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多重 PCR 與多基因檢測(cè)場景:同時(shí)擴(kuò)增多個(gè)靶基因(如病原體分型、遺傳標(biāo)記檢測(cè)),需平衡不同引物對(duì)的退火溫度。例:在 HPV 分型檢測(cè)中,使用梯度 PCR 優(yōu)化 14 種型別引物的共同退火溫度,避免因單一溫度導(dǎo)致部分型別漏檢。 科研方法開發(fā)與驗(yàn)證場景:建立新的 PCR 檢測(cè)方法(如巢式 PCR、實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 的預(yù)實(shí)驗(yàn))時(shí),需系統(tǒng)優(yōu)化溫度、時(shí)間、酶濃度等參數(shù)。例:開發(fā)某**突變基因的檢測(cè)方法時(shí),通過梯度功能同時(shí)測(cè)試 3 個(gè)不同退火溫度和 2 種酶濃度組合,共 6 種條件,快速確定比較好反應(yīng)體系。RePure-(D)B利用梯度功能進(jìn)行溫度梯度設(shè)計(jì),能夠快速找到適合的反應(yīng)溫度,提高PCR反應(yīng)效率。江蘇梯度基因擴(kuò)增儀PCR儀型號(hào)
實(shí)驗(yàn)效率與合規(guī)性:1. 程序編輯與數(shù)據(jù)管理操作界面是否支持觸摸屏或電腦端遠(yuǎn)程控制,能否存儲(chǔ)自定義程序(如保存不同實(shí)驗(yàn)的溫度循環(huán)參數(shù));數(shù)據(jù)導(dǎo)出功能:是否支持 PDF、Excel 格式報(bào)告生成,便于實(shí)驗(yàn)記錄和合規(guī)審計(jì)(如臨床檢測(cè)需符合 GMP 標(biāo)準(zhǔn))。2. 安全與合規(guī)性臨床用 PCR 儀需具備醫(yī)療器械注冊(cè)證(如 NMPA 認(rèn)證),科研用儀器需符合 CE、FDA 等國際標(biāo)準(zhǔn);部分機(jī)型內(nèi)置熱蓋(105℃),防止冷凝水影響反應(yīng)體系,避免產(chǎn)物污染。選型決策流程明確**需求:先確定 “是否需要梯度功能”“樣本通量多大”“是否需定量”;技術(shù)參數(shù)對(duì)標(biāo):重點(diǎn)關(guān)注溫控精度、均勻性、升降溫速率;成本與場景匹配:科研選梯度 + 低通量,臨床選高通量 + 合規(guī)機(jī)型,野外選便攜 + 集成化;品牌與服務(wù)驗(yàn)證:參考用戶評(píng)價(jià),對(duì)比售后響應(yīng)速度與培訓(xùn)支持。南京基因擴(kuò)增儀PCR儀代理商RePure-A配備的人性化操作界面和直觀的軟件系統(tǒng)使得用戶能夠輕松設(shè)置實(shí)驗(yàn)程序。
PCR 儀的維護(hù)與注意事項(xiàng):日常維護(hù):定期清潔反應(yīng)模塊,去除殘留試劑(如礦物油、PCR 產(chǎn)物),避免污染。校準(zhǔn)溫度:使用標(biāo)準(zhǔn)溫度計(jì)驗(yàn)證控溫精度,每年至少 1 次。操作注意:配置反應(yīng)體系時(shí)需在冰上進(jìn)行,防止引物或酶提前活化。避免頻繁開關(guān)儀器,減少溫控模塊損耗。實(shí)驗(yàn)后及時(shí)進(jìn)行模塊消毒(如用 75% 乙醇擦拭),防止交叉污染。PCR 儀的發(fā)展趨勢(shì):便攜化與集成化:微流控芯片 PCR 儀將反應(yīng)體系微型化,可實(shí)現(xiàn) “樣本進(jìn) - 結(jié)果出” 的即時(shí)檢測(cè)(如 POCT 設(shè)備)。高通量與自動(dòng)化:結(jié)合機(jī)器人工作站,實(shí)現(xiàn)從樣本提取到 PCR 擴(kuò)增的全流程自動(dòng)化,適用于大規(guī)模篩查。多功能整合:如與測(cè)序儀聯(lián)用,實(shí)現(xiàn) “擴(kuò)增 - 測(cè)序” 一體化,縮短基因分析周期。
