多光子成像系統(tǒng)提供的優(yōu)勢包括了真正的三維成像、對活組織內(nèi)部深處進(jìn)行成像的能力以及消除平面外熒光的能力。使用這種方法進(jìn)行成像,可以對斯托克斯位移非常短和/或效率非常低的熒光染料進(jìn)行成像,甚至可以對樣品或組織中固有的熒光分子進(jìn)行成像。多光子成像的缺點包括需要高峰值功率脈沖激光器,例如鎖模鈦:藍(lán)寶石激光器,并且直到現(xiàn)在,缺乏在整個發(fā)射范圍內(nèi)提供足夠吞吐量的高性能濾光片。整個激光調(diào)諧范圍內(nèi)的興趣和足夠的阻擋。使用雙光子顯微鏡觀察標(biāo)本的時候,只有在焦平面上才有光漂白和光毒性。熒光多光子顯微鏡數(shù)據(jù)采集
使用基因編碼的熒光探針可以在突觸和細(xì)胞分辨率下監(jiān)測體內(nèi)神經(jīng)元信號,這是揭示動物神經(jīng)活動復(fù)雜機(jī)制的關(guān)鍵。使用雙光子顯微鏡(2PM)可以以亞細(xì)胞分辨率對鈣離子傳感器和谷氨酸傳感器成像,從而測量不透明大腦深處的活動;成像膜電壓變化能直接反映神經(jīng)元活動,但神經(jīng)元活動的速度對于常規(guī)的2PM來說太快。目前電壓成像主要通過寬場顯微鏡實現(xiàn),但它的空間分辨率較差并且于淺層深度。因此要在不透明的大腦中以高空間分辨率對膜電壓變化進(jìn)行成像,需要明顯提高2PM的成像速率。美國高速高分辨率多光子顯微鏡實驗操作多光子顯微鏡在臨床前評價IA形態(tài)、細(xì)胞外基質(zhì)、細(xì)胞密度和血管形成等方面顯示出強大的作用。
多光子激發(fā)在紫外成像的優(yōu)勢在可見光脈沖中能得到紫外衍射的顯微觀察像。即使不使用紫外域光源、光學(xué)元件用可見光源、光學(xué)元件就能得到紫外光激勵的高空間分辨率圖像。多光子在生物成像中的優(yōu)勢在生物顯微鏡觀察方面,較早考慮的是不損壞生物本身的活性狀態(tài),維持水分、離子濃度、氧和養(yǎng)分的流通。在光觀察場合,無論是熱還是光子能量方面都必須停留在細(xì)胞不受損傷的照射量、光能量內(nèi)。多光子顯微鏡則能夠滿足此,而且還具有很多優(yōu)點。如三維分辨率、深度侵入、在散射效率、背景光、信噪比、控制等方面,均有以往激光顯微鏡不具備,或具有無法比擬的超越特性。
1,光源、光路高度整合通過精密的設(shè)計,將飛秒激光器、掃描振鏡、PMT、濾光片組,甚至是單光子熒光光路全套整合在一個不大的掃描頭內(nèi),無論掃描頭如何移動,掃描頭內(nèi)的光路都可以保持穩(wěn)定不變,從而實現(xiàn)了超穩(wěn)定、免維護(hù)的特點。2,配合多維度、高精度機(jī)械控制系統(tǒng)。掃描頭直接架設(shè)在一個多維運動的機(jī)械裝置上,可沿任意方向和角度移動掃描頭,方便對動物樣本進(jìn)行多方位的掃描觀察。而這在常規(guī)方案的多光子顯微鏡上有很大的實現(xiàn)難度,不但需要多個關(guān)節(jié)組合的光路導(dǎo)向機(jī)構(gòu),并且在這些關(guān)節(jié)旋轉(zhuǎn)的時候,都冒著極大的光路偏移的風(fēng)險,以至于在使用一段時間后都需要對光路進(jìn)行再次校準(zhǔn),而這樣的問題在我司上則完全不會發(fā)生。3.一機(jī)多能。多光子共聚焦掃描顯微鏡比雙光子共聚焦掃描顯微鏡具有更高的空間分辨率。
單光子激發(fā)熒光的過程,就是熒光分子吸收一個光子,從基態(tài)躍遷到激發(fā)態(tài),躍遷以后,能量較大的激發(fā)態(tài)分子,通過內(nèi)轉(zhuǎn)換把部分能量轉(zhuǎn)移給周圍的分子,自己回到比較低電子激發(fā)態(tài)的比較低振動能級。處于比較低電子激發(fā)態(tài)的比較低振動能級的分子的平均壽命大約在10s左右。這時它不是通過內(nèi)轉(zhuǎn)換的方式來消耗能量,回到基態(tài),而是通過發(fā)射出相應(yīng)的光量子來釋放能量,回到基態(tài)的各個不同的振動能級時,就發(fā)射熒光。因為在發(fā)射熒光以前已經(jīng)有一部分能量被消耗,所以發(fā)射的熒光的能量要比吸收的能量小,也就是熒光的特征波長要比吸收的特征波長來的長。中國市場多光子顯微鏡進(jìn)出口貿(mào)易趨勢。熒光多光子顯微鏡數(shù)據(jù)采集
多光子顯微鏡作為一種研究微觀結(jié)構(gòu)和功能的技術(shù),在眾多領(lǐng)域得到了普遍的應(yīng)用。熒光多光子顯微鏡數(shù)據(jù)采集
Ca2+是重要的第二信使,對于調(diào)節(jié)細(xì)胞的生理反應(yīng)具有重要的作用,開發(fā)和利用雙光子熒光顯微成像技術(shù)對Ca2+熒光信號進(jìn)行觀測,可以從某些方面對有機(jī)體或細(xì)胞的變化機(jī)制進(jìn)行分析,具有重要的意義。利用雙光子熒光顯微成像技術(shù)可以觀察細(xì)胞內(nèi)用熒光探針標(biāo)記的Ca2*的時間和空間的熒光圖像的變化,還可以觀察細(xì)胞某一層面或局部的(Ca2+)熒光圖像和變化。通過對單細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn),Ca2+不僅在細(xì)胞局部區(qū)域間的分布是不均勻的,而且細(xì)胞內(nèi)各局部區(qū)域的不同深度或?qū)哟伍g也存在不同程度的Ca2+梯差即所謂的空間Ca2梯差。熒光多光子顯微鏡數(shù)據(jù)采集