在難轉(zhuǎn)染細(xì)胞(原代大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞)轉(zhuǎn)染效率的比較圖片由芝加哥大學(xué)肺和重癥護(hù)理系的NickolaiDulin博士友情提供制備大鼠的動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞并用使用LipoD293?試劑(左圖)和Lipofecatmine2000(L2K,右圖)分別將GFP的cDNA(pEGFP-N3)按照生產(chǎn)制造商的轉(zhuǎn)染操作步轉(zhuǎn)染至該細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測(cè)GFP熒光,以此來(lái)評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染效率。對(duì)難轉(zhuǎn)染細(xì)胞LNCap細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較圖片由羅斯威爾公園**研究所(RoswellCancerInstitute)的LynGao博士友情提供賽默飛提供了多種高質(zhì)量的轉(zhuǎn)染產(chǎn)品,適用于各種細(xì)...
.在多種不同類(lèi)型細(xì)胞中基因敲除效率超過(guò)90%。高靈活應(yīng)用,同一試劑可用于siRNA和質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染的基因沉默實(shí)驗(yàn)。細(xì)胞毒性低,結(jié)果相關(guān)性好,確保所觀察到的細(xì)胞效應(yīng)是由轉(zhuǎn)染的siRNA而非轉(zhuǎn)染過(guò)程本身介導(dǎo)。兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,轉(zhuǎn)染前后均無(wú)需換液(如無(wú)血清培養(yǎng)基)。X-tremeGENEsiRNATransfectionReagent用于4種細(xì)胞系的HPRT基因沉默實(shí)驗(yàn)。根據(jù)各試劑說(shuō)明書(shū)建議的操作流程,或標(biāo)準(zhǔn)實(shí)驗(yàn)方法,將100nMHPRT特異性siRNA轉(zhuǎn)染至4種細(xì)胞,通過(guò)LightCycler?h-HPRTHousekeepingGeneSet的熒光定量法評(píng)估基因沉默效率。結(jié)果顯示用羅氏這...
將膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(3105)接種至6孔板中,然后使用riboFECTCP轉(zhuǎn)染試劑分別將5μl20μMBMPER、CXCL10和HOXA9siRNA轉(zhuǎn)染進(jìn)膠質(zhì)瘤干細(xì)胞(DP3321、DP7857)中,48h后,qRT-PCR和westernblots檢測(cè)siRNA***效率。結(jié)果發(fā)現(xiàn)DP3321中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達(dá)水平分別為46.32%、49.71%和43.64%,DP7857中的siBMPER、siCXCL10和siHOXA9表達(dá)水平分別為53.21%、47.46%和46.31%。將1.25μlTREM-1siRNA(20μm)和3μlriboFECTTMCP...
LNCap細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代嚴(yán)格由ATCC建議的操作步驟進(jìn)行,與pBabe-hygro-SSeCKs(1.5ug)和pEGFP-N3(1:1,共1.0微克)共轉(zhuǎn)染(6孔板中每孔的量),并用LipoD293?試劑(左圖)和FugeneHD(右圖)分別按照生產(chǎn)制造商的科學(xué)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測(cè)GFP熒光,以此來(lái)評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染效率。在血清和***的存在下,HepG2和SaoS-2細(xì)胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分別轉(zhuǎn)染達(dá)到95%的細(xì)胞融合。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,分別通過(guò)Zeiss510激光共聚焦顯微鏡和β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測(cè)效率。賽...
圖5.Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的siRNA在單次靜脈注射后可在肝臟中引起劑量反應(yīng)的敲低現(xiàn)象。Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA以0.02到2mg/kg的劑量進(jìn)行注射。隨后分離血清并檢測(cè)FVII蛋白的水平(Biophen顯色檢測(cè))。持續(xù)敲低能力在單次注射后可觀察到更長(zhǎng)的敲低時(shí)間圖6.使用三種不同濃度的靶向FactorVII(FVII)的siRNA研究劑量效應(yīng)。siRNA分子與Invivofectamine3.0試劑形成復(fù)合物后分別以1、0.5、及0.25mg/kg的劑量進(jìn)行注射。在第2、5、9、16、23及30...
