TaqMan熒光探針?lè)▋?yōu)點(diǎn)是操作簡(jiǎn)單，準(zhǔn)確性高（閉管進(jìn)行，減少污染），判讀也很方便，認(rèn)可度高；適合多樣本，少位點(diǎn)。但是其也有不可忽視的限制性，如探針合成耗時(shí)較長(zhǎng)，價(jià)格昂貴，為了保證探針的穩(wěn)定質(zhì)量，一般大家會(huì)選擇A公司合成。TaqMan熒光探針?lè)ㄒ话銥橹挥袔讉€(gè)位點(diǎn)時(shí)適用，并且對(duì)樣本的質(zhì)量要求較高，除了樣本無(wú)降解外，要需要濃度盡可能的一致。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司，地址：上海市松江區(qū)龍騰路1015弄中星創(chuàng)意園2號(hào)502SNP等位基因頻率的容易估計(jì)。蘇州STR/SSRSNP分型送樣要求
相信大家都聽過(guò)或已經(jīng)接觸過(guò)一些常用的分型方法，如片段長(zhǎng)度多態(tài)性（限制性內(nèi)切酶）法，直接測(cè)序法，Taqman熒光探針?lè)?，LDR連接酶檢測(cè)反應(yīng)法，競(jìng)爭(zhēng)性等位基因特異性PCR法（KASP），二代測(cè)序法等，小E就針對(duì)以上幾種常用分型方法為大家做一個(gè)介紹和總結(jié)。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限上海翼和專家團(tuán)隊(duì)富有開創(chuàng)精神，朝氣蓬勃，在肖君華博士的帶領(lǐng)下，秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神，為科研用戶提供性價(jià)比高、高質(zhì)量可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。蘇州微衛(wèi)星STRSNP分型報(bào)告SNP對(duì)于樣本量，我們是比較有優(yōu)勢(shì)的，人口基數(shù)大，有大量的病例資源。
這種熔解分析只能區(qū)分在片段大小和GC含量上差別較比較明顯的DNA序列，比如檢查PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中是否存在引物二聚體及其他非特異性的擴(kuò)增。如果要區(qū)分SNP，分辨率還不夠。為什么呢？這里有必要先介紹一下飽和染料和非飽和染料。SYBRGreenI就屬于非飽和性染料，由于它對(duì)PCR的抑制作用，在實(shí)驗(yàn)中的使用濃度很低，遠(yuǎn)未將DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中的小溝飽和。這樣，DNA雙鏈高溫變性時(shí)，單鏈部分的熒光染料分子發(fā)生重排，熒光染料分子重新結(jié)合到雙鏈DNA的空置位點(diǎn)，造成熒光信號(hào)沒(méi)有變化，因此出現(xiàn)假陰性，特異性下降。
TaqMan熒光探針是一種寡核苷酸探針，熒光基團(tuán)連接在探針的5’末端，而淬滅劑則在3’末端。在PCR反應(yīng)體系中加入2種不同熒光標(biāo)記的探針，它們可以分別與2個(gè)等位基因完全配對(duì)。正常情況下，由于探針5’端熒光基團(tuán)和3’端淬滅基團(tuán)緊鄰在一起，熒光被淬滅。隨著PCR有效的進(jìn)行，與模板完全配對(duì)的探針逐步被TaqDNA聚合酶5’——3’外切酶活性切割，致使探針5’端熒光基團(tuán)和3’端淬滅基團(tuán)分離，淬滅效應(yīng)解除，報(bào)告熒光基團(tuán)被，檢測(cè)到熒光信號(hào)，相反，如果模板不能完全配對(duì)的探針（另一種等位基因）不能被有效切割，因此檢測(cè)不到熒光信號(hào)，從而實(shí)現(xiàn)SNP位點(diǎn)的分型檢測(cè)。做為一種新的遺傳標(biāo)記,SNP對(duì)于疾病的預(yù)測(cè)、診斷能夠提供更加可靠的科學(xué)依據(jù),因此對(duì)其研究具有重要意義。
