年連續(xù)三年成為新賽美全產(chǎn)品線中“受客戶喜歡的科研產(chǎn)品”“無血清細胞凍存液關鍵技術及產(chǎn)業(yè)化”項目成功入圍“2017年東吳科技創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)人才計劃“3優(yōu)勢分析傳統(tǒng)凍存液CELLSAVING成分“血清+培養(yǎng)基+dmso”四大類,成分明確,不含血清安全性1、微生物污染風險2、批次不穩(wěn)定1、無微生物污染風險險2、批次穩(wěn)定操作1、4℃(40min)→20℃(30min)→80℃→液氮2、程序性降溫盒(多人共用;異丙醇)直接凍于-80℃冰箱,長期保存效果活率偏低,批次有差異,不適用無血清細胞凍存90%以上,復蘇后幾乎看不到死細胞無血清快速細胞凍存液:減少各類病毒、霉菌和支原體等的污染,確保凍存細胞安全。北京正規(guī)無血清細胞凍存液廠家直銷
隨著細胞治理以及細胞儲存產(chǎn)業(yè)發(fā)展,細胞凍存也面臨從科研應用走向產(chǎn)業(yè)轉(zhuǎn)化。凍存要求發(fā)生改變,因為凍存細胞要進行臨床應用,所以凍存液成分由原來血清變?yōu)闊o血清,無動物源成分,凍存液中使用的所有原料均應符合臨床或藥物需求。隨著細胞凍存數(shù)量增加,凍存流程簡化也成為必然趨勢,因此無血清非程序降溫凍存液應運而生。目前針對細胞治理領域,推出一款即用型的無血清細胞凍存液,這款產(chǎn)品是細胞凍存研究的革新,主要具有幾大特點,凍存液無血清成分、無需配制直接使用、無需程序降溫盒、不需分步降溫、即用型細胞凍存液。該款凍存液適用于臍帶、脂肪、等間充質(zhì)干細胞,免疫細胞以及大多數(shù)細胞系凍存。同時該款所有成分均使用藥用級原料配制而成,完全適應細胞儲存,細胞治理以及科學研究等不同場景使用杭州正規(guī)無血清細胞凍存液廠家無血清細胞凍存液產(chǎn)品特色:可微量,原位凍存,例如雜交瘤細胞的凍存,省時高效。
以前在另一家實驗室的時候,凍存細胞根本就沒有講究這些標準操作。凍存的細胞有293T、PT67、C2C12、MEF(鼠胚胎成纖維細胞)、HelaS3、HelaD、U2OS、HKC、RK3E、ECO、H292、HSY、COS7、SupT1等。將細胞酶消化后直接參與離心,加入凍存液(含90%的血清和10%的DMS0),直接放在-80℃冰箱。兩三天后移入液氮中,較久保存,幾年后細胞的活力仍沒有什么受損,照常能復蘇,成活率高。但有三點須注意:(1)一是細胞的生長狀態(tài)要好,不能長得過稀,同樣也不能過密,細胞的狀態(tài)看起來相當健康。70%密度的要保存的細胞須再長24h才能全滿,萬一細胞狀態(tài)不好,可以酶消化后再繁殖一次;(2)凍存細胞的量要留心,不能太密也不能太稀,一般1OOmm培養(yǎng)皿的細胞凍存為3~4管;(3)存放在-80℃冰箱的時間不能過長,一兩天后轉(zhuǎn)移到液氮罐里。我們也曾取出存放在-80℃冰箱的細胞,半年還有30%~50%的細胞有活性,但一年的細胞就沒有活的。
無血清細胞凍存液的使用方法及注意事項:1.將分裝好的細胞凍存管,直接置于-80度冰箱過夜保存,次日投入液氮中保存即可備注:1、凍存過程中,第2步在冰袋附近操作時,低溫避免保護劑對細胞造成損傷。2、細胞凍存管一定要保證完全密封,否則在復蘇過程中有可能會炸(1)提前開啟水浴鍋,溫度調(diào)節(jié)到37(2)將凍存的細胞冷凍管從液氮中取出,迅速置于水浴鍋中融化,盡量1min融化,時間越短,對細胞影響越小。(3)將融化后的含細胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養(yǎng)基中充分混勻,(如細胞冷凍保存液為500ul,則加入到5ml新鮮培養(yǎng)基中,如細胞冷凍保存液位1ml,則加入10ml新鮮培養(yǎng)基中。)(4)混勻后立即離心,800轉(zhuǎn),3min即可離心結(jié)束后棄上清,加入預溫的新鮮培養(yǎng)液。(5)混勻后分瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(二氧化碳濃度根據(jù)培養(yǎng)基要求決定,通常為5%【注意事項】細胞系凍存密度備注正常人成纖維細胞1~310cells/ml雜交瘤細胞1~310cells/ml某些hybridoma會因冷凍濃度太高而在解凍24小時后死去。無血清細胞凍存液的優(yōu)勢:無血清細胞凍存液是不含血清和動物源成分。
細胞凍存概念:細胞凍存是細胞保存的主要方法之一。利用凍存技術將細胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細胞暫時脫離生長狀態(tài)而將其細胞特性保存起來,這樣在需要的時候再復蘇細胞用于實驗。而且適度地保存一定量的細胞,可以防止因正在培養(yǎng)的細胞被污染或其他意外事件而使細胞丟種,起到了細胞保種的作用。細胞凍存和復蘇的原則是:慢凍速融,這樣更加有利于保持細胞的活力。凍存細胞不加任何保護劑,會導致細胞內(nèi)冰晶的產(chǎn)生,從而使細胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機械損傷,引起細胞內(nèi)環(huán)境滲透壓,PH,電解質(zhì)等的改變,進而促使細胞死亡。使細胞產(chǎn)生內(nèi)源性的機械損傷,引起細胞內(nèi)環(huán)境滲透壓。深圳無血清細胞凍存液
無血清凍存液特性:不含動物成分。北京正規(guī)無血清細胞凍存液廠家直銷
如何提高細胞凍存成功率:1.沒有控制好細胞的生長密度細胞的密度對細胞的生存質(zhì)量有著重要的影響,畢竟它們是一群又不能擠著了也不能孤獨的嬌貴寶寶。密度過高會讓細胞沒有足夠的生存空間,密度過低會讓細胞無法互相連接健康生長。建議大家在細胞接種前,一定要調(diào)整好適合細胞生長的濃度,提高細胞的存活率。2.溫度控制不達標慢凍快融是細胞凍存復蘇的中心關鍵詞之一。常規(guī)的凍存操作中,都會要求嚴格的梯度降溫,常見的是-4℃→-20℃至-40℃→-80℃→液氮,一定要避免溫度原因?qū)е录毎匀∠麥?;除非使用了成分?jīng)過優(yōu)化、經(jīng)過嚴格測試的凍存液,才能免去程序降溫這個繁瑣的步驟。保存的時候也要保證整個細胞都是處于液氮的液面下方,避免溫度對細胞存活的影響。北京正規(guī)無血清細胞凍存液廠家直銷