建立疾病模型的目的是為了防治人類疾病。因此，疾病模型研究結(jié)果的可靠程度取決于模型與人類疾病的相似或可比擬的程度。接下來就讓上海研錄帶您了解相關(guān)知識。一個(gè)好的疾病模型應(yīng)具有以下特點(diǎn)：①能夠再現(xiàn)所要研究的人類疾病，動物疾病表現(xiàn)應(yīng)該與人類疾病相似；②動物能重復(fù)產(chǎn)生該疾病，盡可能能在兩種動物體內(nèi)復(fù)制該??；③動物背景資料完整，實(shí)驗(yàn)動物合格，生命周期要滿足實(shí)驗(yàn)需要;④動物要價(jià)廉、來源充足、便于運(yùn)送；⑤盡可能選用小動物。生物醫(yī)學(xué)科研專業(yè)設(shè)計(jì)中常要考慮如何建立動物模型的問題，因?yàn)楹芏嚓U明疾病及療效機(jī)制的實(shí)驗(yàn)不可能或不應(yīng)該在患者身上進(jìn)行。常要依賴于復(fù)制動物模型，但一定要進(jìn)行周密設(shè)計(jì)，設(shè)計(jì)時(shí)要遵循下列一些...

科手術(shù)設(shè)備|細(xì)胞/組織支持系統(tǒng)|膜片鉗|輔助設(shè)備|其它常用耗材燒杯|漏斗|量筒|廣口罐|研缽和研杵|手套|移液管|移液器(Pipette)單道手動移液器|單道電動移液器|多道手動移液器多道電動移液器|正置換移液器|瓶口分液器吸頭(Tips)濾芯吸頭(滅菌)|濾芯吸頭(未滅菌)|普通吸頭(滅菌)普通吸頭(未滅菌)|多道移液器吸頭液體工作站吸頭|其它瓶(Bottle)離心瓶|稱量瓶|存儲瓶|比重瓶|血清瓶|滴瓶吸氣瓶|細(xì)胞培養(yǎng)瓶|培養(yǎng)基瓶|其它瓶(Flask)藍(lán)蓋瓶|燒瓶|平底燒瓶|克氏(長頸)燒瓶|碘測定燒瓶|蒸餾燒瓶|容量瓶|過濾瓶|其它管(Tube&Vial)離心管|微離心管|樣品儲...

轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果及TCGA數(shù)據(jù)庫分析）圖5RNA-Seq和m6A-seq聯(lián)合鑒定SOCS2是介導(dǎo)的m6A修飾的下游靶基因PLoSOne2015,在許多不同種類的RNA中，都已觀察到N6-腺苷(m6A)的甲基化，但其在microRNAs中還沒有被研究。研究者在FTO1C1,FTO2D4和FTO3C3細(xì)胞系中，通過敲除m6A甲基轉(zhuǎn)移酶FTO篩選到表達(dá)差異的microRNA,說明miRNA受m6A甲基化的調(diào)控。進(jìn)一步通過MeRIP-Seq發(fā)現(xiàn)相當(dāng)一部分的microRNA具有m6A修飾。通過motif分析，他們發(fā)現(xiàn)了區(qū)分甲基化和非甲基化microRNA的一致序列。該文章所述的表觀遺傳修飾在基因表...

常見的有理染色、WesternBlot、PCR等），實(shí)驗(yàn)儀器是否需要預(yù)約使用。如果需要外送公司檢測，需要提前聯(lián)系好商家，以及了解清楚樣本如何獲取，如何運(yùn)輸。飼養(yǎng)動物及干預(yù)動物購買后需要將時(shí)間節(jié)點(diǎn)提前規(guī)劃好，比如，周需要做什么？測量體重？觀察飲食？測量需要的指標(biāo)？中間有無特殊操作？比如灌胃、測量體重、做CT檢測、取血？……第幾周取材？取材需要哪些？預(yù)實(shí)驗(yàn)方案就要提前設(shè)計(jì)清楚以上內(nèi)容。取材及樣品準(zhǔn)備取材需要提前到動物房禁食、稱體重、取出動物、手術(shù)的、固定所需要的試劑和EP管，WesternBlot和PCR所需要的樣本儲存條件。比如凍存管、EP管，是否需要冰塊？是否需要液氮？取材當(dāng)天需要多少...

