磁珠法核酸提取過程中的常見誤區(qū)--某一種磁珠好，就應(yīng)該在所有試劑配方中使用效果都好磁珠的種類是多種多樣的，粒徑大小不同，分散性不同，磁響應(yīng)時(shí)間不同，包被基礎(chǔ)基質(zhì)不同，外層修飾官能團(tuán)不同，包被密度不同，官能團(tuán)臂長(zhǎng)不同，會(huì)導(dǎo)致磁珠特性千差萬別。所以不同磁珠所適應(yīng)的...

裂解效果不好？多加點(diǎn)裂解液。洗滌效果不好？多加點(diǎn)洗滌液。這是大家在使用核酸提取試劑盒時(shí)的慣性思維。但是對(duì)于磁珠法而言，每增加一部分液體體積，就減少了更多的磁珠碰撞幾率，而降低磁珠碰撞幾率，會(huì)導(dǎo)致吸附率的大幅度下降。所以很多時(shí)候，雖然增加裂解液和洗滌液確實(shí)能夠起...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的RCL復(fù)制型慢病毒/RCR復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)試劑盒的特點(diǎn)：①檢測(cè)試劑盒采用qRT-PCR原理，操作便捷，2-3小時(shí)可出結(jié)果。②試劑盒檢測(cè)體系經(jīng)過精心研發(fā)，可以阻止氣溶膠污染物在下一次的檢測(cè)反應(yīng)中產(chǎn)生擴(kuò)增，可以蕞大程度的減...

加標(biāo)回收率可用于評(píng)估核酸提取相關(guān)產(chǎn)品的性能，加標(biāo)回收包括空白加標(biāo)回收和樣品加標(biāo)回收?？瞻准訕?biāo)回收：在沒有被測(cè)物質(zhì)的空白樣品基質(zhì)中加入定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，按樣品的處理步驟分析，得到的結(jié)果與理論值的比值即為空白加標(biāo)回收率。樣品加標(biāo)回收：相同的樣品取兩份，其中一份加入定...

各國(guó)藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對(duì)生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)的要求：各國(guó)藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對(duì)生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA的態(tài)度謹(jǐn)慎且明確，要求各制藥企業(yè)建立詳細(xì)可行、靈敏度高的檢測(cè)方法，用于驗(yàn)證藥品的純化過程可以去除殘留DNA，并對(duì)終產(chǎn)品的產(chǎn)品放行嚴(yán)格把關(guān)，避免攜...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)了一款E.coli宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)試劑盒，采用qPCR-熒光探針法，在qPCR技術(shù)的基礎(chǔ)上利用熒光探針原理，定量檢測(cè)樣本中E.coli殘留DNA，簡(jiǎn)化qPCR反應(yīng)操作的反應(yīng)液配置時(shí)的操作步驟，檢測(cè)快速，專一性強(qiáng)，性...

為什么要做支原體檢測(cè)？支原體是蕞小和蕞簡(jiǎn)單的自我復(fù)制生命體。由于支原體體積?。?00nm），缺乏剛性的細(xì)胞壁，因此肉眼無法檢測(cè)到支原體，它們可以透過0.2μm的標(biāo)準(zhǔn)過濾膜，并對(duì)很多抗 生素都具有抵抗力。支原體污染是細(xì)胞培養(yǎng)中的一個(gè)主要問題，不止影響實(shí)驗(yàn)結(jié)果...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)過程中，qPCR反應(yīng)體系配制環(huán)節(jié)有哪些注意事項(xiàng)？①qPCR的整個(gè)操作要低溫環(huán)境進(jìn)行，防止模板的降解，試劑避免反復(fù)凍融。②配制反應(yīng)體系前試劑要充分混勻，除了模板外的反應(yīng)體系要統(tǒng)一配制，然后再分配至qPCR管中，配制的時(shí)候考慮到操作或耗材帶來...

E.coli宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)在mRNA藥物生產(chǎn)中的應(yīng)用。mRNA藥物的制備流程包括模板DNA制備、mRNA原液制備和成品制備，其中DNA原液的制備過程中，需借助大腸桿菌作為宿主細(xì)胞擴(kuò)增質(zhì)粒DNA，線性化的質(zhì)粒DNA作為體外轉(zhuǎn)錄（IVT）的模板，因此，模板...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)的重要性：眾所周知，通過細(xì)胞培養(yǎng)生產(chǎn)生物制品時(shí)，需要在下游工藝中去除所有的源于宿主細(xì)胞殘留的雜質(zhì)，如胞質(zhì)蛋白、基因及潛在病毒等。其中宿主細(xì)胞DNA殘留問題受到了制藥同行很大的關(guān)注。究其原因，在于生物制品中即便是微量地來源于宿主細(xì)胞的外源性...