PCR儀是利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù),在體外對(duì)特定DNA片段進(jìn)行大量擴(kuò)增的儀器。其原理是通過高溫變性、低溫退火及適溫延伸等幾步反應(yīng)組成一個(gè)周期,循環(huán)進(jìn)行,使目的DNA得以迅速擴(kuò)增。具體過程如下:高溫變性:將待擴(kuò)增的DNA雙鏈在高溫(90-95℃)下解鏈,形成單鏈DNA模板。低溫退火:降低溫度(一般為50-65℃),使引物與單鏈DNA模板特異性結(jié)合。適溫延伸:在DNA聚合酶的作用下,以引物為起始點(diǎn),在適宜溫度(一般為72℃左右)下,以dNTP為原料,沿著模板鏈合成新的DNA鏈。Q9604還具備先進(jìn)的溫控系統(tǒng),確保在每一個(gè)循環(huán)過程中保持均勻的溫度分布,確保PCR反應(yīng)的條件。
儀器維護(hù)每次使用后,清潔樣品槽內(nèi)的液滴或雜質(zhì)(用無塵紙蘸 75% 酒精擦拭),防止腐蝕或影響溫度均勻性。長期不用時(shí),定期開機(jī)運(yùn)行空程序,避免部件老化;儀器出現(xiàn)異常(如溫度失控、熒光信號(hào)異常)時(shí),及時(shí)聯(lián)系維修,勿自行拆解。實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)合理性對(duì)照設(shè)置:必須包含陰性對(duì)照(已知陰性樣本)、空白對(duì)照(反應(yīng)體系,無模板),確保結(jié)果可靠性。重復(fù)設(shè)置:每個(gè)樣本至少做 3 次生物學(xué)重復(fù)和技術(shù)重復(fù),減少實(shí)驗(yàn)誤差。循環(huán)次數(shù):避免循環(huán)次數(shù)過多(超過 45 次),否則可能導(dǎo)致非特異性擴(kuò)增,影響定量準(zhǔn)確性。RePure-(D)B具有快速升溫和降溫的功能,縮短PCR反應(yīng)的時(shí)間。南京48孔基因擴(kuò)增儀PCR儀哪個(gè)好
柏恒RePure系列PCR儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增,能夠獲得高質(zhì)量的擴(kuò)增產(chǎn)物,確保實(shí)驗(yàn)結(jié)果的可靠性和準(zhǔn)確性。江蘇梯度基因擴(kuò)增儀PCR儀型號(hào)
啟動(dòng)反應(yīng)與結(jié)果分析確認(rèn)參數(shù)無誤后,啟動(dòng) qPCR 程序,儀器自動(dòng)運(yùn)行并實(shí)時(shí)顯示熒光曲線。反應(yīng)結(jié)束后,通過軟件查看結(jié)果:定量結(jié)果:根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算未知樣本的初始模板濃度(定量),或通過 ΔΔCt 法分析相對(duì)表達(dá)量(相對(duì)定量)。溶解曲線:若出現(xiàn)單一尖銳峰,說明擴(kuò)增特異性良好;若有雜峰,需排查引物或反應(yīng)條件問題。 污染防控(重點(diǎn))核酸污染:嚴(yán)格分區(qū)操作:將試劑配制區(qū)、樣本處理區(qū)、PCR 擴(kuò)增區(qū)分開,避免交叉污染。使用濾芯吸頭,每次加樣后更換吸頭,避免移液器接觸樣本或試劑瓶口。定期用 10% 次氯酸鈉或 DNA 酶清潔實(shí)驗(yàn)臺(tái)面、移液器和儀器樣品槽,紫外燈照射消毒操作區(qū)(30 分鐘以上)。試劑污染:試劑分裝保存(避免反復(fù)凍融),陰性對(duì)照(無模板)和空白對(duì)照(無菌水)必須設(shè)置,以監(jiān)測(cè)是否污染。江蘇梯度基因擴(kuò)增儀PCR儀型號(hào)