(fù)，每孔100-200μl培養(yǎng)基。根據(jù)實驗設(shè)計決定鋪板數(shù)量（如需要檢測5天，則鋪5張96孔板），我們以1000 cell/well，5復(fù)孔，200μl培養(yǎng)基，檢測5天為例，各實驗組需要細胞數(shù)量為1000×5×5個細胞，從計數(shù)好的細胞懸液中取出所需的細胞量和完全培養(yǎng)基混勻，**終體積為200×5×5μl。 上海cck8曲線