無血清細(xì)胞凍存液細(xì)胞復(fù)蘇步驟:1.從-80℃取出凍存細(xì)胞,立即放入37℃水浴鍋快速解凍。2.待細(xì)胞混合液徹底解凍融化后,立即加入1ml細(xì)胞培養(yǎng)基,混合。3.將混合液移至含有約5ml該細(xì)胞培養(yǎng)基的離心管中,1000rpm,5min離心,棄掉上清,獲取細(xì)胞沉淀。4.加入適量的新鮮細(xì)胞培養(yǎng)基,輕柔混勻,并將混合液轉(zhuǎn)移至培養(yǎng)容器,觀察細(xì)胞狀態(tài)正常后,進(jìn)行后續(xù)細(xì)胞培養(yǎng)工作。注意事項(xiàng):1.細(xì)胞在加入凍存液分裝后,應(yīng)減少在外存放時(shí)間,盡快移入到-80℃較低溫冰箱。2.對(duì)于干細(xì)胞(ES細(xì)胞)等凍存時(shí),建議在使用前對(duì)所凍存的胞進(jìn)行1周以上的試驗(yàn)性細(xì)胞冷凍保存培養(yǎng),確認(rèn)性能后再進(jìn)行正式凍存。3.本款細(xì)胞凍存液含有10%DMSO,部分對(duì)DMSO敏感的細(xì)胞,建議對(duì)其進(jìn)行至少1周的本產(chǎn)品試驗(yàn)性的細(xì)胞凍存培養(yǎng),確認(rèn)性能后再正式凍存。無血清細(xì)胞凍存液產(chǎn)品特色:可微量,原位凍存,例如雜交瘤細(xì)胞的凍存,省時(shí)高效。長(zhǎng)沙正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液廠家推薦
細(xì)胞凍存注意事項(xiàng):離心問題:目前主要有兩種見解。一種是解凍后的細(xì)胞懸液直接吹打均勻后分裝到培養(yǎng)瓶中進(jìn)行培養(yǎng),第二天換液。因?yàn)殡x心的目的是兩個(gè),去除DMSO,去除死細(xì)胞,這個(gè)是標(biāo)準(zhǔn)流程,但對(duì)一般人來說,把握不好離心轉(zhuǎn)速和時(shí)間,轉(zhuǎn)的不夠活細(xì)胞沉底的少,細(xì)胞就全被扔掉了,轉(zhuǎn)過了活細(xì)胞會(huì)受壓過大,死亡。此外在操作過程中容易污染,所以不推薦。另一種說法為細(xì)胞懸液中含有二甲基亞砜(DMSO),DMSO對(duì)細(xì)胞有一定的毒副作用,所以須將離心后的液體前倒凈,且一定倒干凈。我在試驗(yàn)中按照常規(guī)的離心分裝的方法進(jìn)行復(fù)蘇,結(jié)果無有異常。長(zhǎng)沙正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液廠家批發(fā)價(jià)血清批次、品質(zhì)間差異導(dǎo)致凍存液的批次間差異。
細(xì)胞凍存,我們應(yīng)該注意哪些事項(xiàng):1、凍存細(xì)胞是為了留種,所以要選擇高濃度的細(xì)胞量進(jìn)行凍存。正常情況下,當(dāng)細(xì)胞濃度達(dá)到1*105/ml時(shí)即可凍存,具體是多少量主要根據(jù)個(gè)人觀察。2、二甲基亞砜(DMSO)因?yàn)榇┩讣?xì)胞的能力較強(qiáng),因此作為常用的凍存劑,也可以叫做細(xì)胞保護(hù)劑加入到細(xì)胞懸液中。網(wǎng)上有些分享說道,如果選用DMSO,整個(gè)細(xì)胞懸液的制作過程都要在4℃環(huán)境下進(jìn)行。本人采用過這種方法凍存過A549和某一原代細(xì)胞,發(fā)現(xiàn)A549復(fù)蘇存活率和正常凍存的過程相比并沒有明顯區(qū)別,而原代細(xì)胞的接種率確實(shí)有所上升,可能是因?yàn)槭茿549細(xì)胞比較皮實(shí),這種方法更適用于比較脆弱的細(xì)胞吧。
