與傳統(tǒng)的單光子寬視野熒光顯微鏡相比,多光子顯微鏡(MPM)具有光學(xué)切片和深層成像等功能,這兩個(gè)優(yōu)勢(shì)極大地促進(jìn)了研究者們對(duì)于完整大腦深處神經(jīng)的了解與認(rèn)識(shí)。2019年,JeromeLecoq等人從大腦深處的神經(jīng)元成像、大量神經(jīng)元成像、高速神經(jīng)元成像這三個(gè)方面論述了相關(guān)的MPM技術(shù)[1]。想要將神經(jīng)元活動(dòng)與復(fù)雜行為聯(lián)系起來(lái),通常需要對(duì)大腦皮質(zhì)深層的神經(jīng)元進(jìn)行成像,這就要求MPM具有深層成像的能力。激發(fā)和發(fā)射光會(huì)被生物組織高度散射和吸收是限制MPM成像深度的主要因素,雖然可以通過(guò)增加激光強(qiáng)度來(lái)解決散射問(wèn)題,但這會(huì)帶來(lái)其他問(wèn)題,例如燒壞樣品、離焦和近表面熒光激發(fā)。增加MPM成像深度比較好的方法是用更長(zhǎng)的波長(zhǎng)作為激發(fā)光。多光子顯微鏡的發(fā)展現(xiàn)狀及未來(lái)發(fā)展趨勢(shì)。Ultima Investigator多光子顯微鏡單分子成像定位
與傳統(tǒng)的單光子寬視野熒光顯微鏡相比,多光子顯微鏡具有光學(xué)切片和深層成像等功能,這兩個(gè)優(yōu)勢(shì)極大地促進(jìn)了研究者們對(duì)于完整大腦深處神經(jīng)的了解與認(rèn)識(shí)。2019年,JeromeLecoq等人從大腦深處的神經(jīng)元成像、大量神經(jīng)元成像、高速神經(jīng)元成像這三個(gè)方面論述了相關(guān)的MPM技術(shù)。想要將神經(jīng)元活動(dòng)與復(fù)雜行為聯(lián)系起來(lái),通常需要對(duì)大腦皮質(zhì)深層的神經(jīng)元進(jìn)行成像,這就要求MPM具有深層成像的能力。激發(fā)和發(fā)射光會(huì)被生物組織高度散射和吸收是限制MPM成像深度的主要因素,雖然可以通過(guò)增加激光強(qiáng)度來(lái)解決散射問(wèn)題,但這會(huì)帶來(lái)其他問(wèn)題,例如燒壞樣品、離焦和近表面熒光激發(fā)。增加MPM成像深度比較好的方法是用更長(zhǎng)的波長(zhǎng)作為激發(fā)光。美國(guó)清醒動(dòng)物多光子顯微鏡實(shí)驗(yàn)操作點(diǎn)掃描多光子顯微鏡可以深入樣本并捕捉高質(zhì)量的圖像,但這個(gè)過(guò)程極其緩慢,因?yàn)閳D像是一次形成一個(gè)點(diǎn)。
Ca2+是一種重要的第二信使,在調(diào)節(jié)細(xì)胞生理反應(yīng)中起著重要作用。發(fā)展和利用雙光子熒光顯微成像技術(shù)觀(guān)測(cè)Ca2+熒光信號(hào),可以從某些方面分析生物體或細(xì)胞的變化機(jī)制,具有重要意義。利用雙光子熒光顯微成像技術(shù),我們可以觀(guān)察到細(xì)胞內(nèi)熒光探針標(biāo)記的Ca2*的時(shí)間和空間熒光圖像的變化,也可以觀(guān)察到一定水平或部分細(xì)胞內(nèi)(Ca2+)的熒光圖像和變化。通過(guò)對(duì)單個(gè)細(xì)胞的研究發(fā)現(xiàn),Ca2+的分布不僅在細(xì)胞的局部區(qū)域之間是不均勻的,而且在細(xì)胞內(nèi)不同深度或?qū)哟蔚木植繀^(qū)域之間也存在不同程度的Ca2+梯度,稱(chēng)為空間Ca2+梯度。