《CAR-T細(xì)胞治 療產(chǎn)品質(zhì)量控制檢測(cè)研究及非臨床研究考慮要點(diǎn)》一文提到：目前RCR/RCL病毒檢測(cè)方法主要有指示細(xì)胞培養(yǎng)法、ELISA法(p24蛋白測(cè)定)、PCR/q-PCR法（通過psi-gag或VSV-G聚合酶鏈反應(yīng)）和轉(zhuǎn)錄酶活性測(cè)定法(PERT)...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒檢測(cè)試劑盒簡(jiǎn)介：RCR基因拷貝數(shù)檢測(cè)試劑盒適用于定量檢測(cè)逆轉(zhuǎn)錄病毒載體生產(chǎn)的細(xì)胞醫(yī)治產(chǎn)品和基因醫(yī)治產(chǎn)品中復(fù)制型逆轉(zhuǎn)錄病毒RCR，如生產(chǎn)病毒的細(xì)胞庫(kù)、終末細(xì)胞、病毒載體及CAR-T細(xì)胞等。采用熒光探針RT-P...

在進(jìn)行支原體檢測(cè)之前，進(jìn)行支原體核酸提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA，以便進(jìn)行后續(xù)的檢測(cè)和分析。以下是進(jìn)行支原體DNA提取的主要原因和目的：去除抑制物質(zhì)：某些樣品中可能含有對(duì)PCR或其他分子檢測(cè)方法有抑制作用的物質(zhì)，如酶抑制劑、有機(jī)溶劑等。支原...

南京正揚(yáng)CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)原理：試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定量檢測(cè)各種生物制品及藥品的中間品、半成品和成品中殘留的CHO宿主細(xì)胞DNA。PCR反應(yīng)過程中通過熒光標(biāo)記的特異性探針檢測(cè)PCR產(chǎn)物量，通過連續(xù)監(jiān)測(cè)反應(yīng)體系中熒光數(shù)值的變化，可即時(shí)反...

RCL復(fù)制型慢病毒檢測(cè)：鑒于RCL的潛在威脅，從慢病毒載體生產(chǎn)工藝的各個(gè)環(huán)節(jié)：主細(xì)胞庫(kù)(MCB)、工作細(xì)胞庫(kù)(WCB)、終末端細(xì)胞(EOPC)、慢病毒收獲液(UPB)、轉(zhuǎn)導(dǎo)細(xì)胞甚至CAR-T治 療病人的臨床樣本都需要進(jìn)行嚴(yán)格的質(zhì)控檢測(cè)來核實(shí)是否存在RCL，從...

核酸提取的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)：在核酸提取純化過程中，干擾物質(zhì)去除不充分和對(duì)目標(biāo)區(qū)域的損害是蕞大的風(fēng)險(xiǎn)。核酸的質(zhì)量、純度（在分離和提取程序之后）和濃度可以通過各種方法確定。紫外線吸收（OD）大多被使用/應(yīng)用，凝膠電泳也是如此，有時(shí)使用DNA/RNA插層染料進(jìn)行測(cè)量。紫外吸...

裂解效果不好？多加點(diǎn)裂解液。洗滌效果不好？多加點(diǎn)洗滌液。這是大家在使用核酸提取試劑盒時(shí)的慣性思維。但是對(duì)于磁珠法而言，每增加一部分液體體積，就減少了更多的磁珠碰撞幾率，而降低磁珠碰撞幾率，會(huì)導(dǎo)致吸附率的大幅度下降。所以很多時(shí)候，雖然增加裂解液和洗滌液確實(shí)能夠起...

用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞DNA殘留檢測(cè)時(shí)，哪些因素會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性和方法靈敏度存在較大影響？樣品核酸提取純化過程雜質(zhì)干擾的去除對(duì)qPCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)結(jié)果有著較大影響。樣品核酸提取純化操作步驟對(duì)DNA檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度影響較大，通常采用加樣回收試驗(yàn)...

用qPCR進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)時(shí)，哪些因素會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性和方法靈敏度存在較大影響？參考品DNA量值溯源及質(zhì)量保證：參考品DNA的量值準(zhǔn)確與否，直接關(guān)系到樣品檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確性，因此需制定完善的參考品量值溯源程序，確保結(jié)果準(zhǔn)確可靠。參考品DNA的質(zhì)量要求...

宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)：用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么？①如出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象：反應(yīng)管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發(fā)而造成。上機(jī)前確保管蓋密閉，反應(yīng)結(jié)束后查看八聯(lián)管或96孔板各管液面是否一致。與設(shè)備硬件相關(guān)，需咨詢硬...

