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免疫組化如何比較大限度地降低組織非特異性染色?
(1)縮短一抗/二抗孵育時(shí)間、稀釋抗體來控制。這是重要的一條。
(2)一抗用多克隆抗體易出現(xiàn)非特異性著色,建議試用單克隆抗體看看。
(3)內(nèi)源性過氧化物酶和生物素在肝臟、腎臟等組織含量很高(含血細(xì)胞多的組織),需要通過延長(zhǎng)滅活時(shí)間和增加滅活劑濃度來降低背景染色;
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(4)非特異性組分與抗體結(jié)合,這需要通過延長(zhǎng)二抗來源的動(dòng)物免疫血清封閉時(shí)間和適當(dāng)增加濃度來加強(qiáng)封閉效果;
(5)縮短DAB孵育時(shí)間或降低DAB濃度/過氧化氫濃度等;
(6)適當(dāng)增加PBS沖洗次數(shù)和浸洗時(shí)間,在一抗、二抗或SP孵育之后的浸洗尤為重要;
(7)防止標(biāo)本染色過程中出現(xiàn)干片,這容易增強(qiáng)非特異性著色。 做好免疫組化,你需要了解這些!云南細(xì)胞免疫組化多少錢
免疫組化的發(fā)展路程?在臨床病理診斷中,免疫組織化學(xué)(IHC)是一種很重要的技術(shù)和手段,從20世紀(jì)70年代開始,免疫組化技術(shù)就應(yīng)用于病理診斷,對(duì)于診斷cancer、cancer分類、判斷預(yù)后產(chǎn)生了巨大的影響,同時(shí)也擴(kuò)展了人們對(duì)于各種疾病及cancer形成過程的認(rèn)識(shí),提高了病理診斷與研究水平。但是,隨著免疫組化的廣泛應(yīng)用,發(fā)現(xiàn)免疫組化技術(shù)存在一些局限性。深入研究免疫組化原理和技術(shù),必須熟悉各種抗體真陽(yáng)性反應(yīng)部位,實(shí)現(xiàn)實(shí)驗(yàn)室間免疫組化標(biāo)準(zhǔn)化,使免疫組化在病理診斷中發(fā)揮比較大的輔助作用。如果您有免疫組化相關(guān)的實(shí)驗(yàn),可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。遼寧小鼠免疫組化免疫組化可以看什么?
細(xì)胞屬性的判定,免疫組化也可以進(jìn)行這方面的臨床應(yīng)用。通過特定抗體標(biāo)記出細(xì)胞內(nèi)相應(yīng)的抗原成分,來判定細(xì)胞的屬性,確定cancer的來源。如細(xì)胞角蛋白(CK)是上皮性標(biāo)記,CK陽(yáng)性提示cancer為上皮源性cancer;降鈣素抗體是甲狀腺髓樣cancer特有的標(biāo)記;甲狀腺球蛋白(Tg)陽(yáng)性提示是甲狀腺濾泡性cancer;前列腺特異性抗原(PSA)只見于前列腺上皮;膠質(zhì)纖維酸性蛋白(GFAP)陽(yáng)性則提示膠質(zhì)cancer;CD20和CD79a陽(yáng)性則提示B細(xì)胞淋巴瘤;平滑肌肌動(dòng)蛋白(Actin)陽(yáng)性提示cancer為平滑肌源性;胃腸道間質(zhì)瘤中原cancer基因蛋白產(chǎn)物CD117陽(yáng)性;血管源性cancer中內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)記物CD34陽(yáng)性等等。如果您需要做實(shí)驗(yàn)外包,可以與我們英瀚斯生物進(jìn)行聯(lián)系。
免疫組化的顯色系統(tǒng)
免疫組化的顯色系統(tǒng)是將抗原-抗體反應(yīng)轉(zhuǎn)化為可見信號(hào)的關(guān)鍵步驟。常用的免疫組化顯色系統(tǒng)有DAB(3,3'-二氨基聯(lián)苯胺)和AEC(3-氨基-9-乙基咔唑)。DAB顯色產(chǎn)生棕色沉淀,適用于光學(xué)顯微鏡觀察。AEC顯色產(chǎn)生紅色沉淀,適用于光學(xué)顯微鏡觀察,但不適合長(zhǎng)期保存。此外,還有熒光顯色系統(tǒng),如FITC(異硫氰酸熒光素)和TRITC(四甲基羅丹明異硫氰酸酯),適用于熒光顯微鏡觀察。選擇合適的顯色系統(tǒng)需要考慮實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮蜋z測(cè)設(shè)備。 免疫組化樣本如何處理?
免疫組化的抗體選擇
抗體是免疫組化實(shí)驗(yàn)成功的關(guān)鍵因素之一。選擇合適的一抗需要考慮其特異性、靈敏度和適用性。特異性是指抗體只與目標(biāo)蛋白結(jié)合,而不與其他蛋白發(fā)生交叉反應(yīng)。靈敏度是指抗體能夠檢測(cè)低豐度的目標(biāo)蛋白。適用性是指抗體適用于免疫組化實(shí)驗(yàn),而不是其他實(shí)驗(yàn)(如Western blot)。此外,免疫組化實(shí)驗(yàn)中還需要考慮抗體的宿主物種、克隆性和濃度。免疫組化二抗的選擇則需要考慮其與一抗的匹配性,以及是否帶有顯色或熒光標(biāo)記。 英瀚斯生物,組織包埋、切片、染色、免疫組化拍照、報(bào)告分析,一站式搞定!河南做得好的免疫組化多少錢
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免疫組化在在病理診斷中,隨著各種抗體新的用途不斷被發(fā)現(xiàn)及越來越多的新型抗體的出現(xiàn),免疫組化在cancer診斷及鑒別診斷、分類、預(yù)后判斷等方面產(chǎn)生了重大的影響。由于免疫組化技術(shù)也存在一些局限性,因此,深入研究免疫組化原理和技術(shù),并努力實(shí)現(xiàn)規(guī)范化的操作,才能充分發(fā)揮免疫組化在病理的診斷及鑒別診斷、判斷預(yù)后、指導(dǎo)臨床醫(yī)療中的作用。
觀察組織切片中抗原的數(shù)量及其在組織中的分布情況,對(duì)抗原進(jìn)行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學(xué),由于抗原與抗體特異性結(jié)合,因此通過免疫組化使標(biāo)記抗體的顯色劑(酶、熒光素、同位素、金屬離子等等)顯色來確定組織細(xì)胞內(nèi)抗原(多肽和蛋白質(zhì))。IHC所用標(biāo)本主要為兩大類:組織標(biāo)本和細(xì)胞標(biāo)本,其中制作組織標(biāo)本更常用、更基本的方法是石蠟切片。石蠟切片對(duì)于組織形態(tài)保存好,有利于各種染色對(duì)照觀察,而且能長(zhǎng)期保存;石蠟切片中使用的甲醛固定劑對(duì)組織內(nèi)抗原暴露有一定的影響,但可進(jìn)行抗原修復(fù),是免疫組化中優(yōu)先選擇的組織標(biāo)本制作方法。 云南細(xì)胞免疫組化多少錢