當(dāng)激光光束焦點(diǎn)的位置在鏡面上,此時(shí)被反射的激光在無(wú)限空間中成為準(zhǔn)直光束,并在OBJ2的焦平面上形成了一個(gè)激光光斑。同理,如果橫向掃描光束,則會(huì)形成遠(yuǎn)離傾斜鏡鏡面的焦點(diǎn),這又導(dǎo)致返回的光束會(huì)聚或發(fā)散,進(jìn)而OBJ2能在軸向不同位置形成焦點(diǎn),通過(guò)這種方式即能實(shí)現(xiàn)連續(xù)的軸向掃描。對(duì)于較小的傾斜角,聚焦沒(méi)有球差。該組在實(shí)驗(yàn)中表征了這種將橫向掃描轉(zhuǎn)換為軸向掃描技術(shù)的光學(xué)性能,并使用它將光片顯微鏡的成像速度提升了一個(gè)數(shù)量級(jí),從而可以在三個(gè)維度上量化快速的囊泡動(dòng)力學(xué)。該組還演示了使用雙光子光柵掃描顯微鏡以12kHz進(jìn)行共振遠(yuǎn)程聚焦,該技術(shù)可對(duì)大腦組織和斑馬魚(yú)心臟動(dòng)力學(xué)進(jìn)行快速成像,并具有衍射極限的分辨率。多光子顯微鏡之類(lèi)的先進(jìn)光學(xué)技術(shù)能夠在活生物體的大腦表面下更深地成像。
作為一個(gè)多學(xué)科交叉、知識(shí)密集、資金密集的高技術(shù)產(chǎn)業(yè),多光子顯微鏡涉及醫(yī)學(xué)、生物學(xué)、化學(xué)、物理學(xué)、電子學(xué)、工程學(xué)等學(xué)科,生產(chǎn)工藝相對(duì)復(fù)雜,進(jìn)入門(mén)檻較高,是衡量一個(gè)國(guó)家制造業(yè)和高科技發(fā)展水平的重要標(biāo)準(zhǔn)之一。過(guò)去的5年,多光子顯微鏡市場(chǎng)集中,由于投產(chǎn)生產(chǎn)的成本較高,技術(shù)難度大,目前涌現(xiàn)的新企業(yè)不多。顯微鏡作為一個(gè)傳統(tǒng)的高科技行業(yè),其作用至今沒(méi)有被其他技術(shù)顛覆,只是不斷融合并發(fā)展相關(guān)技術(shù),在醫(yī)療和其他精密檢測(cè)領(lǐng)域發(fā)揮著更大的作用。顯微鏡的商業(yè)化發(fā)展已進(jìn)入成熟期,主要需求來(lái)自教學(xué)、生命科學(xué)的研究及精密檢測(cè)等,全球市場(chǎng)呈現(xiàn)平緩的增長(zhǎng)態(tài)勢(shì)。然而,顯微鏡產(chǎn)品(如多光子顯微鏡、電子顯微鏡)正拉動(dòng)市場(chǎng)需求,多光子顯微鏡市場(chǎng)發(fā)展?jié)摿薮?。多光子激光掃描顯微鏡是建立在激光掃描顯微鏡技術(shù)基礎(chǔ)上的實(shí)驗(yàn)方法,三維觀(guān)察上提供更的光學(xué)切片能力。飛秒激光多光子顯微鏡焦點(diǎn)激發(fā)
多光子顯微鏡銷(xiāo)售/營(yíng)銷(xiāo)策略建議。Ultima Investigator多光子顯微鏡單分子成像定位
雙光子顯微鏡工作原理是將超快的紅外激光脈沖傳輸?shù)綐悠分?,在樣品中與組織或熒光標(biāo)記相互作用,這些組織或熒光標(biāo)記發(fā)出用于創(chuàng)建圖像的信號(hào)。雙光子顯微鏡被多用于生物學(xué)研究,因?yàn)樗軌虍a(chǎn)生高分辨率的3-D圖像,深度達(dá)1毫米。然而,這些優(yōu)點(diǎn)帶來(lái)了有限的成像速度,因?yàn)槲⒐鈼l件需要逐點(diǎn)圖像采集和重建的點(diǎn)檢測(cè)器。為了加快成像速度,科學(xué)家之前開(kāi)發(fā)了一種多焦點(diǎn)激光照明方法,該方法使用數(shù)字微鏡設(shè)備(DMD),這是一種通常用于投影儀的低成本光掃描儀。此前人們認(rèn)為這些DMD不能與超快激光一起工作。然而現(xiàn)在解決了這個(gè)問(wèn)題,這使得DMD在超快激光應(yīng)用中得以應(yīng)用,這些應(yīng)用包括光束整形、脈沖整形、快速掃描和雙光子成像。DMD在樣品內(nèi)隨機(jī)選擇的位置上產(chǎn)生5到30點(diǎn)聚焦激光。Ultima Investigator多光子顯微鏡單分子成像定位