靜置25分鐘后把酒精倒干，用吸水紙吸出多余的酒精，然后配壓縮膠，同樣的操作，關(guān)鍵是梳子要插得快，要小心梳子下產(chǎn)生氣泡，然后靜置30分鐘。如果是當(dāng)天跑膠，我會等上層膠凝2個(gè)小時(shí)再用，但要注意防干燥縮水，可以在一個(gè)小時(shí)的時(shí)候沿著梳子上緣加點(diǎn)電泳液。所以我一般提前一晚制膠，泡于純水或者電泳液里置于4度冰箱暫存。三、蛋白電泳1、上樣前準(zhǔn)備把膠組裝到電泳芯上，注意密閉性(否則漏液)，如果內(nèi)槽漏液就不是勻強(qiáng)電場了，條帶可能就不是一條直線。然后內(nèi)槽倒?jié)M電泳液，拔梳子，這一步要小心，梳子要兩邊一起緩緩?fù)习纬?，然后觀察泳道內(nèi)有無脫落的膠?；蛘吣z絲，有的話用1毫升注射器吸出。然后從冰箱取出蛋白樣品，解凍...

轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果及TCGA數(shù)據(jù)庫分析）圖5RNA-Seq和m6A-seq聯(lián)合鑒定SOCS2是介導(dǎo)的m6A修飾的下游靶基因PLoSOne2015,在許多不同種類的RNA中，都已觀察到N6-腺苷(m6A)的甲基化，但其在microRNAs中還沒有被研究。研究者在FTO1C1,FTO2D4和FTO3C3細(xì)胞系中，通過敲除m6A甲基轉(zhuǎn)移酶FTO篩選到表達(dá)差異的microRNA,說明miRNA受m6A甲基化的調(diào)控。進(jìn)一步通過MeRIP-Seq發(fā)現(xiàn)相當(dāng)一部分的microRNA具有m6A修飾。通過motif分析，他們發(fā)現(xiàn)了區(qū)分甲基化和非甲基化microRNA的一致序列。該文章所述的表觀遺傳修飾在基因表...

應(yīng)退回純酒精中重新脫水，然后再透明，否則切片難以鏡檢。（4）二甲苯應(yīng)盡量保持無水，應(yīng)經(jīng)常更換，或用紗布包無水硫酸銅放入染色缸內(nèi)吸收水分。5.透蠟注意事項(xiàng)（1）透蠟的目的是除去組織中的透明劑（如二甲苯等），使石蠟滲透到組織內(nèi)部達(dá)到飽和程度以便包埋。透蠟時(shí)間根據(jù)組織大小而定。（2）盡量保持在較低溫度中進(jìn)行，以石蠟不凝固為度。（3）透蠟溫度要恒定，不可忽高忽低。（4）操作要迅速，力求在短的時(shí)間內(nèi)完成石蠟透入過程，以免引起組織變硬、變脆、收縮等。（5）注意溫度不要過高，以免組織發(fā)脆。6.染色水洗注意事項(xiàng)（1）染色原理：伊紅主要染細(xì)胞質(zhì)，著色濃淡應(yīng)與蘇木精染細(xì)胞核的濃淡相配合，如果細(xì)胞核染色較濃...

必須仔細(xì)考慮所有可能影響實(shí)驗(yàn)的條件和技術(shù)參數(shù)以獲得可重復(fù)且一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，要求實(shí)驗(yàn)人員深入了解和熟練掌握操作過程才能準(zhǔn)確地構(gòu)建CLP模型。造模評價(jià)該模型通過模型動物自身引發(fā)膿毒癥，與臨床膿毒癥類似的地方在于有連續(xù)分散的細(xì)菌源，血中內(nèi)檢出率及細(xì)菌培養(yǎng)陽性率高，動物體溫降低以及血流動力學(xué)早期高排低阻晚期低排低阻的特征也與臨床相仿，在建模的同時(shí)模擬臨床膿毒癥方法，輔以充分的液體復(fù)蘇和適當(dāng)輔助(如藥物)，另外這個(gè)模型可控性高，標(biāo)準(zhǔn)化水平高。該模型中膿毒癥的嚴(yán)重程度受3個(gè)重要因素的影響：結(jié)扎盲腸的長度、穿孔針的大小和CLP后的支持。結(jié)扎盲腸的長度是死亡率的主要決定因素，隨著結(jié)扎盲腸的長度的...