日本藥典JPXVⅢ〈G3-14-170〉對(duì)NAT法支原體檢測(cè)產(chǎn)品有關(guān)性能驗(yàn)證的要求，包括檢測(cè)限（LOD）、專屬性、耐用性、可比性。其中對(duì)于耐用性的描述及要求如下：分析過程的耐用性是指方法參數(shù)有小的變動(dòng)時(shí)，測(cè)定結(jié)果不受其影響的能力，同時(shí)為在正常使用中表明其可靠性...

用qPCR進(jìn)行支原體檢測(cè)時(shí)，哪些因素會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性和方法靈敏度存在較大影響？①qPCR引物探針的序列特異性：為保證方法高靈敏度和檢出率，用于qPCR檢測(cè)的特異序列必須是存在于高度保守區(qū)域內(nèi)的穩(wěn)定序列，并且需要散布在基因組上，保證不會(huì)因工藝導(dǎo)致的殘留偏好而引...

用qPCR法進(jìn)行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線復(fù)孔間熒光信號(hào)值降低及復(fù)孔間擴(kuò)增曲線重復(fù)性差的原因可能是什么？復(fù)孔間部分曲線熒光信號(hào)值降低的現(xiàn)象比較常見，通常與反應(yīng)管內(nèi)存在氣泡相關(guān)，隨反應(yīng)溫度升高，氣泡破裂導(dǎo)致熒光信號(hào)值降低。上機(jī)前需仔細(xì)檢查反應(yīng)...

qPCR法支原體檢測(cè)的原理：PCR反應(yīng)過程中可通過加入熒光標(biāo)記的特異性探針檢測(cè)PCR產(chǎn)物生成的量。帶有一對(duì)熒光分子的探針與樣品中DNA通過堿基互補(bǔ)配對(duì)的原則進(jìn)行結(jié)合，隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行，Taq聚合酶合成DNA，同時(shí)沿5’-3’方向水解DNA探針，一對(duì)熒光分子...

用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線復(fù)孔間熒光信號(hào)值降低及復(fù)孔間擴(kuò)增曲線重復(fù)性差的原因可能是什么？復(fù)孔間部分曲線熒光信號(hào)值降低的現(xiàn)象比較常見，通常與反應(yīng)管內(nèi)存在氣泡相關(guān)，隨反應(yīng)溫度升高，氣泡破裂導(dǎo)致熒光信號(hào)值降低。上機(jī)前需仔細(xì)檢查反應(yīng)管內(nèi)是否...

復(fù)制型病毒/病毒載體回復(fù)突變（ReplicationCompetentVirus,RCV），可產(chǎn)生于病毒載體制造過程中的所有步驟當(dāng)中。并且，RCV感 染宿主細(xì)胞后能隨宿主細(xì)胞在培養(yǎng)液中增殖、擴(kuò)增對(duì)人體健康具有嚴(yán)重的隱患，是免疫細(xì)胞治 療類產(chǎn)品，如C...

用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線末尾起跳的原因可能是什么？①陰性質(zhì)控或無模板對(duì)照曲線末尾出現(xiàn)起跳情況，考慮環(huán)境存在污染所致，建議對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境做好控制，如使用低吸附帶濾芯qiang頭和低吸附ep管，保證實(shí)驗(yàn)分區(qū)（樣品處理區(qū)、試劑保存及配制區(qū)、...

各國(guó)藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對(duì)生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)的要求：各國(guó)藥品監(jiān)督管理機(jī)構(gòu)對(duì)生物制品中宿主細(xì)胞殘留DNA的態(tài)度謹(jǐn)慎且明確，要求各制藥企業(yè)建立詳細(xì)可行、靈敏度高的檢測(cè)方法，用于驗(yàn)證藥品的純化過程可以去除殘留DNA，并對(duì)終產(chǎn)品的產(chǎn)品放行嚴(yán)格把關(guān)，避免攜...

磁珠法核酸提取裂解液的作用原理：磁珠法核酸提取是以納米生物磁珠為載體的一種新型核酸提取技術(shù)，核酸分子可與磁珠表面的硅羥基發(fā)生特異性識(shí)別與結(jié)合，在外部磁場(chǎng)的作用下發(fā)生聚集或分散，徹底擺脫傳統(tǒng)核酸提取過程中離心、抽取上清液等手工操作流程，從而實(shí)現(xiàn)核酸的自動(dòng)化提取。...

qPCR法rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)產(chǎn)品的特點(diǎn)：①檢測(cè)靈敏度：qPCR法可以達(dá)到非常低的檢測(cè)靈敏度，這種高靈敏度可以有效地避免rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒對(duì)患者的潛在風(fēng)險(xiǎn)。②特異性：qPCR法的特異性非常高，通過選擇性擴(kuò)增和特異性引物的設(shè)計(jì)，可以排除其他污染...