空間轉(zhuǎn)錄組研究的的必耍性:研究單細胞是想要探究細胞間的異質(zhì)性,但是常規(guī)的單細胞是將細胞解離成單細胞懸液,然后利用單細胞分離技術(shù)(微孔,微板,液滴)等方法實現(xiàn)單細胞建庫,這里比較大的問題是是細胞失去了原本在組織的空間信息。然而這個空間信息在實際研究中是非常重要。特別是在研究細胞命運機制及細胞譜系發(fā)生空間位置的信息顯得尤為重要,因此發(fā)展空問轉(zhuǎn)錄組技術(shù)實現(xiàn)細胞的位置信息的保留,對研究此類細胞狀態(tài)尤為必要??臻g轉(zhuǎn)錄組測序技術(shù)遍地開花,烈冰服務讓您的生物醫(yī)學研究如虎添翼。烈冰科技空間轉(zhuǎn)錄組服務機構(gòu)
轉(zhuǎn)錄組分析指對細胞內(nèi)所有轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物的分析。轉(zhuǎn)錄組測序一般是對用多聚胸腺嘧啶(oligo-dT)進行親和純化的RNA聚合酶II轉(zhuǎn)錄生成的成熟mRNA和ncRNA進行高通量測序。相對于傳統(tǒng)的芯片雜交平臺,轉(zhuǎn)錄組測序無需預先針對已知序列設計探針,即可對任意物種的整體轉(zhuǎn)錄活動進行檢測,提供更精確的數(shù)字化信號,是目前深入研究轉(zhuǎn)錄組復雜性的強大工具。FFPE空間轉(zhuǎn)錄組技術(shù)原理 為同時獲得空間表達和組織學背景信息,該方案首先將FFPE組織切片置于Visium基因芯片上進行組織學染色和成像,然后利用切片下方Visium基因芯片上的探針進行表達定量。合肥烈冰空間轉(zhuǎn)錄組多組學測序烈冰斥巨資引進Novaseq6000,開啟更大通量測序新紀元。
當組織冷凍切片附在帶有spatialbarcode的空間轉(zhuǎn)錄組芯片上時,通過透化處理,細胞內(nèi)的mRNA釋放出來,從而被芯片上帶有oligo-dT的探針捕獲。被捕獲的mRNA開始逆轉(zhuǎn)錄,得到的cDNA中包含了spatialbarcode序列。通過上機測序,可以將每個mRNA轉(zhuǎn)錄的序列映射回組織切片中的映射回組織切片中的原始位置。Visium空間轉(zhuǎn)錄組的重點在于芯片部分:正式文庫構(gòu)建的芯片上有4個捕獲區(qū)域(6.5mmX6.5mm,可以檢測4個樣本)每個捕獲區(qū)域含有約5000個被條形碼標記的點(barcodedspots)每個spot直徑55μm,每個spot能捕獲1-10個細胞spot與spot中心點之間的距離為100μm每個spot含有上百萬個可以與mRNA結(jié)合的捕獲探針,每個探針上都帶有獨特的spatialbarcodes,用以標記捕獲的mRNA的空間位置。
10xGenomics空間轉(zhuǎn)錄組用于文庫構(gòu)建的每張載玻片上有四個捕獲區(qū)域,每個捕獲區(qū)域的大小為6.5x6.5mm,包含5000個被條形碼標記的點(barcodedspots),每個點的直徑為55μm,點和點之間中心的距離為100μm,并且每個點都有一個barcode序列。組織切片的細胞中會釋放出mRNA,遷移到每個spot的mRNA會被標記上相應的barcode序列,然后進行文庫構(gòu)建并進行測序。根據(jù)數(shù)據(jù)的條形碼信息對數(shù)據(jù)進行分析,以確定哪些數(shù)據(jù)來自哪個位置,從而實現(xiàn)空間基因表達的可視化。高通量測序技術(shù)是對傳統(tǒng)測序一次翻天覆地的改變,一次對幾十萬到幾百萬條核酸序列進行測定。
烈冰科技作為國內(nèi)同時擁有10XGenomics和BDRhapsody雙分選平臺的測序服務商及云計算服務供應商,經(jīng)過多年實戰(zhàn),擁有豐富的單細胞懸液制備和分選經(jīng)驗,實測BDRhapsody對能夠高效捕獲粒細胞。針對不同的分選平臺、建庫方法,實戰(zhàn)總結(jié)搭建出不同的數(shù)據(jù)預處理工作流程;烈冰科技NovelBrain®生物大數(shù)據(jù)平臺能有效支撐生命科學研究、醫(yī)療健康等領(lǐng)域?qū)Υ髷?shù)據(jù)分析的需求。完備的高通量測序?qū)嶒炂脚_,包括NovaSeq6000、10XChromiumX、BDFACSMelody、PANNORAMIC數(shù)字切片掃描儀等,配合一支來自海內(nèi)外名校、多學科交叉型的高素質(zhì)綜合團隊,為您的科學研究保駕護航??臻g轉(zhuǎn)錄組測序可識別重要的轉(zhuǎn)錄因子,進行譜系和發(fā)育追蹤。武漢烈冰生物空間轉(zhuǎn)錄組商業(yè)化服務
空間轉(zhuǎn)錄組測序以分子方式定義病理,完成了病理數(shù)字化結(jié)合病理影像化的革新。烈冰科技空間轉(zhuǎn)錄組服務機構(gòu)
空間轉(zhuǎn)錄組測序與單細胞測序的結(jié)果不同,這里存在一個概念叫做NumberofSpotsundertissue,即,空間轉(zhuǎn)錄組片子上組織覆蓋的有效的spot位點。這個有效Spot的篩選標準是有UMI以及有序列表達。那么這個時候,貼片的質(zhì)量就成為了制約空間轉(zhuǎn)錄組有效區(qū)域的要點了。如果組織沒有很好地覆蓋到空轉(zhuǎn)片上,那么容易出現(xiàn)雖然有HE染色有組織片子,但是沒有基因表達,即無有效Spot位點。同樣的,另一個就是組織切片的大小,也就是說組織切片在整個玻片的覆蓋面積越小,分析的有效區(qū)域就越少。這兩者基本上決定了整個空間轉(zhuǎn)錄組分析結(jié)果的基礎質(zhì)量。烈冰科技空間轉(zhuǎn)錄組服務機構(gòu)
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