在難轉(zhuǎn)染細(xì)胞(原代大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞)轉(zhuǎn)染效率的比較圖片由芝加哥大學(xué)肺和重癥護(hù)理系的NickolaiDulin博士友情提供制備大鼠的動(dòng)脈平滑肌原代細(xì)胞并用使用LipoD293?試劑(左圖)和Lipofecatmine2000(L2K,右圖)分別將GFP的cDNA(pEGFP-N3)按照生產(chǎn)制造商的轉(zhuǎn)染操作步轉(zhuǎn)染至該細(xì)胞。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測(cè)GFP熒光,以此來(lái)評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染效率。對(duì)難轉(zhuǎn)染細(xì)胞LNCap細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較在難轉(zhuǎn)染細(xì)胞(原代大鼠動(dòng)脈平滑肌細(xì)胞)轉(zhuǎn)染效率的比較圖片由羅斯威爾公園**研究所(RoswellCancerInstitute)siRNA脫靶效應(yīng)會(huì)...
原代細(xì)胞直接分離自組織并在適當(dāng)條件下增殖。因此,它們的形態(tài)學(xué)和生理特征和體內(nèi)狀態(tài)更為相似。但相對(duì)于連續(xù)細(xì)胞系,它們通常更難培養(yǎng)和轉(zhuǎn)染。在經(jīng)過(guò)***次傳代培養(yǎng)之后,原代培養(yǎng)物變成了一種細(xì)胞系。源自于原代培養(yǎng)物的細(xì)胞系具有有限的壽命(即它們是有限細(xì)胞系),且隨著傳代的進(jìn)行,具有比較高的生長(zhǎng)能力的細(xì)胞逐漸占據(jù)支配地位,從而造成了細(xì)胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。相對(duì)來(lái)說(shuō),這一類(lèi)細(xì)胞要比原代細(xì)胞使用起來(lái)更為方便,尤其是穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的克隆傳代...驚艷登場(chǎng)!臨床級(jí)載體生產(chǎn)必備轉(zhuǎn)染試劑。上海陽(yáng)離子聚合物轉(zhuǎn)染試劑配制圖3.用于轉(zhuǎn)染的Invivofectamine3.0試劑及RNAi復(fù)合物非常容易獲得:只需簡(jiǎn)...
胞因素用低代數(shù)的細(xì)胞293T細(xì)胞非常重要??!當(dāng)然也要保證細(xì)胞狀態(tài)特別好,沒(méi)有細(xì)微污染,鋪板均勻。飽滿狀態(tài)好的細(xì)胞才可以產(chǎn)生較高滴度的***哦!載體系統(tǒng)在實(shí)驗(yàn)中**常見(jiàn)的慢***載體系統(tǒng)有三質(zhì)粒系統(tǒng)、四質(zhì)粒系統(tǒng),當(dāng)然使用三質(zhì)粒系統(tǒng)的小伙伴居多,一定要選擇成熟商業(yè)化的載體系統(tǒng)!載體構(gòu)建和質(zhì)粒抽提純化我們要注意是否構(gòu)建時(shí)導(dǎo)致質(zhì)粒載體重組或某個(gè)部件缺失,或污染別的質(zhì)粒、雜物?中抽純化是否污染?要養(yǎng)成同時(shí)做陰性對(duì)照的習(xí)慣:建議目的基因載體和陰性對(duì)照GFP載體是同一批,且建議每次包裝都如此操作,要保證目的基因的表達(dá)載體構(gòu)建純化良好,質(zhì)粒間比例得當(dāng),并且對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行酶切驗(yàn)證.在經(jīng)過(guò)***次傳代培養(yǎng)之后,原代培...
轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,使用尼康熒光顯微鏡GFP熒光進(jìn)行成像(左側(cè)四幅圖),A:LipoD293;B:293fectin;C:Xfect和D:Fugene6.帶有6xHis標(biāo)記的GFP熒光蛋白使用Ni-NTA親和柱技術(shù)實(shí)現(xiàn)分離。5微升洗脫液載入SDS-PAGE凝膠電泳分離并進(jìn)行Coomassie亮藍(lán)染色(右上圖E),道1為L(zhǎng)ipoD293293、道2為標(biāo)準(zhǔn)蛋白分子、道3為Xfect、道4為293fectin和道5為Fugene6。這四種轉(zhuǎn)染試劑產(chǎn)生蛋白質(zhì)的效率被進(jìn)一步定量(見(jiàn)右下圖F)。產(chǎn)生慢***的比較通過(guò)LipoD293?試劑(升級(jí)版)和LipofectamineLTX(LTX)試劑將三個(gè)cDNA...
羅氏X-TremeGENE便是新一代轉(zhuǎn)染試劑的佼佼者,升級(jí)版的多組分混合試劑,兼具極高轉(zhuǎn)染效率和極低細(xì)胞毒性,在超過(guò)350株真核細(xì)胞株中獲得了高效轉(zhuǎn)染的驗(yàn)證,尤其針對(duì)難轉(zhuǎn)染細(xì)胞株亦有出色表現(xiàn)。兩種試劑對(duì)CHO-K1細(xì)胞轉(zhuǎn)染帶GFP標(biāo)記的質(zhì)粒,A和C是轉(zhuǎn)染后熒光顯微圖,B和D是明場(chǎng)顯微圖.與競(jìng)爭(zhēng)產(chǎn)品比較,X-tremeGENEHP表現(xiàn)出更優(yōu)的轉(zhuǎn)染效率更低的細(xì)胞毒性不同試劑在含血清的培養(yǎng)基中對(duì)四種很難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞株進(jìn)行轉(zhuǎn)染,X-tremeGENEHP試劑遠(yuǎn)優(yōu)于其他試劑超過(guò)350種細(xì)胞株的高效轉(zhuǎn)染驗(yàn)證還有一個(gè)好消息X-TremeGENE轉(zhuǎn)染試劑正在進(jìn)行8折促銷(xiāo)哦快去搶購(gòu)吧~默克自2015年成為羅氏生化...
圖3.用于轉(zhuǎn)染的Invivofectamine3.0試劑及RNAi復(fù)合物非常容易獲得:只需簡(jiǎn)單地混合,并進(jìn)行孵育(30min)、稀釋、及注射即可。高效、靶向敲低在實(shí)驗(yàn)靶標(biāo)中可觀察到高達(dá)85%的敲低效果圖4.使用Invivofectamine3.0試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實(shí)現(xiàn)靶向敲低。Invivofectamine3.0試劑與靶向FactorVII(FVII)或PPIBmRNA的siRNA組成的復(fù)合物,以每千克小鼠體重1mg(mg/kg)的注射量進(jìn)行注射,**終靶向mRNA水平出現(xiàn)了高達(dá)85%的敲低(使用TaqMan分析對(duì)敲低進(jìn)行評(píng)估)。將EntransterTM-R4000稀釋液和a...
siRNA,加入HiperFect轉(zhuǎn)染試劑混勻并溫育5-10min,將混合物逐滴加入培養(yǎng)皿中混勻,培養(yǎng)細(xì)胞直到適當(dāng)?shù)臅r(shí)候檢測(cè)基因沉默效果。這個(gè)快速操作流程簡(jiǎn)便到還可以用于“反向轉(zhuǎn)染”,方便至極。當(dāng)然,習(xí)慣用傳統(tǒng)方法也是可以的,只要培養(yǎng)到細(xì)胞匯合度50%—80%進(jìn)行轉(zhuǎn)染就可以了。沒(méi)有禁用血清、***的困擾,HiperFect真的是將實(shí)驗(yàn)簡(jiǎn)化到了***。適合多種細(xì)胞類(lèi)型:HiPerfect可高效轉(zhuǎn)染多種細(xì)胞類(lèi)型,包括HeLa、HeLaS3、HEK293、NIH/3T3、Huh-7、HepG2、MCF-7、HUVEC和NHLF等。對(duì)于原代細(xì)胞,產(chǎn)品手冊(cè)中列出了轉(zhuǎn)染原代HUVEC、成纖維細(xì)胞、角質(zhì)細(xì)胞...