轉(zhuǎn)錄組測序結(jié)果及TCGA數(shù)據(jù)庫分析）圖5RNA-Seq和m6A-seq聯(lián)合鑒定SOCS2是介導(dǎo)的m6A修飾的下游靶基因PLoSOne2015,在許多不同種類的RNA中，都已觀察到N6-腺苷(m6A)的甲基化，但其在microRNAs中還沒有被研究。研究者在FTO1C1,FTO2D4和FTO3C3細(xì)胞系中，通過敲除m6A甲基轉(zhuǎn)移酶FTO篩選到表達(dá)差異的microRNA,說明miRNA受m6A甲基化的調(diào)控。進(jìn)一步通過MeRIP-Seq發(fā)現(xiàn)相當(dāng)一部分的microRNA具有m6A修飾。通過motif分析，他們發(fā)現(xiàn)了區(qū)分甲基化和非甲基化microRNA的一致序列。該文章所述的表觀遺傳修飾在基因表...

建議按照2×106每孔的數(shù)量將293T細(xì)胞均勻鋪入。(2)第二天：在24小時(shí)之內(nèi)，觀察293T細(xì)胞的匯合度在90%~95%之間時(shí)，向其中加入DNA-脂質(zhì)體復(fù)合體，DNA-脂質(zhì)體復(fù)合體制備方法如下：a)輕輕混勻LipoMax，根據(jù)說明書加入相應(yīng)量于500μlOpti-MEM無血清培養(yǎng)基中，混合均勻并置于室溫5分鐘。b)在500μlOpti-MEM無血清培養(yǎng)基中稀釋DNA，總質(zhì)量為15μg按照載體質(zhì)粒:psPAX2:=4:3:1的比例加入DNA。c)將稀釋后的LipoMax和稀釋后的DNA輕輕混勻，常溫靜置20分鐘，形成DNA-LipoMax復(fù)合體。(3)將DNA-LipoMax復(fù)合體輕柔...

必須仔細(xì)考慮所有可能影響實(shí)驗(yàn)的條件和技術(shù)參數(shù)以獲得可重復(fù)且一致的實(shí)驗(yàn)結(jié)果。因此，要求實(shí)驗(yàn)人員深入了解和熟練掌握操作過程才能準(zhǔn)確地構(gòu)建CLP模型。造模評價(jià)該模型通過模型動物自身引發(fā)膿毒癥，與臨床膿毒癥類似的地方在于有連續(xù)分散的細(xì)菌源，血中內(nèi)檢出率及細(xì)菌培養(yǎng)陽性率高，動物體溫降低以及血流動力學(xué)早期高排低阻晚期低排低阻的特征也與臨床相仿，在建模的同時(shí)模擬臨床膿毒癥方法，輔以充分的液體復(fù)蘇和適當(dāng)輔助(如藥物)，另外這個(gè)模型可控性高，標(biāo)準(zhǔn)化水平高。該模型中膿毒癥的嚴(yán)重程度受3個(gè)重要因素的影響：結(jié)扎盲腸的長度、穿孔針的大小和CLP后的支持。結(jié)扎盲腸的長度是死亡率的主要決定因素，隨著結(jié)扎盲腸的長度的...

保存于嚴(yán)密緊塞或加蓋的容器里，同時(shí)在容器外上標(biāo)簽，并隨同材料在溶液中投入相應(yīng)的標(biāo)簽，以免相互混淆。標(biāo)簽上注明固定液、材料來源、日期等。標(biāo)簽上的文字，應(yīng)用黑色鉛筆或繪圖黑墨水書寫。3.脫水注意事項(xiàng)（1）脫水原理：乙醇與石蠟不相溶，而二甲苯既能溶于乙醇又能溶于石蠟。當(dāng)組織中全部被二甲苯占有時(shí)，光線可以透過，組織呈現(xiàn)出不同程度的透明狀態(tài)。（2）脫水必須在有蓋的玻璃品中進(jìn)行，防止吸收空氣中的水分。（3）在更換高一級的脫水劑時(shí)，不要移動材料以免損壞，可用吸管吸出器皿中的脫水劑，再用吸水吸盡器皿內(nèi)剩余液，然后于皿中加入高一級脫水劑。（4）在低濃度酒精中，每級停留不宜太長，否則易使組織變軟，助長材料...