將待檢測(cè)片段（包含待測(cè)SNP位點(diǎn)）進(jìn)行PCR擴(kuò)增并直接進(jìn)行測(cè)序是SNP檢測(cè)方法中，準(zhǔn)確的一種，堪稱SNP分型的“金標(biāo)準(zhǔn)”。獲得測(cè)序峰圖，純和位點(diǎn)為單峰，而雜合位點(diǎn)則為套峰，因此通過(guò)查看測(cè)序峰圖很容易將基因型區(qū)分開來(lái)。直接測(cè)序法不僅可用于對(duì)已知位點(diǎn)的檢測(cè)，還可用于發(fā)現(xiàn)未知的SNP位點(diǎn)。直接測(cè)序法的優(yōu)點(diǎn)是結(jié)果準(zhǔn)確，能發(fā)現(xiàn)未知位點(diǎn)，但是其缺點(diǎn)是通量低，成本高。因此直接測(cè)序法適用于少位點(diǎn)，少樣本的分型規(guī)模，當(dāng)然土豪實(shí)驗(yàn)室除外！所以這種方法也很難在商業(yè)化大規(guī)模的分型實(shí)驗(yàn)中得到推廣。在經(jīng)濟(jì)作物育種領(lǐng)域，檢測(cè)SNP可實(shí)現(xiàn)對(duì)所需性狀的早期選擇。浙江STRSNP分型質(zhì)量好
主要特點(diǎn)是準(zhǔn)確性高、靈活性強(qiáng)、通量大，主要方法是TaqMan探針?lè)?。蘇州STR/SSRSNP分型送樣要求
連接酶檢測(cè)反應(yīng)(LigaseDetectionReaction，LDR)是利用高溫連接酶實(shí)現(xiàn)對(duì)基因多態(tài)性位點(diǎn)的識(shí)別，高溫連接酶一旦檢測(cè)到DNA與互補(bǔ)的兩條寡聚核苷酸接頭對(duì)應(yīng)處存在著基因點(diǎn)突變類型的堿基錯(cuò)配，連接反應(yīng)就不能進(jìn)行。該方法，對(duì)SNP位點(diǎn)同時(shí)設(shè)計(jì)兩條有長(zhǎng)度差異的探針，當(dāng)探針末端與模板有一個(gè)堿基不配對(duì)，所以連接反應(yīng)不能進(jìn)行，沒(méi)有連接產(chǎn)物；相反，若探針與模板DNA完全互補(bǔ)，故進(jìn)行連接反應(yīng)，通過(guò)溫控循環(huán)，該特異性連接反應(yīng)可反復(fù)進(jìn)行，達(dá)到線性擴(kuò)增的效果。，后通過(guò)熒光掃描片段長(zhǎng)度，實(shí)現(xiàn)對(duì)SNP位點(diǎn)的檢測(cè)。蘇州STR/SSRSNP分型送樣要求
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司致力于醫(yī)藥健康，是一家服務(wù)型公司。公司自成立以來(lái)，以質(zhì)量為發(fā)展，讓匠心彌散在每個(gè)細(xì)節(jié)，公司旗下細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控，大健康檢測(cè)，生物技術(shù)服務(wù)深受客戶的喜愛(ài)。公司秉持誠(chéng)信為本的經(jīng)營(yíng)理念，在醫(yī)藥健康深耕多年，以技術(shù)為先導(dǎo)，以自主產(chǎn)品為重點(diǎn)，發(fā)揮人才優(yōu)勢(shì)，打造醫(yī)藥健康良好品牌。在社會(huì)各界的鼎力支持下，持續(xù)創(chuàng)新，不斷鑄造高品質(zhì)服務(wù)體驗(yàn)，為客戶成功提供堅(jiān)實(shí)有力的支持。