由于設(shè)計的sgRNA會與非靶點DNA序列錯配，引入非預(yù)期的基因突變，即脫靶效應(yīng)(Off-targeteffects)。脫靶效應(yīng)造成了研究中的許多不確定性，這無疑限制了該技術(shù)的應(yīng)用。因此，研究者希望能開發(fā)有效的方法來檢測脫靶效應(yīng)。在目前主流的脫靶效應(yīng)評估方法中，...

長期隨訪的觀察時間長期隨訪的持續(xù)時間應(yīng)確保足以觀察到受試者因產(chǎn)品特性、暴露情況（生物分布和給藥途徑）等導(dǎo)致的風險，應(yīng)不短于遲發(fā)性不良反應(yīng)的預(yù)期發(fā)生時間。一般而言，針對不同類型的基因zhiliao產(chǎn)品建議如下：?具有基因組整合活性的載體（例如γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病...

如果免疫細胞zhiliao產(chǎn)品擬與其他藥物或zhiliao方法聯(lián)合zhiliao，有必要通過探索性試驗觀察聯(lián)合zhiliao的安全和耐受性，以及其他藥物或zhiliao方法對免疫細胞zhiliao產(chǎn)品體內(nèi)活性、增殖或存活、給藥頻率等的影響。如果免疫細胞zhil...

如果iPS細胞設(shè)計了機制以降低致瘤風險，應(yīng)在體內(nèi)試驗中確認/驗證此類機制的功能重編程可能會誘導(dǎo)細胞的表觀遺傳學(xué)改變，其后果尚不完全清楚。為評估iPS細胞衍生細胞的表觀遺傳學(xué)改變所引起的潛在異常特征，應(yīng)采用體外和/或體內(nèi)非臨床研究來闡明細胞具有適當?shù)男袨楹蜕砉?..

長期隨訪獲得的臨床經(jīng)驗以及基因組整合位點分析方法的明顯改進，都有助于更好地理解整合性基因zhiliao載體相關(guān)風險。很多能夠介導(dǎo)外源基因轉(zhuǎn)入細胞核的載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、轉(zhuǎn)座子元件和基因編輯產(chǎn)品等）有基因組整合潛力，需要通過長期隨訪觀察遲發(fā)性不良反應(yīng)的風險；...

CIRCLE-seq和CHANGE-seq與SITE-seq同期發(fā)表的CIRCLE-seq一定程度上解決了SITE-seq的一些問題。CIRCLE-seq的第一步是將純化后的基因組DNA隨機打斷成300bp左右的片段，然后首尾相連成環(huán)狀DNA，這種方法很好地避...

在國家藥典委員會公布的《人用基因制品總論》（草案）的3.1條款中，特別指出：“應(yīng)檢測重組載體基因組或質(zhì)粒的完整性和均一性，載體和zhiliao序列的遺傳穩(wěn)定性”；“對于病毒載體，適當情況下應(yīng)測定插入位點，并充分評估插入突變的可能性和相關(guān)風險”。對此，可分別采用...

生殖毒性基因zhiliao產(chǎn)品應(yīng)根據(jù)受試物的產(chǎn)品類型、作用機制、一般毒理發(fā)現(xiàn)、生物分布特征以及患者人群來評估潛在的生殖/發(fā)育毒性風險。生殖毒性試驗的研究策略和風險評估可參考ICHS5（R3）的建議和ICHM3（R2）、S6及S9中的相關(guān)內(nèi)容。通常需要開展胚胎-...

新型CAR/TCR T細胞臨床產(chǎn)品中載體拷貝數(shù)的定量—數(shù)字PCR法。基因工程T細胞已經(jīng)成為zhiliaoB細胞惡性的重要方法。CAR-T細胞的常見應(yīng)用是zhiliao過表達細胞外標記物的B細胞惡性?；蚬こ蘐細胞已經(jīng)成為zhiliaoB細胞惡性的重要方法。CA...

γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體（RetroviralVector）：早期臨床試驗曾發(fā)現(xiàn)，逆轉(zhuǎn)錄病毒對造血干細胞進行基因改造回輸人體后誘導(dǎo)了的發(fā)生。目前對逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的臨床使用安全性仍在探索中，建議謹慎使用γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒載體進行分裂活躍的干細胞類產(chǎn)品的基因編輯。慢病毒載體...