細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡(jiǎn)介:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類(lèi)多組份試劑,溶于80%乙醇中,經(jīng)0.2μm濾膜過(guò)濾,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細(xì)胞分析的多種實(shí)驗(yàn)。優(yōu)勢(shì):1.具有細(xì)胞毒性極低、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞存活率高,生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)。2.操作簡(jiǎn)便、節(jié)省時(shí)間,只需對(duì)X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行簡(jiǎn)單稀釋?zhuān)倥c質(zhì)粒DNA共同孵育,即可直接向細(xì)胞添加反應(yīng)混合物(有無(wú)血清均可)。3.對(duì)于常用細(xì)胞無(wú)需進(jìn)行費(fèi)時(shí)費(fèi)力的優(yōu)化從而造成了細(xì)胞群內(nèi)的基因型和表型接近一致的情形。上海國(guó)產(chǎn)轉(zhuǎn)染試劑分裝對(duì)CHO細(xì)胞轉(zhuǎn)染效率的比較右圖:使用以上...
簡(jiǎn)介:X-tremeGENEHPDNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無(wú)動(dòng)物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑,兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,可用于轉(zhuǎn)染各類(lèi)真核細(xì)胞(包括昆蟲(chóng)細(xì)胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。優(yōu)勢(shì):1.簡(jiǎn)單易用的多組分混合試劑,無(wú)動(dòng)物源性成分,室溫穩(wěn)定。2.高轉(zhuǎn)染效率,對(duì)于原代細(xì)胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的**細(xì)胞系有高轉(zhuǎn)染效率。3.使用細(xì)胞毒性低的試劑,結(jié)果相關(guān)性好。圖2.X-tremeGENEHP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能。通過(guò)X-tremeGENEHP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實(shí)驗(yàn)后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細(xì)胞毒性遠(yuǎn)高...
十全十美難,十全九美卻可以通過(guò)選擇一款好的轉(zhuǎn)染試劑來(lái)實(shí)現(xiàn)。理想的轉(zhuǎn)染試劑包括要具有較高的轉(zhuǎn)染效率,細(xì)胞毒性低,操作簡(jiǎn)單可重復(fù),價(jià)格還要可愛(ài)?,F(xiàn)在大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室用的是脂質(zhì)體系列轉(zhuǎn)染試劑,但脂質(zhì)體對(duì)細(xì)胞毒性大,某些細(xì)胞的轉(zhuǎn)染效率還很低,看單孔的價(jià)格也很不美好。尤其是在轉(zhuǎn)染RNA方面,脂質(zhì)體的劣勢(shì)較明顯。QIAGEN在轉(zhuǎn)染試劑領(lǐng)域的研發(fā)思路與其核酸純化領(lǐng)域的精而專(zhuān),全而深不同。在轉(zhuǎn)染試劑的研發(fā)過(guò)程中,另辟蹊徑,研精致思進(jìn)而做到小而美的轉(zhuǎn)染產(chǎn)品。從市面上眾多轉(zhuǎn)染試劑的一片紅海中,神奇的開(kāi)辟出一塊藍(lán)海,為客戶烹制出了幾款高效、快速、低毒又親民的轉(zhuǎn)染試劑私房菜。隨后分離血清并檢測(cè)FVII蛋白的水平(Biop...
