TOPTICAFemtoFiberultra920超快光纖激光器是一種易于操作且無(wú)需維護(hù)的激光系統(tǒng)。其輸出波長(zhǎng)為920nm,非常適合常規(guī)熒光基團(tuán)(如GFP,eGFP,Eosin,GCaMP,CFP,Calcein或者Venus)的雙光子激發(fā)。能給熒光基團(tuán)提供比較高的峰值功率,常用于神經(jīng)科學(xué)和其他與激光有關(guān)的生物光子學(xué)學(xué)科。而且其獨(dú)特設(shè)計(jì)(制造簡(jiǎn)單且經(jīng)濟(jì)高效的光源)對(duì)雙光子熒光顯微鏡發(fā)展的革新具有潛在的可能。在雙光子顯微鏡中,峰值功率就是亮度!如果您希望獲得比較好的圖像亮度,那么你就需要短脈沖,高功率,較重要的是需要干凈的時(shí)間脈沖形狀。FemtoFiberultra920具有足夠高的輸出功率,較短的脈沖和獨(dú)特的Clean-Pulse技術(shù),以及具有相對(duì)比較高的峰值功率,使得其在雙光子顯微鏡中可以實(shí)現(xiàn)****的亮度,而不會(huì)對(duì)樣品造成不必要的加熱。FemtoFiberultra920交鑰匙,完全集成的色散補(bǔ)償(可確保樣品處的脈沖較短),內(nèi)置的功率控制,操作直觀以及其堅(jiān)固而緊湊的設(shè)計(jì),使該系統(tǒng)具有極為友好的用戶體驗(yàn),是非線性顯微鏡應(yīng)用的較好解決方案。例如熒光蛋白的雙光子激發(fā)和基于SHG的對(duì)比機(jī)制。雙光子顯微鏡只有焦平面處才能形成雙光子吸收,而焦平面之外由于光強(qiáng)低無(wú)法被發(fā)動(dòng),所以雙光子成像更清晰。國(guó)內(nèi)ultima雙光子顯微鏡供應(yīng)商聯(lián)系方式
雙光子顯微成像技術(shù)不是什么新技術(shù),早在20多年前就有了,目前已經(jīng)在生命科學(xué)和材料科學(xué)中廣泛應(yīng)用。幾年前雙光子**過(guò)期后,已經(jīng)推出自己的雙光子顯微鏡的廠家估計(jì)不少于10家以上。即便如此,世界上很多實(shí)驗(yàn)室都搭雙光子,自己搭的好處有很多,首先是便宜,尤其是實(shí)驗(yàn)室已經(jīng)有飛秒激光器,那就更很省錢了。其次是靈活,可以選擇針對(duì)特殊用途的搭配,改動(dòng)也靈活。結(jié)束后的好處就是可以鍛煉隊(duì)伍,一趟走下來(lái)可以把新手帶出來(lái),后期維護(hù)也更加自由。當(dāng)然壞處也不少,首先是操心,特別是第1次搭的時(shí)候,開始要想方案,后來(lái)要解決各種實(shí)際問(wèn)題。其次是花時(shí)間,加上買配件的時(shí)間,比買一臺(tái)現(xiàn)成的商業(yè)化雙光子耗時(shí)長(zhǎng)?,F(xiàn)在已經(jīng)有不少關(guān)于如何搭雙光子顯微鏡的文章,各種protocol,大多是老外寫的,中文的較少。其實(shí)完全自己搭一套好用的系統(tǒng)還是不容易的,尤其是沒有經(jīng)驗(yàn)的時(shí)候,容易走彎路,多花錢,也多花時(shí)間,再加上雙光子的重要器件都需要從國(guó)外購(gòu)買,在國(guó)內(nèi)買這些東西耗時(shí)較長(zhǎng)。因此,我想總結(jié)一下我們的經(jīng)驗(yàn),貼出來(lái)分享,希望能幫到想自己動(dòng)手的實(shí)驗(yàn)室美國(guó)雙光子顯微鏡熒光壽命計(jì)數(shù)雙光子顯微鏡大量運(yùn)營(yíng)在實(shí)驗(yàn)室當(dāng)中;