插入突變風險評估一些整合性載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒、慢病毒、轉(zhuǎn)座子）可將外源基因插入整合到細胞基因組中，這可能會導(dǎo)致關(guān)鍵基因突變或jihuo原基因，從而導(dǎo)致惡性liu風險增加。影響插入突變的關(guān)鍵風險因素包括：（1）載體的整合特征，如插入位點的偏好性；（2）載體的設(shè)計...

目前鼓潤已掌握了該項技術(shù)，簡述如下：1、CRISPR與dsODNtag整合的實驗技術(shù)及高通量測序建庫流程將靶向于目標基因組位點的CRISPR質(zhì)粒與dsODNtag以核電轉(zhuǎn)的方式同時轉(zhuǎn)染入真核細胞，CRISPR造成基因組雙鏈斷裂后，dsODNtag將整合入斷點處...

先導(dǎo)編輯器：CBE和ABE組合使用可以有效地進行4種堿基轉(zhuǎn)換（C→T, G→A, A→G, T→C），而無需產(chǎn)生DSB，然而除了這4種堿基轉(zhuǎn)換，對另外8種堿基轉(zhuǎn)換（C→A, C→G, G→C, G→T, A→C, A→T, T→A, T→G）以及堿基的插入和缺...

在國家藥典委員會公布的《人用基因制品總論》（草案）的3.1條款中，特別指出：“應(yīng)檢測重組載體基因組或質(zhì)粒的完整性和均一性，載體和zhiliao序列的遺傳穩(wěn)定性”；“對于病毒載體，適當情況下應(yīng)測定插入位點，并充分評估插入突變的可能性和相關(guān)風險”。對此，可分別采用...

流式檢測CAR+T細胞數(shù)量，較，作者用FC流式評估了用axis-cel和tisasa-celzhiliao的患者的CAR+T細胞的數(shù)量。在CAR-T細胞給藥后5個不同時間點冷凍的PBMCs上對UPN#009(軸細胞)和UPN#020(組織細胞)進行了回顧性FC...

如果基因組整合相關(guān)風險的分析可行，應(yīng)注意以下幾點：?在接受基因zhiliao產(chǎn)品的較初5年內(nèi)，兩次檢測間的采樣間隔建議不超過6個月。此后每年至少檢測一次，直至檢測數(shù)據(jù)表明不再存在任何安全性風險。檢測方法的敏感度、特異性和可重復(fù)性應(yīng)經(jīng)過驗證，并設(shè)計適當?shù)年栃院完?..

全基因組測序是對重組細胞的基因組DNA進行深度測序，技術(shù)成熟簡單這里不做介紹了，我們分享一下LM-PCR結(jié)合二代測序的檢測方法。LM-PCR全稱連接介導(dǎo)的PCR。將含有慢病毒插入的基因組進行隨機打斷并連接接頭，然后通過兩輪PCR富集含有慢病毒LTR-宿主區(qū)域的...

gRNA的長度和錯配： 17個核苷酸長度的gRNA顯示出更高的基因組編輯效率。相比之下，18-20 bp的長度顯示出較低的基因組編輯效率。在人類細胞中減少潛在脫靶效應(yīng)的指導(dǎo)方針：1) 應(yīng)避免在PAM的7-10 bp范圍內(nèi)靶序列有超過3個錯配；2) 在PAM的1...

當基因zhiliao產(chǎn)品在生殖qiguan持續(xù)存在時，需要進一步研究確定其在生殖細胞（例如卵母細胞、精子）的暴露水平。根據(jù)載體類型、復(fù)制能力、基因組整合特性、劑量水平、給藥途徑等因素，分析評估基因zhiliao產(chǎn)品生殖系整合風險。遺傳毒性，基因zhiliao產(chǎn)...

高拷貝質(zhì)粒我們可以多提一點質(zhì)粒，低拷貝數(shù)的質(zhì)粒有什么作用呢？確實，低拷貝數(shù)的質(zhì)粒用途不是十分廣闊，主要用于以下兩點：高拷貝數(shù)的質(zhì)粒往往不穩(wěn)定，進行大片段克隆或者帶有毒性DNA克隆時會用低拷貝；質(zhì)粒的擴增會占用大量資源，當載體用于表達或者其他用途時，也會使用上低...

長期隨訪的觀察時間長期隨訪的持續(xù)時間應(yīng)確保足以觀察到受試者因產(chǎn)品特性、暴露情況（生物分布和給藥途徑）等導(dǎo)致的風險，應(yīng)不短于遲發(fā)性不良反應(yīng)的預(yù)期發(fā)生時間。一般而言，針對不同類型的基因zhiliao產(chǎn)品建議如下：?具有基因組整合活性的載體（例如γ-逆轉(zhuǎn)錄病毒和慢病...