產(chǎn)生慢***的比較通過(guò)LipoD293?試劑(升級(jí)版)和LipofectamineLTX(LTX)試劑將三個(gè)cDNAs共轉(zhuǎn)染進(jìn)293T細(xì)胞。一個(gè)GFP載體,pHR-SIN-cppt-CMVEWP被用來(lái)測(cè)定慢***的滴度。在24孔板中每孔加入1x10^5293T細(xì)胞,其次是分別添加不同量的慢定都上清液,1微升(上圖)和10微升(下圖)。5天后,細(xì)胞通過(guò)流式細(xì)胞儀檢測(cè)。右上角的數(shù)字表明轉(zhuǎn)導(dǎo)的細(xì)胞的百分比來(lái)測(cè)定慢***的滴度。由LipoD293?andLTX產(chǎn)生的慢***的滴度被量化,分為是8x10^6和3x10^6tu/ml。將EntransterTM-R4000稀釋液和agomir稀釋液充分混合...
簡(jiǎn)介:X-tremeGENEHPDNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無(wú)動(dòng)物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑,兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,可用于轉(zhuǎn)染各類(lèi)真核細(xì)胞(包括昆蟲(chóng)細(xì)胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。優(yōu)勢(shì):1.簡(jiǎn)單易用的多組分混合試劑,無(wú)動(dòng)物源性成分,室溫穩(wěn)定。2.高轉(zhuǎn)染效率,對(duì)于原代細(xì)胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的**細(xì)胞系有高轉(zhuǎn)染效率。3.使用細(xì)胞毒性低的試劑,結(jié)果相關(guān)性好.圖2.X-tremeGENEHP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能。通過(guò)X-tremeGENEHP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實(shí)驗(yàn)后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細(xì)胞毒性遠(yuǎn)高...
圖3.用于轉(zhuǎn)染的Invivofectamine3.0試劑及RNAi復(fù)合物非常容易獲得:只需簡(jiǎn)單地混合,并進(jìn)行孵育(30min)、稀釋、及注射即可。高效、靶向敲低在實(shí)驗(yàn)靶標(biāo)中可觀察到高達(dá)85%的敲低效果圖4.使用Invivofectamine3.0試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實(shí)現(xiàn)靶向敲低。Invivofectamine3.0試劑與靶向FactorVII(FVII)或PPIBmRNA的siRNA組成的復(fù)合物,以每千克小鼠體重1mg(mg/kg)的注射量進(jìn)行注射,**終靶向mRNA水平出現(xiàn)了高達(dá)85%的敲低(使用TaqMan分析對(duì)敲低進(jìn)行評(píng)估)。連續(xù)細(xì)胞系具有無(wú)限增殖的潛能,通常要比原代或有限...
LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):高轉(zhuǎn)染效率,適用于多種細(xì)胞系對(duì)細(xì)胞毒性低適用于DNA和RNA的轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染前無(wú)需去除細(xì)胞培養(yǎng)基或血清轉(zhuǎn)染后無(wú)需清洗細(xì)胞或更換培養(yǎng)基轉(zhuǎn)染效率高,適用于多種細(xì)胞系圖1.LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑以綠色熒光蛋白(GFP)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染幾種常見(jiàn)細(xì)胞系,通過(guò)檢測(cè)GFP信號(hào)比較轉(zhuǎn)染效率。細(xì)胞毒性低圖2.LipoFectMax?,LipoFectamine?2000及LipoFectamine?3000分別對(duì)A549細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作,通過(guò)計(jì)算轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞存活率比較細(xì)胞毒性。研發(fā)合成的針對(duì)siRNA、microRNA、mimic...
LipofectamineRNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑是先進(jìn)、高效的siRNA輸送解決方案。目前尚無(wú)其他siRNA轉(zhuǎn)染試劑能夠在***的細(xì)胞系中(包括常見(jiàn)細(xì)胞類(lèi)型、干細(xì)胞、原代細(xì)胞以及歷來(lái)難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞類(lèi)型)提供如此簡(jiǎn)便、高效的siRNA輸送效果。高效可在低siRNA濃度下獲得優(yōu)良的轉(zhuǎn)染效果相對(duì)于其他的siRNA轉(zhuǎn)染試劑,LipofectamineRNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑可以獲得更佳的基因***效果。同在10nM和1nMp53siRNA下,LipofectamineRNAiMAX轉(zhuǎn)染試劑實(shí)現(xiàn)了更高的有效***細(xì)胞/未轉(zhuǎn)染細(xì)胞比率,超過(guò)其他RNAi試劑。連續(xù)細(xì)胞系具有無(wú)限增殖的潛能,通常要比原代或有限細(xì)胞...
