為什么要做宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)?眾所周知，大部分生物制劑是不經(jīng)過胃腸道直接進(jìn)入體內(nèi)，所以除了生物活性外，相關(guān)部門對(duì)藥品中雜質(zhì)的含量要求非常嚴(yán)格。其中，宿主細(xì)胞殘留DNA因?yàn)榫哂刑貏e的潛在安全風(fēng)險(xiǎn)，一直是監(jiān)管機(jī)構(gòu)關(guān)注的重點(diǎn)。生物制品中的重組蛋白藥、抗體藥、疫苗...

實(shí)時(shí)熒光定量PCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)的原理和方法：實(shí)時(shí)熒光定量PCR是基于PCR擴(kuò)增時(shí)，在加入一對(duì)引物的同時(shí)加入一個(gè)特異性的熒光探針，產(chǎn)物的增加可以通過熒光信號(hào)指示，通過實(shí)時(shí)監(jiān)控PCR體系中的熒光信號(hào)，對(duì)樣本中初始模板進(jìn)行定量分析。實(shí)時(shí)熒光定量PCR...

用qPCR法進(jìn)行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線末尾起跳的原因可能是什么？①陰性質(zhì)控或無模板對(duì)照曲線末尾出現(xiàn)起跳情況，考慮環(huán)境存在污染所致，建議對(duì)實(shí)驗(yàn)環(huán)境做好控制，如使用低吸附帶濾芯搶頭和低吸附ep管，保證實(shí)驗(yàn)分區(qū)（樣品處理區(qū)、試劑保存及配制區(qū)、...

在進(jìn)行支原體檢測(cè)之前，對(duì)支原體DNA進(jìn)行提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA，以便進(jìn)行后續(xù)的檢測(cè)和分析。以下是進(jìn)行支原體DNA提取的主要原因和目的：去除抑制物質(zhì)：某些樣品中可能含有對(duì)PCR或其他分子檢測(cè)方法有抑制作用的物質(zhì)，如酶抑制劑、有機(jī)溶劑等。...

南京正揚(yáng)生科科技有限公司自主研發(fā)的支原體檢測(cè)試劑盒包括支原體DNA提取試劑盒（磁珠法）和支原體DNA檢測(cè)試劑盒（PCR-熒光探針法），支原體DNA檢測(cè)試劑盒利用Taqman熒光探針原理，定性檢測(cè)主細(xì)胞庫(kù)、工作細(xì)胞庫(kù)、病毒種子批以及臨床治 療用細(xì)胞中是否有...

實(shí)時(shí)熒光定量PCR法rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)試劑盒的操作流程包括病毒DNA提取、qPCR試劑配制、qPCR加樣及上機(jī)檢測(cè)、結(jié)果分析四個(gè)環(huán)節(jié)。病毒DNA提取包含樣品前處理、樣品裂解液消化、病毒DNA與磁珠結(jié)合、一次洗滌、二次洗滌、洗脫；qPCR試劑在配...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的宿主細(xì)胞殘留DNA提取試劑盒，應(yīng)用于各種類型生物制品的中間品、半成品、原液、終產(chǎn)品樣本中提取微量的宿主細(xì)胞DNA。試劑盒采用特別修飾的氧化硅納米磁性微球在獨(dú)特緩沖體系和外加磁場(chǎng)的作用下，可從復(fù)雜生物樣本中提取微量DNA并純...

體外培養(yǎng)環(huán)境中，細(xì)胞自身沒有抗污染的能力，即使培養(yǎng)基會(huì)添加抗 生素，抵抗污染的能力也很有限。常見的微生物污染為細(xì)菌、真 菌、支原體和病毒等，其中又以支原體污染蕞為普遍棘手。一旦污染了支原體的細(xì)胞將無法正常形成單克隆，而且細(xì)胞轉(zhuǎn)染過程容易死亡，細(xì)胞實(shí)驗(yàn)...

磁珠法核酸提取過程中的常見誤區(qū)--洗滌次數(shù)越多，洗滌效果越好提取得到的核酸雜質(zhì)過多時(shí)，使用者會(huì)考慮多進(jìn)行幾次洗滌，以得到更為純凈的核酸。增加洗滌次數(shù)確實(shí)有利于提純核酸，但考慮到每次洗滌都會(huì)損失一定量的核酸，且增加了核酸斷裂水解的可能性，所以一般來說洗滌次數(shù)控制...

目前實(shí)驗(yàn)室常用的支原體檢測(cè)方法有培養(yǎng)法、熒光指示細(xì)胞法、PCR法、掃描電子顯微鏡法，這些方法各有優(yōu)缺點(diǎn)。PCR法檢測(cè)支原體的方法蕞為快速、靈敏、取樣量少，既可做細(xì)胞本身，也可做細(xì)胞上清的檢測(cè)，同時(shí)可以檢測(cè)多種支原體的污染，是目前常用的檢測(cè)手段。PCR法是20世...