質(zhì)粒的接合轉(zhuǎn)移與穿梭質(zhì)粒質(zhì)粒的接合轉(zhuǎn)移：是細菌遺傳物質(zhì)轉(zhuǎn)移的一個重要方式。在質(zhì)粒轉(zhuǎn)移過程中，供體菌和受體菌通過結(jié)合作用緊密接觸，質(zhì)粒從供體細胞向受體轉(zhuǎn)移，同時進行質(zhì)粒復(fù)制。按能否自主轉(zhuǎn)移，可以將天然存在的質(zhì)粒分為轉(zhuǎn)移型質(zhì)粒和非轉(zhuǎn)移型質(zhì)粒兩大類。這里要注意的是，...

安全性說明包括藥物重要的已確認風險，重要的潛在風險和重要的缺失信息。CAR-T細胞zhiliao產(chǎn)品安全性風險較高，應(yīng)在產(chǎn)品整個研發(fā)過程中持續(xù)進行風險識別，以預(yù)防和降低風險。根據(jù)CAR-T細胞zhiliao產(chǎn)品特點、作用靶點和作用機制，其安全性風險可能包括：T...

由于設(shè)計的sgRNA會與非靶點DNA序列錯配，引入非預(yù)期的基因突變，即脫靶效應(yīng)(Off-targeteffects)。脫靶效應(yīng)造成了研究中的許多不確定性，這無疑限制了該技術(shù)的應(yīng)用。因此，研究者希望能開發(fā)有效的方法來檢測脫靶效應(yīng)。在目前主流的脫靶效應(yīng)評估方法中，...

使用CRISPR/Cas9、ZFNs和TALENs等設(shè)計核酸酶進行基因組編輯，可以將遺傳物質(zhì)定向?qū)氩溉閯游锘蚪M的特定位點。然而，可能會出現(xiàn)非預(yù)期的靶上和靶外基因組修飾，這可能導(dǎo)致基因組不穩(wěn)定，并破壞正?；虻墓δ?，從而可能導(dǎo)致臨床前和臨床研究中的安全問題。...

安全性說明包括藥物重要的已確認風險，重要的潛在風險和重要的缺失信息。CAR-T細胞zhiliao產(chǎn)品安全性風險較高，應(yīng)在產(chǎn)品整個研發(fā)過程中持續(xù)進行風險識別，以預(yù)防和降低風險。根據(jù)CAR-T細胞zhiliao產(chǎn)品特點、作用靶點和作用機制，其安全性風險可能包括：T...

改進Cas變體使用SpCas9和SaCas9 變體：已研發(fā)出諸如SpCas9-Nickase、dCas9 、dCas9–FokI、xCas9、Cas9-NG、evoCas9、SpCas9 – HFI、eSpCas9和Hypa-Cas9等多種Cas變體，可降低脫...

長期表達。與其他產(chǎn)品相比，部分基因zhiliao產(chǎn)品的明顯特征是可以在患者靶細胞或基因修飾細胞中持續(xù)存在并編碼表達作用因子（功能性蛋白或基因表達調(diào)節(jié)元件），并通過長久或長期改變靶細胞或組織的功能來達到zhiliao效果。同時，由于基因zhiliao編碼的作用因...

高拷貝質(zhì)粒我們可以多提一點質(zhì)粒，低拷貝數(shù)的質(zhì)粒有什么作用呢？確實，低拷貝數(shù)的質(zhì)粒用途不是十分廣闊，主要用于以下兩點：高拷貝數(shù)的質(zhì)粒往往不穩(wěn)定，進行大片段克隆或者帶有毒性DNA克隆時會用低拷貝；質(zhì)粒的擴增會占用大量資源，當載體用于表達或者其他用途時，也會使用上低...

國內(nèi)外基因zhiliao產(chǎn)品開展的非臨床研究、長期隨訪獲得的臨床經(jīng)驗以及基因組整合位點分析方法的明顯改進，都有助于更好地理解整合性基因zhiliao載體相關(guān)風險。通常認為，很多能夠介導(dǎo)外源基因轉(zhuǎn)入細胞核的載體（如逆轉(zhuǎn)錄病毒載體、轉(zhuǎn)座子元件和基因編輯產(chǎn)品等）有基...