細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡(jiǎn)介:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類(lèi)多組份試劑,溶于80%乙醇中,經(jīng)0.2μm濾膜過(guò)濾,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細(xì)胞分析的多種實(shí)驗(yàn)。優(yōu)勢(shì):1.具有細(xì)胞毒性極低、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞存活率高,生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)。2.操作簡(jiǎn)便、節(jié)省時(shí)間,只需對(duì)X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行簡(jiǎn)單稀釋?zhuān)倥c質(zhì)粒DNA共同孵育,即可直接向細(xì)胞添加反應(yīng)混合物(有無(wú)血清均可)。3.對(duì)于常用細(xì)胞無(wú)需進(jìn)行費(fèi)時(shí)費(fèi)力的優(yōu)化工作。將20μL轉(zhuǎn)染復(fù)合物加入孔中的細(xì)胞懸液中,前后移動(dòng)培養(yǎng)皿,混合均勻;上海昆蟲(chóng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑作用確定希望輸...
美國(guó)Polysciences公司是一家成立于1961年,致力于特殊技精細(xì)化學(xué)試劑、實(shí)驗(yàn)室產(chǎn)品,單/多聚體等產(chǎn)品的研發(fā)供應(yīng),所提供的產(chǎn)品服務(wù)于組織學(xué)(顯微技術(shù))、生物技術(shù)、電子技術(shù)、護(hù)理及制藥工程等多個(gè)領(lǐng)域。起初為電子顯微鏡提供納米級(jí)樣本制備方案,幫助科學(xué)家揭示未知領(lǐng)域。隨后,開(kāi)拓了在病理(組織研究)應(yīng)用產(chǎn)品,使組織除了石蠟包埋外,還能夠包埋在塑料塊中;開(kāi)發(fā)染料和染色劑,以實(shí)現(xiàn)更好的樣品觀測(cè)方式。與****合作,開(kāi)發(fā)了用于診斷試劑盒應(yīng)的聚合物微球。與美國(guó)國(guó)家**中心合作,開(kāi)發(fā)天然產(chǎn)物分離和純化產(chǎn)品,并用于紫杉醇的初步臨床試驗(yàn)。繼而開(kāi)發(fā)出超順磁珠,用于DNA、蛋白質(zhì)和肽的研究。原代細(xì)胞直接分離自組...
簡(jiǎn)介:X-tremeGENEHPDNA轉(zhuǎn)染試劑是一種高效的無(wú)動(dòng)物源成分的低毒轉(zhuǎn)染試劑,兼容含血清或不含血清的培養(yǎng)基,可用于轉(zhuǎn)染各類(lèi)真核細(xì)胞(包括昆蟲(chóng)細(xì)胞)以及多種難轉(zhuǎn)染細(xì)胞系。優(yōu)勢(shì):1.簡(jiǎn)單易用的多組分混合試劑,無(wú)動(dòng)物源性成分,室溫穩(wěn)定。2.高轉(zhuǎn)染效率,對(duì)于原代細(xì)胞和使用其它試劑難轉(zhuǎn)染的**細(xì)胞系有高轉(zhuǎn)染效率。3.使用細(xì)胞毒性低的試劑,結(jié)果相關(guān)性好。圖2.X-tremeGENEHP高效低毒的轉(zhuǎn)染性能。通過(guò)X-tremeGENEHP和脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法將GFP表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染至CHO-K1。A和C圖的熒光視野顯示了實(shí)驗(yàn)后兩種方法均獲得了成功轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。但B和D圖的明亮視野表明脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染方法的細(xì)胞毒性遠(yuǎn)高...