WinfriedDenk使用的第1個(gè)光源是染料飛秒激光(脈沖寬度100fs,可見光波長(zhǎng)630nm)。染料激光雖然實(shí)驗(yàn)室演示可以接受,但是使用起來(lái)不方便,所以離商業(yè)化還很遠(yuǎn)。很快雙光子顯微鏡的標(biāo)準(zhǔn)光源變成了飛秒鈦寶石激光器。鈦寶石激光器除了具有固態(tài)光源的優(yōu)點(diǎn)外,還具有近紅外波長(zhǎng)調(diào)諧范圍寬,而近紅外比可見光穿透更深,對(duì)生物樣品的損傷更小。下圖是Thorlabs的雙光子和三光子顯微鏡配置,鈦寶石飛秒可調(diào)諧激光器位于平臺(tái)左側(cè)。從雙光子到三光子科學(xué)家們正在從雙光子顯微鏡轉(zhuǎn)向三光子顯微鏡。1996年,ChrisXu在康奈爾大學(xué)(Denk的導(dǎo)師實(shí)驗(yàn)室)讀博時(shí)發(fā)明了三光子顯微鏡。如果雙光子吸收是可行的,那么三光子似乎是自然的發(fā)展方向。三光子成像使用更長(zhǎng)的波長(zhǎng),大約1.3和1.7微米,成像深度比雙光子更深。目前錄音大約2.2毫米,人的大腦皮層厚度大約4毫米。與雙光子顯微鏡相比,三光子需要使用更強(qiáng)、更短、重復(fù)率更低的激光脈沖,這是傳統(tǒng)的鈦寶石激光器很難滿足的,但對(duì)于摻鐿光纖飛秒光參量放大器,比如我們的Y-Fi光參量放大器(OPA)就非常容易。
通過(guò)并行化不同激光波長(zhǎng)的激光掃描,研究人員增加了在相同時(shí)間內(nèi)可以成像的體積,同時(shí)保持了高的時(shí)間和空間分辨率。研究人員通過(guò)引入兩種不同波長(zhǎng)的鈣信號(hào)熒光探針,將神經(jīng)元群體的活動(dòng)標(biāo)記為兩種不同的顏色,同時(shí)激發(fā)兩種不同波長(zhǎng)的探針,從而實(shí)現(xiàn)了兩種顏色的并行數(shù)據(jù)記錄。為了實(shí)現(xiàn)三維空間成像,研究人員還在兩個(gè)激光束上配置了快速變焦系統(tǒng),即一個(gè)電透鏡和一個(gè)空間光調(diào)制器。因此,可以以10Hz的速度同時(shí)記錄10個(gè)500微米和500微米的平面,覆蓋600微米的深度,覆蓋大腦皮層第二層到第五層的結(jié)構(gòu),體積內(nèi)可以記錄2000多個(gè)神經(jīng)元。雙光子顯微鏡品牌有哪些?
新一代微型化雙光子熒光顯微成像系統(tǒng)的成功研制是國(guó)家重大科研儀器研制專項(xiàng)的一個(gè)碩果。它彰顯了北京大學(xué)在生物醫(yī)學(xué)成像領(lǐng)域先期布局的前瞻性,鍛煉了一支以年輕PI和碩博研究生為主體、具有學(xué)科交叉背景和重要技術(shù)創(chuàng)新能力的“中國(guó)智造”隊(duì)伍。目前,該研發(fā)團(tuán)隊(duì)正在領(lǐng)銜建設(shè)“多模態(tài)跨尺度生物醫(yī)學(xué)成像”十三五國(guó)家重大科技基礎(chǔ)設(shè)施,積極參與即將啟動(dòng)的中國(guó)腦科學(xué)計(jì)劃??梢云诖?,微型化雙光子熒光顯微成像系統(tǒng)將為實(shí)現(xiàn)“分析腦、理解腦、模仿腦”的戰(zhàn)略目標(biāo)發(fā)揮不可或缺的重要作用雙光子顯微鏡將得到更大的發(fā)展與更廣的應(yīng)用。熒光激光雙光子顯微鏡多少錢
雙光子顯微鏡明日之星--FemtoFiber ultra 920 。國(guó)內(nèi)ultima雙光子顯微鏡供應(yīng)商聯(lián)系方式
在高光子密度的情況下,熒光分子可以同時(shí)吸收兩個(gè)長(zhǎng)波長(zhǎng)的光子,然后發(fā)射出一個(gè)波長(zhǎng)較短的光子,其效果和使用一個(gè)波長(zhǎng)為長(zhǎng)波長(zhǎng)一半的光子去激發(fā)熒光分子是相同的(如下圖)。如煙酰胺腺嘌呤二核苷酸(NADH),在單光子激發(fā)時(shí),在波長(zhǎng)為350nm光的激發(fā)下發(fā)出450nm熒光;而在雙光子激發(fā)時(shí),可采用750nm的激發(fā)光得到450nm熒光。由于雙光子激發(fā)需要很高的光子密度,為了不損傷細(xì)胞,雙光子顯微鏡使用高能量鎖模脈沖激光器。這種激光器發(fā)出的激光具有很高的峰值能量和很低的平均能量,從而可以減少光漂白和光毒性帶來(lái)的不利影響。國(guó)內(nèi)ultima雙光子顯微鏡供應(yīng)商聯(lián)系方式