裂解效果不好？多加點(diǎn)裂解液。洗滌效果不好？多加點(diǎn)洗滌液。這是大家在使用核酸提取試劑盒時(shí)的慣性思維。但是對(duì)于磁珠法而言，每增加一部分液體體積，就減少了更多的磁珠碰撞幾率，而降低磁珠碰撞幾率，會(huì)導(dǎo)致吸附率的大幅度下降。所以很多時(shí)候，雖然增加裂解液和洗滌液確實(shí)能夠起...

在進(jìn)行支原體檢測(cè)之前，進(jìn)行支原體核酸提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA，以便進(jìn)行后續(xù)的檢測(cè)和分析。支原體是一類細(xì)小的細(xì)菌樣微生物，其基因組含有DNA。通過對(duì)支原體DNA的提取，可以獲得純凈的DNA樣本，有助于準(zhǔn)確、敏感地檢測(cè)支原體的存在和進(jìn)行進(jìn)一...

在進(jìn)行支原體檢測(cè)之前，對(duì)支原體DNA進(jìn)行提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA，以便進(jìn)行后續(xù)的檢測(cè)和分析。以下是進(jìn)行支原體DNA提取的主要原因和目的：去除抑制物質(zhì)：某些樣品中可能含有對(duì)PCR或其他分子檢測(cè)方法有抑制作用的物質(zhì)，如酶抑制劑、有機(jī)溶劑等。...

隨著疫 情相關(guān)信息的傳播，許多先前不為大眾所知的診斷行業(yè)專業(yè)名詞逐漸變得家喻戶曉，如核酸檢測(cè)、試劑盒、咽拭子、假陰性等等。我們?cè)谶M(jìn)行核酸檢測(cè)的時(shí)候，通常需要在檢測(cè)之前經(jīng)歷核酸提取這一步驟，簡(jiǎn)單來說就是將病毒的核酸從我們采集的樣本當(dāng)中提取出來，以用于后續(xù)實(shí)...

用qPCR進(jìn)行rcAAV復(fù)制型腺相關(guān)病毒檢測(cè)時(shí)，哪些因素會(huì)對(duì)檢測(cè)結(jié)果準(zhǔn)確性和方法靈敏度存在較大影響？前處理過程雜質(zhì)干擾的去除對(duì)qPCR法宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)結(jié)果有著較大影響。樣品的前處理操作步驟對(duì)DNA檢測(cè)結(jié)果的準(zhǔn)確度影響較大，通常采用加樣回收試驗(yàn)來進(jìn)行驗(yàn)證...

美國(guó)藥典USP40〈1223〉對(duì)NAT法支原體檢測(cè)產(chǎn)品有關(guān)性能驗(yàn)證的要求，包括專屬性、檢測(cè)限（LOD）、耐用性、重現(xiàn)性。其中對(duì)于定量限（LOD）的定義及驗(yàn)證方法如下：一種備用微生物方法的檢測(cè)限(LOD)定義為在規(guī)定的實(shí)驗(yàn)條件下，在規(guī)定體積的樣品中可以檢測(cè)但不一...

qPCR法支原體檢測(cè)試劑盒的操作流程包括支原體DNA提取、qPCR試劑配制、qPCR加樣及上機(jī)檢測(cè)、結(jié)果分析四個(gè)環(huán)節(jié)。支原體DNA提取包含樣品前處理（離心分離上清等）、樣品裂解液消化、支原體DNA與磁珠結(jié)合、一次洗滌、二次洗滌、洗脫；qPCR試劑在配制時(shí)需先將...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的全自動(dòng)核酸提取儀的優(yōu)點(diǎn)：①操作簡(jiǎn)單：只需2步手工操作；②快速提?。褐恍?6min即可完成樣品微量核酸的提取純化；③精確控溫：提高裂解和洗脫效率，避免系統(tǒng)誤差；④穩(wěn)定可靠：避免人工操作引起的差異及錯(cuò)誤，結(jié)果穩(wěn)定，重復(fù)性好；⑤...

南京正揚(yáng)生物科技有限公司自主研發(fā)生產(chǎn)的宿主細(xì)胞殘留核酸提取試劑盒（磁珠法）有哪些操作注意事項(xiàng)？①洗滌液A/洗滌液B在第 一次使用時(shí)需按照試劑瓶上的標(biāo)識(shí)加入指定量的異丙醇；②磁珠懸浮液不可冷凍、高速離心、長(zhǎng)時(shí)間離心，會(huì)導(dǎo)致磁珠與核酸的結(jié)合能力下降，導(dǎo)致回...

隨著疫 情相關(guān)信息的傳播，許多先前不為大眾所知的診斷行業(yè)專業(yè)名詞逐漸變得家喻戶曉，如核酸檢測(cè)、試劑盒、咽拭子、假陰性等等。我們?cè)谶M(jìn)行核酸檢測(cè)的時(shí)候，通常需要在檢測(cè)之前經(jīng)歷核酸提取這一步驟，簡(jiǎn)單來說就是將病毒的核酸從我們采集的樣本當(dāng)中提取出來，以用于后續(xù)實(shí)...