一種是用beta巰基乙醇打開蛋白質(zhì)分子二硫鍵的，另一種是用DTT(二硫蘇糖醇)。兩者的作用是一樣的，但特點(diǎn)不一樣，前者更容易與氧氣反應(yīng)，穩(wěn)定性比后者差，如果在常溫下暴露在空中，前者只能維持24小時(shí)的活性，后者卻可以維持7天左右。所以該如何選擇?如果是蛋白樣品較少，跑幾次就可以用完的樣品，這時(shí)選擇beta巰基乙醇。如果樣品很多，計(jì)劃跑上幾十次的，優(yōu)先選擇DTT,建議變性后分裝保存。二、SDS-PAGE凝膠配制1、配膠前準(zhǔn)備首先強(qiáng)調(diào)一下，一塊好的膠是跑好蛋白的前提，所以這個(gè)環(huán)節(jié)也不容忽視。玻璃板的選擇，一種是1毫米厚度的，另一種是，這個(gè)厚度選擇也是有講究的，如果上樣體積小于10微升，優(yōu)先選...

用途基因功能研究、免/殺傷/增殖等、抗體活性篩選（細(xì)胞水平的結(jié)合和阻斷）、CAR分子的殺傷活性評價(jià)。材料與儀器（以慢pMSCV載體為例）包含目的基因和eGFP-Tag的pMSCV質(zhì)粒、帶有eGFP-Tag的pMSCV空載質(zhì)粒、GAG質(zhì)粒、VSV質(zhì)粒、Puromycin、Polybrene、Lipo3000、HEK293T細(xì)胞、opti-MEM、DMEM、FBS、雙抗、μm的濾膜、熒光顯微鏡等。步驟1、基因的構(gòu)建1)根據(jù)目的基因mRNA編碼區(qū)設(shè)計(jì)引物，分別在引物兩端加入酶切位點(diǎn)EcoRI和BglII。2)從細(xì)胞中提取目的基因mRNA，然后逆轉(zhuǎn)錄成cDNA，然后從cDNA里面用引物把目的基...

|基因組DNA擴(kuò)增|RNA擴(kuò)增|克隆與表達(dá)克隆基因|克隆試劑盒|克隆篩選|感受態(tài)細(xì)胞|突變轉(zhuǎn)染|轉(zhuǎn)化|體外轉(zhuǎn)錄/翻譯|其它表達(dá)分析Northern印跡分析|分支DNA和mRNA定量|差別基因表達(dá)|反義寡核苷酸|RACE試劑盒|SAGE試劑盒|其它抗體蛋白A,GPLUS|抑制/凋亡抗體|信號分子抗體結(jié)構(gòu)蛋白抗體|磷酸化特異抗體|融合蛋白tag抗體非哺乳動物蛋白抗體|細(xì)胞周期蛋白抗體|轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)蛋白抗體|抗體制備佐劑|抗體片段|抗體同種型|抗體純化|抗體制備試劑盒|其它第二抗體westernblot二抗|免疫組化二抗|其它試劑盒ELISA試劑盒|免疫組化試劑盒|放射免疫試劑盒|western...

科手術(shù)設(shè)備|細(xì)胞/組織支持系統(tǒng)|膜片鉗|輔助設(shè)備|其它常用耗材燒杯|漏斗|量筒|廣口罐|研缽和研杵|手套|移液管|移液器(Pipette)單道手動移液器|單道電動移液器|多道手動移液器多道電動移液器|正置換移液器|瓶口分液器吸頭(Tips)濾芯吸頭(滅菌)|濾芯吸頭(未滅菌)|普通吸頭(滅菌)普通吸頭(未滅菌)|多道移液器吸頭液體工作站吸頭|其它瓶(Bottle)離心瓶|稱量瓶|存儲瓶|比重瓶|血清瓶|滴瓶吸氣瓶|細(xì)胞培養(yǎng)瓶|培養(yǎng)基瓶|其它瓶(Flask)藍(lán)蓋瓶|燒瓶|平底燒瓶|克氏(長頸)燒瓶|碘測定燒瓶|蒸餾燒瓶|容量瓶|過濾瓶|其它管(Tube&Vial)離心管|微離心管|樣品儲...