圖7.對(duì)注射了Invivofectamine3.0試劑的小鼠樣品進(jìn)行血液化學(xué)分析。將Invivofectamine3.0試劑與靶向FVII的AmbioninvivosiRNA的復(fù)合物分別以1mg/kg[1],3mg/kg[3],或未處理[U]的劑量注射入小鼠體內(nèi)。在注射后2、24及48小時(shí)收集血液樣品,并通過(guò)臨床化學(xué)檢測(cè)方法對(duì)數(shù)個(gè)生物標(biāo)志物(Antech)進(jìn)行評(píng)估。結(jié)果表明在使用Invivofectamine3.0試劑進(jìn)行轉(zhuǎn)染的每個(gè)個(gè)體間所檢測(cè)的生物標(biāo)志物的水平與未注射該試劑的個(gè)體相比并沒(méi)有***差異。除了以上兩種于siRNA的轉(zhuǎn)染試劑,還有通用型轉(zhuǎn)染試劑Lipofectamine?2000,...
胞因素用低代數(shù)的細(xì)胞293T細(xì)胞非常重要?。‘?dāng)然也要保證細(xì)胞狀態(tài)特別好,沒(méi)有細(xì)微污染,鋪板均勻。飽滿狀態(tài)好的細(xì)胞才可以產(chǎn)生較高滴度的***哦!載體系統(tǒng)在實(shí)驗(yàn)中**常見(jiàn)的慢***載體系統(tǒng)有三質(zhì)粒系統(tǒng)、四質(zhì)粒系統(tǒng),當(dāng)然使用三質(zhì)粒系統(tǒng)的小伙伴居多,一定要選擇成熟商業(yè)化的載體系統(tǒng)!載體構(gòu)建和質(zhì)粒抽提純化我們要注意是否構(gòu)建時(shí)導(dǎo)致質(zhì)粒載體重組或某個(gè)部件缺失,或污染別的質(zhì)粒、雜物?中抽純化是否污染?要養(yǎng)成同時(shí)做陰性對(duì)照的習(xí)慣:建議目的基因載體和陰性對(duì)照GFP載體是同一批,且建議每次包裝都如此操作,要保證目的基因的表達(dá)載體構(gòu)建純化良好,質(zhì)粒間比例得當(dāng),并且對(duì)質(zhì)粒進(jìn)行酶切驗(yàn)證.試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中...
細(xì)胞轉(zhuǎn)染如果以上都沒(méi)有問(wèn)題,那么******重要的環(huán)節(jié)就是慢***質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞了,轉(zhuǎn)染效果直接影響著出毒效率,那么一款好的轉(zhuǎn)染試劑在此時(shí)就是至關(guān)重要了!在這里給大家推薦一款性?xún)r(jià)比超高的轉(zhuǎn)染試劑,美國(guó)Polysciences家的PEIMAX40K!PEIMAX40K(也稱(chēng)為游離堿PEI22K)是一種功能強(qiáng)大,值得信賴(lài)且經(jīng)濟(jì)高效的瞬時(shí)轉(zhuǎn)染試劑。在HEK293和CHO表達(dá)系統(tǒng)中,能在96孔板至100L生物反應(yīng)器范圍內(nèi)提供始終如一高效的基因表達(dá)。越來(lái)越多的研究人員和公司使用PEI來(lái)替代其他類(lèi)型轉(zhuǎn)染試劑,以獲得他們所需要的優(yōu)勢(shì)。相較于其他類(lèi)型轉(zhuǎn)染試劑,使用自行制備的PEI轉(zhuǎn)染試劑可以使總轉(zhuǎn)染成本...
LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑具有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):高轉(zhuǎn)染效率,適用于多種細(xì)胞系對(duì)細(xì)胞毒性低適用于DNA和RNA的轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染前無(wú)需去除細(xì)胞培養(yǎng)基或血清轉(zhuǎn)染后無(wú)需清洗細(xì)胞或更換培養(yǎng)基轉(zhuǎn)染效率高,適用于多種細(xì)胞系圖1.LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑以綠色熒光蛋白(GFP)表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染幾種常見(jiàn)細(xì)胞系,通過(guò)檢測(cè)GFP信號(hào)比較轉(zhuǎn)染效率。細(xì)胞毒性低圖2.LipoFectMax?,LipoFectamine?2000及LipoFectamine?3000分別對(duì)A549細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染操作,通過(guò)計(jì)算轉(zhuǎn)染后的細(xì)胞存活率比較細(xì)胞毒性。賽默飛提供了多種高質(zhì)量的轉(zhuǎn)染產(chǎn)品,適用于各種細(xì)胞類(lèi)型的...