生物檢測(cè)通常用于篩選載體產(chǎn)品中的RCR，而對(duì)輸注后患者的監(jiān)測(cè)則依賴于分子或血清學(xué)檢測(cè)。分子和血清學(xué)檢測(cè)比生物檢測(cè)更快，消耗的資源更少；然而，它們也很容易給出誤報(bào)。蕞常用的RCR病毒檢測(cè)是擴(kuò)展的S+/L-測(cè)定和標(biāo)記拯救測(cè)定。蕞常見的RCL生物測(cè)定方法是通過在增殖...

核酸提取時(shí)，加標(biāo)回收率的定義及注意事項(xiàng)：加標(biāo)回收率是指在測(cè)定樣品的同時(shí),于同一樣品的子樣中加入一定量的標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)進(jìn)行測(cè)定,將其測(cè)定結(jié)果扣除樣品的測(cè)定值,以計(jì)算回收率。加標(biāo)回收設(shè)置的注意事項(xiàng)：①同一樣品的子樣取樣體積必須相等;②各類子樣的測(cè)定過程必須按相同的操作步...

在進(jìn)行支原體檢測(cè)之前，進(jìn)行支原體核酸提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA，以便進(jìn)行后續(xù)的檢測(cè)和分析。以下是進(jìn)行支原體DNA提取的主要原因和目的：分離支原體DNA：樣品中可能存在多種細(xì)菌、真 菌和病毒等其他生物體的DNA。通過提取支原體DNA，...

用qPCR法進(jìn)行支原體檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增曲線異常的可能原因是什么？①如出現(xiàn)非特異性擴(kuò)增現(xiàn)象，該問題是由反應(yīng)管未蓋緊或密閉性差引起溶液蒸發(fā)而造成。上機(jī)前確保管蓋密閉，反應(yīng)結(jié)束后查看八聯(lián)管或96孔板各管液面是否一致。與設(shè)備硬件相關(guān)，需咨詢硬件供應(yīng)商解決。②如出現(xiàn)擴(kuò)增...

基因治 療產(chǎn)品是近年來國(guó)內(nèi)外藥物研發(fā)的熱點(diǎn)，通常由各種病毒或非病毒載體攜帶治 療基因組成。在病毒載體中，慢病毒載體(LVs)由于其有效的將基因整合進(jìn)靶細(xì)胞基因組、穩(wěn)定的基因表達(dá)等特點(diǎn)，被認(rèn)為是蕞有希望的基因治 療載體?？紤]到慢病毒對(duì)人的病原性及相關(guān)的安全...

用qPCR法進(jìn)行宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)時(shí)，出現(xiàn)擴(kuò)增效率超出標(biāo)準(zhǔn)要求（低于83.3%或高于110%）的原因有哪些？①設(shè)計(jì)的引物探針不適用：重新分析靶標(biāo)序列進(jìn)行設(shè)計(jì)。②標(biāo)曲濃度設(shè)定太高，超出標(biāo)曲線性范圍：對(duì)范圍進(jìn)行驗(yàn)證，選取合適標(biāo)曲范圍。③人員操作問題，如稀釋錯(cuò)誤...

在進(jìn)行支原體檢測(cè)之前，進(jìn)行支原體核酸提取的目的是為了從樣品中純化和富集支原體的DNA，以便進(jìn)行后續(xù)的檢測(cè)和分析。以下是進(jìn)行支原體DNA提取的主要原因和目的：分離支原體DNA：樣品中可能存在多種細(xì)菌、真 菌和病毒等其他生物體的DNA。通過提取支原體DNA，...

qPCR法支原體檢測(cè)試劑盒的操作流程包括支原體DNA提取、qPCR試劑配制、qPCR加樣及上機(jī)檢測(cè)、結(jié)果分析四個(gè)環(huán)節(jié)。支原體DNA提取包含樣品前處理（離心分離上清等）、樣品裂解液消化、支原體DNA與磁珠結(jié)合、一次洗滌、二次洗滌、洗脫；qPCR試劑在配制時(shí)需先將...

《中國(guó)藥典》2020版已收載三種方法用于外源性宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)，其中較為常用方法的為qPCR技術(shù)，該方法不僅可準(zhǔn)確定量，且靈敏度較高可達(dá)到fg級(jí)，很大提高檢測(cè)的準(zhǔn)確性。但因其需精密和昂貴的qPCR儀、相關(guān)檢測(cè)試劑盒價(jià)格較高，較難在基層及偏遠(yuǎn)地區(qū)實(shí)施，且其...

CHO宿主細(xì)胞殘留DNA檢測(cè)常見問題：①檢測(cè)靈敏度：qPCR法可以達(dá)到非常低的檢測(cè)靈敏度，通?？梢詸z測(cè)到1個(gè)CHO細(xì)胞殘留DNA分子。這種高靈敏度可以有效地避免生物制品中CHO細(xì)胞殘留DNA對(duì)患者的潛在風(fēng)險(xiǎn)。②特異性：qPCR法的特異性非常高，可以準(zhǔn)確區(qū)分CH...