應(yīng)根據(jù)所檢測指標(biāo)的要求，需采取不同策略處理。在如今分子學(xué)當(dāng)?shù)赖默F(xiàn)實(shí)背景下，動物實(shí)驗(yàn)除了對實(shí)驗(yàn)動物的體征及生理指標(biāo)進(jìn)行全的監(jiān)控外，各種分子檢測甚至是組學(xué)檢測也開始大行其道，動物實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后的機(jī)制研究成為了實(shí)驗(yàn)的重頭戲。一般來說，動物實(shí)驗(yàn)檢測對象主要包括：（1）體液中各類因子定性及定量檢測由于此類檢測對象多為蛋白及各類小分子物質(zhì)，因此在取樣過程中應(yīng)注意防止此類物質(zhì)降解，在獲取后，應(yīng)及時(shí)置于溫（≤-80℃）進(jìn)行保存，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)過程中，也應(yīng)當(dāng)注意保存條件的穩(wěn)定性，避免反復(fù)凍融。常用的方法便是酶聯(lián)免吸附測定（ELISA），除此之外，可利用生化分析儀及不同檢測方法的（比色法、比濁法等）方法對各類生...

原理HE染色主要使用蘇木精和伊紅這兩種染液，其中蘇木精堿性染液為藍(lán)色，可以將組織的酸性結(jié)構(gòu)染成藍(lán)紫色（細(xì)胞核呈現(xiàn)藍(lán)色；軟骨基質(zhì)、鈣鹽顆粒呈深藍(lán)；粘液呈灰藍(lán)）；伊紅是一種化學(xué)合成的酸性染料，在水中解離成帶負(fù)電荷的陰離子，易于蛋白質(zhì)氨基中的正電荷結(jié)合使細(xì)胞漿染色。細(xì)胞漿、肌肉、結(jié)締組織、嗜伊紅顆粒等被染成不同程度的紅色或粉紅色。材料與儀器小鼠、固定液、酒精、二甲苯、石蠟、蜂蠟蘇木精染液、伊紅酒精溶液、鹽酸酒精溶液甘油蛋白粘片劑、中性樹膠石蠟包埋機(jī)、切片機(jī)、恒溫箱、蠟杯酒精燈、解剖剪、培養(yǎng)皿、鑷子、單面刀片染色缸、蓋玻片、載玻片、玻片盤、顯微鏡溫度計(jì)、水浴鍋步驟一、制作卵巢石蠟切片1、取材小...

采用opti-MEM和Lipo3000分別轉(zhuǎn)染含有目的基因的pMSCV-eGFP、VSV、GAG質(zhì)粒及對照載體，每皿加入脂質(zhì)體-質(zhì)粒轉(zhuǎn)染混懸液按購買脂質(zhì)體相關(guān)說明書操作定量。繼續(xù)培養(yǎng)24h。2)24小時(shí)后，將培養(yǎng)基更換為新鮮的DMEM完全培養(yǎng)基，放進(jìn)細(xì)胞培養(yǎng)箱繼續(xù)培養(yǎng)48~72h。3)48~72h后收集上層培養(yǎng)液，并過μm濾膜，采用ELISA法對所獲得的慢載體進(jìn)行滴度測定。如不及時(shí)使用可以凍存于-80℃。3、慢轉(zhuǎn)染1)轉(zhuǎn)染前1天將細(xì)胞接種6孔培養(yǎng)板，時(shí)細(xì)胞的融合率約為50%，前需換液，加入1mLDMEM完全培養(yǎng)基。2)冰浴融化后加入相應(yīng)體積的液及聚凝胺（Polybrene），混勻后放入...