用LipoFectMax?轉(zhuǎn)染Hela細(xì)胞,左圖轉(zhuǎn)染GFPcDNA,右圖共轉(zhuǎn)染GFPCDNA和GFP靶向siRNA。轉(zhuǎn)染siRNA后可以從右圖明顯看到基因沉默。4適用于神經(jīng)細(xì)胞的轉(zhuǎn)染圖4.用LipoFectMax?和LipoFectamine?2000分別對(duì)小鼠神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行轉(zhuǎn)染綠色熒光白蛋白(GFP),轉(zhuǎn)染24小時(shí)后觀察轉(zhuǎn)染效果,LipoFectMax?轉(zhuǎn)染效率(左圖)比LipoFectamine?2000(右圖)高5倍。LipoFectMax?轉(zhuǎn)染試劑轉(zhuǎn)染試劑操作流程細(xì)胞毒性低圖2.LipoFectMax?,LipoFectamine?2000及LipoFectamine?3000分別對(duì)A...
LNCap細(xì)胞的培養(yǎng)和傳代嚴(yán)格由ATCC建議的操作步驟進(jìn)行,與pBabe-hygro-SSeCKs(1.5ug)和pEGFP-N3(1:1,共1.0微克)共轉(zhuǎn)染(6孔板中每孔的量),并用LipoD293?試劑(左圖)和FugeneHD(右圖)分別按照生產(chǎn)制造商的科學(xué)實(shí)驗(yàn)步驟進(jìn)行轉(zhuǎn)染。轉(zhuǎn)染24小時(shí)后,用尼康Eclipse2000熒光顯微鏡檢測(cè)GFP熒光,以此來(lái)評(píng)價(jià)轉(zhuǎn)染效率。在血清和***的存在下,HepG2和SaoS-2細(xì)胞用pEGFP-N3和pSV-β-半乳糖苷酶DNAs分別轉(zhuǎn)染達(dá)到95%的細(xì)胞融合。轉(zhuǎn)染48小時(shí)后,分別通過(guò)Zeiss510激光共聚焦顯微鏡和β-半乳糖苷酶染色試劑盒檢測(cè)效率。轉(zhuǎn)...
細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑簡(jiǎn)介:X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑是脂質(zhì)和其它成分混合而得的一類(lèi)多組份試劑,溶于80%乙醇中,經(jīng)0.2μm濾膜過(guò)濾,然后封裝于玻璃小瓶中,適用于細(xì)胞分析的多種實(shí)驗(yàn)。優(yōu)勢(shì):1.具有細(xì)胞毒性極低、轉(zhuǎn)染后細(xì)胞存活率高,生成可信任的生理學(xué)相關(guān)數(shù)據(jù)。2.操作簡(jiǎn)便、節(jié)省時(shí)間,只需對(duì)X-tremeGENE9DNA轉(zhuǎn)染試劑進(jìn)行簡(jiǎn)單稀釋?zhuān)倥c質(zhì)粒DNA共同孵育,即可直接向細(xì)胞添加反應(yīng)混合物(有無(wú)血清均可)。3.對(duì)于常用細(xì)胞無(wú)需進(jìn)行費(fèi)時(shí)費(fèi)力的優(yōu)化試劑可在單次靜脈注射后即可在肝臟中實(shí)現(xiàn)靶向敲低。上海昆蟲(chóng)細(xì)胞轉(zhuǎn)染試劑報(bào)價(jià)細(xì)胞轉(zhuǎn)染過(guò)程X-tremeGENE9...