無血清細(xì)胞凍存液的使用方法及注意事項(xiàng):1.將分裝好的細(xì)胞凍存管,直接置于-80度冰箱過夜保存,次日投入液氮中保存即可備注:1、凍存過程中,第2步在冰袋附近操作時(shí),低溫避免保護(hù)劑對(duì)細(xì)胞造成損傷。2、細(xì)胞凍存管一定要保證完全密封,否則在復(fù)蘇過程中有可能會(huì)炸(1)提前開啟水浴鍋,溫度調(diào)節(jié)到37(2)將凍存的細(xì)胞冷凍管從液氮中取出,迅速置于水浴鍋中融化,盡量1min融化,時(shí)間越短,對(duì)細(xì)胞影響越小。(3)將融化后的含細(xì)胞的冷凍保存液迅速析出置于新鮮培養(yǎng)基中充分混勻,(如細(xì)胞冷凍保存液為500ul,則加入到5ml新鮮培養(yǎng)基中,如細(xì)胞冷凍保存液位1ml,則加入10ml新鮮培養(yǎng)基中。)(4)混勻后立即離心,800轉(zhuǎn),3min即可離心結(jié)束后棄上清,加入預(yù)溫的新鮮培養(yǎng)液。(5)混勻后分瓶置于二氧化碳培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。(二氧化碳濃度根據(jù)培養(yǎng)基要求決定,通常為5%【注意事項(xiàng)】細(xì)胞系凍存密度備注正常人成纖維細(xì)胞1~310cells/ml雜交瘤細(xì)胞1~310cells/ml某些hybridoma會(huì)因冷凍濃度太高而在解凍24小時(shí)后死去。無血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì):即用型,無需現(xiàn)配,直接將細(xì)胞懸浮于凍存液中即可。
以前在另一家實(shí)驗(yàn)室的時(shí)候,凍存細(xì)胞根本就沒有講究這些標(biāo)準(zhǔn)操作。凍存的細(xì)胞有293T、PT67、C2C12、MEF(鼠胚胎成纖維細(xì)胞)、HelaS3、HelaD、U2OS、HKC、RK3E、ECO、H292、HSY、COS7、SupT1等。將細(xì)胞酶消化后直接參與離心,加入凍存液(含90%的血清和10%的DMS0),直接放在-80℃冰箱。兩三天后移入液氮中,較久保存,幾年后細(xì)胞的活力仍沒有什么受損,照常能復(fù)蘇,成活率高。但有三點(diǎn)須注意:(1)一是細(xì)胞的生長(zhǎng)狀態(tài)要好,不能長(zhǎng)得過稀,同樣也不能過密,細(xì)胞的狀態(tài)看起來相當(dāng)健康。70%密度的要保存的細(xì)胞須再長(zhǎng)24h才能全滿,萬一細(xì)胞狀態(tài)不好,可以酶消化后再繁殖一次;(2)凍存細(xì)胞的量要留心,不能太密也不能太稀,一般1OOmm培養(yǎng)皿的細(xì)胞凍存為3~4管;(3)存放在-80℃冰箱的時(shí)間不能過長(zhǎng),一兩天后轉(zhuǎn)移到液氮罐里。我們也曾取出存放在-80℃冰箱的細(xì)胞,半年還有30%~50%的細(xì)胞有活性,但一年的細(xì)胞就沒有活的。無血清細(xì)胞凍存液的優(yōu)勢(shì):可培養(yǎng)板整板凍存,例如雜交瘤細(xì)胞凍存時(shí)可節(jié)省篩選過程。太原正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液報(bào)價(jià)
無血清細(xì)胞凍存液使用方法:直接將含細(xì)胞混合液的凍存管放入-80℃以下冰箱,長(zhǎng)期冷凍保存。長(zhǎng)沙正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液廠家推薦
細(xì)胞凍存是細(xì)胞保存的主要方法之一。利用凍存技術(shù)將細(xì)胞置于-196℃液氮中低溫保存,可以使細(xì)胞暫時(shí)脫離生長(zhǎng)狀態(tài)而將其細(xì)胞特性保存起來,這樣在需要的時(shí)候再?gòu)?fù)蘇細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞凍存的原理:細(xì)胞凍存及復(fù)蘇的基本原則是慢凍快融,實(shí)驗(yàn)證明這樣可以較大限度的保存細(xì)胞活力。目前細(xì)胞凍存多采用甘油或二甲基亞砜作保護(hù)劑,這兩種物質(zhì)能提高細(xì)胞膜對(duì)水的通透性,加上緩慢冷凍可使細(xì)胞內(nèi)的水分滲出細(xì)胞外,減少細(xì)胞內(nèi)冰晶的形成,從而減少由于冰晶形成造成的細(xì)胞損傷。復(fù)蘇細(xì)胞應(yīng)采用快速融化的方法,這樣可以保證細(xì)胞外結(jié)晶在很短的時(shí)間內(nèi)即融化,避免由于緩慢融化使水分滲入細(xì)胞內(nèi)形成胞內(nèi)再結(jié)晶對(duì)細(xì)胞造成損傷。長(zhǎng)沙正規(guī)無血清細(xì)胞凍存液廠家推薦