如胰腺，一般取胰島較多的胰腺尾部；肺應(yīng)取有細(xì)支氣管及帶有軟骨片的小支氣管部。如果實(shí)驗(yàn)需進(jìn)行多樣本的采集，采集順序應(yīng)按照：消化，神經(jīng)系統(tǒng)，皮膚，肌肉等的順序進(jìn)行。選好塊的切面。熟悉某些成分安排，然后決定其切面的走向；如一長管狀以橫切面較好。切除不需要的部分。特別是周圍的脂肪等，應(yīng)盡可能掉，否則給固定、脫水、浸蠟、切片等帶來一些不必要的問題。樣品的固定（1）固定的方法：①小塊固定法：從動物取下的小塊，立即置入液態(tài)固定劑（這是應(yīng)用經(jīng)常的方法）。②注射/灌注固定法：某些塊由于體積過大或固定液極難滲入內(nèi)部或需要對整個(gè)臟器或整個(gè)動物進(jìn)行固定，這時(shí)宜采用注射固定法，將固定液注入血管，經(jīng)血管分支到達(dá)整...

用一次定量放血法可擺分之?dāng)[造成出血性休克，擺分之?dāng)[死亡，這就符合可重復(fù)性和達(dá)到了標(biāo)準(zhǔn)化要求。(三)可靠性復(fù)制的動物模型應(yīng)該力求可靠地反映人類疾病，即可特異地、可靠地反映某種疾病或某種功能、代謝、結(jié)構(gòu)變化，應(yīng)具備該種疾病的主要癥狀和體征，經(jīng)化驗(yàn)或X線照片、心電圖、病理切片等證實(shí)。若易自發(fā)地出現(xiàn)某些相應(yīng)病變的動物，就不應(yīng)加以選用，易產(chǎn)生與復(fù)制疾病相混淆的疾病者也不宜選用。(四)適用性和可控性供醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)研究用的動物模型，在復(fù)制時(shí)，應(yīng)盡量考慮到今后臨床應(yīng)用和便于控制其疾病的發(fā)展，以利于研究的開展。(五)易行性和經(jīng)濟(jì)性在復(fù)制動物模型時(shí)，所采用的方法應(yīng)盡量做到容易執(zhí)行和合乎經(jīng)濟(jì)條件原則。以上就是上...

建議按照2×106每孔的數(shù)量將293T細(xì)胞均勻鋪入。(2)第二天：在24小時(shí)之內(nèi)，觀察293T細(xì)胞的匯合度在90%~95%之間時(shí)，向其中加入DNA-脂質(zhì)體復(fù)合體，DNA-脂質(zhì)體復(fù)合體制備方法如下：a)輕輕混勻LipoMax，根據(jù)說明書加入相應(yīng)量于500μlOpti-MEM無血清培養(yǎng)基中，混合均勻并置于室溫5分鐘。b)在500μlOpti-MEM無血清培養(yǎng)基中稀釋DNA，總質(zhì)量為15μg按照載體質(zhì)粒:psPAX2:=4:3:1的比例加入DNA。c)將稀釋后的LipoMax和稀釋后的DNA輕輕混勻，常溫靜置20分鐘，形成DNA-LipoMax復(fù)合體。(3)將DNA-LipoMax復(fù)合體輕柔...

1.首要原則：細(xì)胞不重要情況下立即丟棄，培養(yǎng)箱滅菌，所用培養(yǎng)基也都要丟棄，器械等重新滅菌或拆用新的。2.細(xì)菌污染一般都救不回來了，發(fā)現(xiàn)的時(shí)候培養(yǎng)基一般都很渾濁且細(xì)胞都死了3.污染且細(xì)胞很重要時(shí)：遇到念球菌污染，且細(xì)胞為基因改造細(xì)胞，非常重要。如231貼壁乳腺細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)細(xì)胞周圍出現(xiàn)很小的串珠透亮圓點(diǎn)，非常像念球菌污染，此時(shí)細(xì)胞狀態(tài)尚可，且污染少。處理如下：用預(yù)熱或室溫PBS清洗3次，可適當(dāng)振搖，將污染沖洗下來。隨后加入10-20%雙抗到培養(yǎng)瓶，置于37度培養(yǎng)箱1h，之后再用PBS清洗三遍，直至視野下無可見污染。此時(shí)細(xì)胞也被沖下大部分，因此此方法只適用在細(xì)胞貼壁強(qiáng)，狀態(tài)好，密度高時(shí)使用。之...

