宿主細胞DNA(HCD)殘留以染色質(zhì)形式存在,其中有帶負電荷的DNA、帶正電荷及疏水區(qū)段的組蛋白,就像膠帶一樣能夠吸附很多物質(zhì),包括各種雜蛋白、色譜填料、目的病毒顆粒。非特異吸附雜蛋白,會影響蛋白雜質(zhì)(如HCP)等的去除;吸附到色譜填料上,會降低色譜分離純化效率;吸附到目的病毒顆粒時,會影響目的產(chǎn)物的穩(wěn)定性,從而降低目的產(chǎn)物的得率。因此,從生產(chǎn)工藝層面來講,一定要去除HCD,從而能夠簡化工藝、提高目的產(chǎn)物的產(chǎn)量。ArcticZymes所有產(chǎn)品的開發(fā)、生產(chǎn)及銷售等都符合ISO13485:2016質(zhì)量管理體系標準。浙江SAN HQ高鹽核酸酶70921-202
由于Triton X-100的降解產(chǎn)物對環(huán)境影響很大,自2023年12月22日起,歐盟將禁止使用Triton X-100生產(chǎn)試驗性醫(yī)療產(chǎn)品等。請注意,含有≤0.1% (w/w) Triton X-100表面活性劑的物質(zhì)不被視為危險物質(zhì),仍然可以進口到歐洲。由于該產(chǎn)品通常不用作生物制品或先進療法的賦形劑,因此在歐洲以外生產(chǎn)的大多數(shù)藥物在其開發(fā)商考慮在歐盟生產(chǎn)之前不需要生產(chǎn)變更。此外,已經(jīng)獲得許可的藥物及其賦形劑不受該規(guī)則約束。所有其它希望在歐盟生產(chǎn)生物藥物和研究產(chǎn)品的生產(chǎn)商都必須尋求Triton X-100的替代品并驗證它們對各自用途的適用性。為了支持客戶項目更好在歐盟區(qū)域申報上市,ArcticZymes Technologies于2019年推出了Triton X-100 Free的SAN HQ TF高鹽核酸酶。與SAN HQ高鹽核酸酶相比,SAN HQ TF用Tween-20替代了Triton X-100,酶活性能完全一致。目前,SAN HQ和SAN HQ TF都有項目在臨床階段,相關(guān)性能都得到了行業(yè)客戶的認可。江蘇70930-001高鹽核酸酶價格表上海高鹽核酸酶產(chǎn)品質(zhì)量哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。
殘留的宿主DNA是生產(chǎn)中產(chǎn)生的雜質(zhì),其存在潛在的致瘤性、傳染性和免疫原性等風(fēng)險。相關(guān)研究表明,基因的大小普遍在200bp以上,因此大于200bp有可能會有一定的致病性,而且殘留DNA片段越大,生物制品的風(fēng)險等級越高。因此,各國監(jiān)管機構(gòu)對其提出了嚴格要求。美國食品藥品監(jiān)督管理局(FDA)在《關(guān)于人類基因zhiliao新產(chǎn)品生產(chǎn)指導(dǎo)文件》中明確指出HCD的片段要小于200bp。2022年5月,國家藥品監(jiān)督管理局藥品評審中心(CDE)發(fā)布的《體內(nèi)基因藥物產(chǎn)品藥學(xué)研究與評價技術(shù)指導(dǎo)原則(試行)》中也明確指出需對DNA殘留量和殘留片段大小進行控制,建議盡量將DNA殘留片段的大小控制在200bp以下。
在生物工藝中,核酸酶的主要作用是高效消化宿主細胞DNA(HCD),并將其分解成足夠小的片段,以便在下游純化過程中去除。雖然大多數(shù)核酸酶可以在生理鹽條件下高效地將裸DNA降解成微小片段,比如Benzonase和SANs都可以把dsDNA分解成小于8nt的寡核苷酸鏈,但實際生產(chǎn)中的核酸污染情況更加復(fù)雜。HCD通常以染色質(zhì)形式存在,與細胞裂解碎片、病毒顆粒等結(jié)合在一起,影響核酸酶的識別及剪切。因此,HCD去除的關(guān)鍵在于——核酸酶如何在復(fù)雜的生產(chǎn)體系中識別并剪切HCD。無錫高鹽核酸酶哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。
一個美國客戶做了對照實驗,比較Benzonase和SAN HQ高鹽核酸酶純化病毒載體的效率。實驗設(shè)計如下,HEK293細胞轉(zhuǎn)染及培養(yǎng)后,分別取了150Million的293細胞進行裂解,分別在各自適宜的條件下(即SAN HQ組反應(yīng)條件為500mM鹽濃度,而Benzonase組反應(yīng)條件是150mM鹽濃度)加入等量的酶(0、2kU、3kU、4kU、5kU、6kU),37°孵育1hr,加入Picogreen染料后檢測DNA的殘留量。結(jié)果發(fā)現(xiàn),SAN HQ高基因療法制造商面臨的挑戰(zhàn)與抗體療法剛出現(xiàn)時單克隆抗體制造商面臨的挑戰(zhàn)相似。例如,在生產(chǎn)、儲存和處理過程中,單克隆抗體也會受到低滴度、產(chǎn)品和工藝相關(guān)雜質(zhì)和降解的挑戰(zhàn)。盡管與重組單克隆抗體相比,單劑量AAV產(chǎn)品與工藝相關(guān)雜質(zhì)相關(guān)的風(fēng)險可能更低(取決于雜質(zhì)的類型、劑量和給藥途徑),但這也不能忽視。由于這些相似性,制藥商、化學(xué)品和輔料供應(yīng)商有機會進行合作,并開發(fā)創(chuàng)新的解決方案,以實現(xiàn)穩(wěn)健和成本效益高的AAV產(chǎn)品生產(chǎn)。鹽核酸酶組用更少的酶得到了更好的去除效果(即2kU的SAN HQ消化結(jié)果明顯優(yōu)于6kU的Benzonase),且SAN HQ的高純化效率是非血清型依賴的。東臺高鹽核酸酶款式哪家好呢,歡迎咨詢上海倍篤生物 。山東高鹽核酸酶國內(nèi)代理
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在不同的鹽濃度條件下,AAV病毒載體的存在形式不同。低鹽濃度條件下,AAV病毒顆粒表面會通過電荷作用等非特異結(jié)合到HCD上,從而產(chǎn)生病毒顆粒團聚現(xiàn)象。隨著溶液鹽濃度上升,AAV病毒顆粒與HCD的離子相互作用會被破壞,AAV病毒顆粒會逐漸解離。當鹽濃度升到更高范圍(>400mM左右),AAV病毒顆粒與HCD的結(jié)合更弱,AAV顆粒更穩(wěn)定。因此,在高鹽濃度溶液中,AAV顆粒更加穩(wěn)定,且有數(shù)據(jù)表明高鹽濃度不會削弱AAV的侵染能力。所以,我們推薦提高AAV病毒生產(chǎn)中的鹽濃度。浙江SAN HQ高鹽核酸酶70921-202