m6A修飾圖譜構(gòu)建及作用機(jī)制：通過m6A甲基化測序（MeRIP-Seq,miCLIP）構(gòu)建疾病細(xì)胞模型或者發(fā)病組織的m6A修飾譜，分析m6A的motif,peaks數(shù)量及分布，Peak關(guān)聯(lián)基因的特征，聯(lián)合RNA-seq研究m6A甲基化與表達(dá)的關(guān)系。m6A研究思路方案一方案二研究案例1、.(IF=)為研究ALKBH5的m6A作用機(jī)制，作者利用芯片和m6A-seq篩選到膠質(zhì)瘤增殖相關(guān)的FOXM1，通過qPCR、WB、免疫熒光、核質(zhì)分離WB/qPCR、RIP和MeRIP等實(shí)驗(yàn)證明ALKBH5通過去甲基化調(diào)節(jié)FOXM1在GSCs中的表達(dá)。為研究ALKBH5對FOXM1的作用是否受其他因子的調(diào)節(jié)...

外泌體的抑制作用外泌體水平升高通常與不同類型的惡化相關(guān)，一些研究人員希望能通過降低外泌體到正常水平來防止不良預(yù)后。從這個(gè)角度出發(fā)，許多正在進(jìn)行的研究旨在通過調(diào)節(jié)外泌體生成分泌的過程或通過特異性靶向其成分抑制其與靶細(xì)胞的相互作用來調(diào)節(jié)外泌體的產(chǎn)生。如今我們對外泌體機(jī)制和不同生理和病理?xiàng)l件下的功能的理解呈指數(shù)級增長，雖然目前其生物學(xué)功能還未完全解析清楚，但研究者們在許多領(lǐng)域均已對其進(jìn)行了深入探索。外泌體不是廢物顆粒，而是細(xì)胞間通訊的關(guān)鍵介質(zhì)，作為宿主細(xì)胞的衛(wèi)星，外泌體包含大量的生物信息，其功能超出了初的預(yù)期，宿主細(xì)胞控制著外泌體的內(nèi)容物，從而改變了自己或其他細(xì)胞的命運(yùn)。其次，外泌體對的進(jìn)展...

用伊紅乙醇液對比染色1~3min。（4）將切片放入95%乙醇中洗去多余的紅色，然后放入無水乙醇中3~5min，吸干后將切片放入二甲苯Ⅰ、Ⅱ中各3~5min。3、觀察在鏡下可見卵巢呈扁橢圓形，表面為單層扁平上皮細(xì)胞或單層立方上皮，卵巢實(shí)質(zhì)分為皮質(zhì)和髓質(zhì)。可見上皮，原始卵泡和生長卵泡。卵巢組織中各發(fā)育階段卵泡及卵巢基質(zhì)的形態(tài)結(jié)構(gòu)清晰可見,細(xì)胞核呈藍(lán)紫色,細(xì)胞質(zhì)及間質(zhì)成分呈淺紅色,卵泡中卵母細(xì)胞、卵泡細(xì)胞、透明帶均清晰可見。注意事項(xiàng)1.取材注意事項(xiàng)（1）取材動作要迅速，不宜作太久的拖延以免組織細(xì)胞的成分、結(jié)構(gòu)等發(fā)生變化。（2）切片材料應(yīng)根據(jù)需要觀察的部位進(jìn)行選擇，盡可能不要損傷所需要的部分。...

外泌體的功能外泌體可能作為細(xì)胞之間物質(zhì)和信號通訊的途徑，不同的細(xì)胞通過分泌攜帶不同組分的外泌體實(shí)現(xiàn)細(xì)胞間通訊，這些外泌體被受體細(xì)胞吸收，通過物質(zhì)交換或釋放內(nèi)含物實(shí)現(xiàn)物質(zhì)和信號的交流。外泌體與受體細(xì)胞的信息交流可能通過以下4種途徑實(shí)現(xiàn):外泌體表面膜蛋白質(zhì)被目的細(xì)胞表面的受體識別，從而靶細(xì)胞;外泌體在蛋白酶作用下產(chǎn)生的表面膜蛋白質(zhì)碎片可作為目的細(xì)胞表面受體的配體;外泌體脂膜可以與目的細(xì)胞膜融合，將蛋白質(zhì)和RNA等內(nèi)容物釋放進(jìn)去，此類膜融合可能改變靶細(xì)胞的一些膜特性，例如脂質(zhì)和膜蛋白質(zhì)的密度及種類;目的細(xì)胞通過胞吞的形式攝入外泌體經(jīng)由以上幾種途徑，外泌體將其攜帶的生物信息運(yùn)輸?shù)街苓叞屑?xì)胞或經(jīng)...

中華文化促進(jìn)會文化創(chuàng)新與傳播委員會會長朱建聲、西安海棠學(xué)院院長馮居秦、西安交通大學(xué)人文學(xué)院EDP中心主任、中華風(fēng)采人物媒體社長王天保、西安市EMBA助企商會會長張西安、陜西省糖尿病協(xié)會副會長張麗、陜西省養(yǎng)生協(xié)會會長李靖、陜西省職業(yè)經(jīng)理人協(xié)會名譽(yù)會長劉志超、西藏鷹山科技集團(tuán)董事長張沛、西安天歌干細(xì)胞健康管理中心總經(jīng)理?xiàng)詈＼姾蛨F(tuán)隊(duì)及各行各業(yè)企業(yè)界朋友、受益者近200人參與了活動。西安天歌干細(xì)胞健康管理有限公司總經(jīng)理?xiàng)詈＼娊榻B了成立一年來的工作情況和未來的發(fā)展布局。隨后，天歌干細(xì)胞健康管理中心負(fù)責(zé)人分別同中華文化促進(jìn)會文化創(chuàng)新與傳播委員會會長朱建聲；西安市（EMBA助企商會）/西安市EMBA...

應(yīng)根據(jù)所檢測指標(biāo)的要求，需采取不同策略處理。在如今分子學(xué)當(dāng)?shù)赖默F(xiàn)實(shí)背景下，動物實(shí)驗(yàn)除了對實(shí)驗(yàn)動物的體征及生理指標(biāo)進(jìn)行全的監(jiān)控外，各種分子檢測甚至是組學(xué)檢測也開始大行其道，動物實(shí)驗(yàn)結(jié)束之后的機(jī)制研究成為了實(shí)驗(yàn)的重頭戲。一般來說，動物實(shí)驗(yàn)檢測對象主要包括：（1）體液中各類因子定性及定量檢測由于此類檢測對象多為蛋白及各類小分子物質(zhì)，因此在取樣過程中應(yīng)注意防止此類物質(zhì)降解，在獲取后，應(yīng)及時(shí)置于溫（≤-80℃）進(jìn)行保存，在后續(xù)實(shí)驗(yàn)過程中，也應(yīng)當(dāng)注意保存條件的穩(wěn)定性，避免反復(fù)凍融。常用的方法便是酶聯(lián)免吸附測定（ELISA），除此之外，可利用生化分析儀及不同檢測方法的（比色法、比濁法等）方法對各類生...

圖2MAZTER-Seq實(shí)驗(yàn)流程圖圖3MAZTER-MINE分析m6A示意圖接下來作者便是要驗(yàn)證這一新方法的可行性了。在酵母中敲除IME4的情況下，檢測到的剪切效率高于野生型（剪切效率高低m6A水平），m6A抗體富集后的樣品剪切效率也低于未富集的Input組。整體水平可靠，那檢測的特異性位點(diǎn)是否準(zhǔn)確呢？作者也將該方法檢測到的新甲基化位點(diǎn)使用放射標(biāo)記層析檢測，發(fā)現(xiàn)預(yù)測的位點(diǎn)準(zhǔn)確存在而且與剪切效率相符合。如圖5所示。而圖6中，作者則是與m6A抗體IP的方法進(jìn)行了比較，也證實(shí)了這一方法的可行性。圖5MAZTER-Seq檢測結(jié)果驗(yàn)證圖6MAZTER-Seq與m6A-Seq比較分析此外，后文中作...