競爭性等位基因特異性PCR法——KASP(KompetitiveAlleleSpecificPCR),是英國LGC(**化學(xué)家實驗室)公司所開發(fā)的技術(shù),被比較常見用于少位點,多樣本的SNP分型中,與TaqMan熒光探針法有一定相似性。KASP基于引物末端堿基的特異匹配來對SNP分型以及檢測InDels(Insertions and Deletions,插入和缺失)。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司,微信公眾號:上海翼和生物。 總公司地址位于:上海市松江區(qū)龍騰路1015弄中星創(chuàng)意園2號502、508 ,此外,無錫設(shè)有分公司多態(tài)性是一個群體概念,多態(tài)性指這個差異占群體的1%以上。否則就叫突變(小于1%)。山東SSR基因SNP分型送樣要求
3、SNP等位基因頻率的容易估計。采用混和樣本估算等位基因的頻率是種高效快速的策略。該策略的原理是:首先選擇參考樣本制作標(biāo)準(zhǔn)曲線,然后將待測的混和樣本與標(biāo)準(zhǔn)曲線進(jìn)行比較,根據(jù)所得信號的比例確定混和樣本中各種等位基因的頻率。4、易于基因分型。SNPs的二態(tài)性,也有利于對其進(jìn)行基因分型。對SNP進(jìn)行基因分型包括三方面的內(nèi)容:(1)鑒別基因型所采用的化學(xué)反應(yīng),常用的技術(shù)手段包括:DNA分子雜交、引物延伸、等位基因特異的寡核苷酸連接反應(yīng)、側(cè)翼探針切割反應(yīng)以及基于這些方法的變通技術(shù);(2)完成這些化學(xué)反應(yīng)所采用的模式,包括液相反應(yīng)、固相支持物上進(jìn)行的反應(yīng)以及二者皆有的反應(yīng)。(3)化學(xué)反應(yīng)結(jié)束后,需要應(yīng)用生物技術(shù)系統(tǒng)檢測反應(yīng)結(jié)果。蘇州STRSNP分型質(zhì)量好一次研究的SNP大概有十幾個到幾十個,這是比較早期的做法。
相比Taqman熒光探針法,KASP技術(shù)只要合成兩個通用熒光探針,兩個通用淬滅探針,通用熒光探針來代替針對位點的熒光探針,極大節(jié)約成本。同時配套SNPline基因分型儀器平臺,可以進(jìn)行高通量的SNP分型規(guī)模。該方法利用多重PCR技術(shù),同時捕獲數(shù)十上百個SNP位點,Barcode引物區(qū)分不同樣本,實現(xiàn)一次上機(jī)測序,完成多位點,大樣本的高通量分型實驗?zāi)康?。多重PCR特性,也極大降低了對樣本量的需求。上海翼和**團(tuán)隊富有開創(chuàng)精神,朝氣蓬勃,在肖君華博士的帶領(lǐng)下,秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神,為科研用戶提供性價比高、可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。
這種熔解分析只能區(qū)分在片段大小和GC含量上差別較比較明顯的DNA序列,比如檢查PCR擴(kuò)增產(chǎn)物中是否存在引物二聚體及其他非特異性的擴(kuò)增。如果要區(qū)分SNP,分辨率還不夠。為什么呢?這里有必要先介紹一下飽和染料和非飽和染料。SYBRGreenI就屬于非飽和性染料,由于它對PCR的抑制作用,在實驗中的使用濃度很低,遠(yuǎn)未將DNA雙螺旋結(jié)構(gòu)中的小溝飽和。這樣,DNA雙鏈高溫變性時,單鏈部分的熒光染料分子發(fā)生重排,熒光染料分子重新結(jié)合到雙鏈DNA的空置位點,造成熒光信號沒有變化,因此出現(xiàn)假陰性,特異性下降。由于SNP的二態(tài)性,非此即彼,在基因組篩選中SNPs往往只需+/-的分析這就利于發(fā)展自動化技術(shù)篩選或檢測SNPs.
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是一具有16年行業(yè)經(jīng)驗的專業(yè)遺傳學(xué)服務(wù)供應(yīng)商。公司的首席科學(xué)家為肖君華教授(東華大學(xué)生物科學(xué)與技術(shù)研究所教授;中國遺傳學(xué)會理事;上海市遺傳學(xué)會常務(wù)理事)。公司擁有兩大專業(yè)平臺:基于一代測序儀3730XL的PCR-LDRSNP分型平臺;基于多重PCR捕獲建庫技術(shù)的二代測序平臺。為順應(yīng)市場需求,公司在2019年開拓了個人基因檢測業(yè)務(wù)。目前已開展心血管個體化用藥相關(guān)基因的檢測,孕婦葉酸及鈣代謝兩項基因檢測業(yè)務(wù)。兩項基因檢測均基于翼和一代測序平臺的PCR-LDRSNP基因分型方法。SNP是多態(tài)性中的一種,只是進(jìn)一步限定了差異只是單堿基。北京微衛(wèi)星標(biāo)記strSNP分型報告
這種變異可能是轉(zhuǎn)換(C T,在其互補(bǔ)鏈上則為G A),也可能是顛換(C A,G T,C G,A T)。山東SSR基因SNP分型送樣要求
相信大家都聽過或已經(jīng)接觸過一些常用的分型方法,如片段長度多態(tài)性(限制性內(nèi)切酶)法,直接測序法,Taqman熒光探針法,LDR連接酶檢測反應(yīng)法,競爭性等位基因特異性PCR法(KASP),二代測序法等,小E就針對以上幾種常用分型方法為大家做一個介紹和總結(jié)。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限上海翼和**團(tuán)隊富有開創(chuàng)精神,朝氣蓬勃,在肖君華博士的帶領(lǐng)下,秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神,為科研用戶提供性價比高、高質(zhì)量可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。山東SSR基因SNP分型送樣要求
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司位于龍騰路1015弄中星創(chuàng)意園2號502,擁有一支專業(yè)的技術(shù)團(tuán)隊。專業(yè)的團(tuán)隊大多數(shù)員工都有多年工作經(jīng)驗,熟悉行業(yè)專業(yè)知識技能,致力于發(fā)展Biowing的品牌。公司以用心服務(wù)為重點價值,希望通過我們的專業(yè)水平和不懈努力,將第三方檢測服務(wù);生物專業(yè)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù);健康衰老評估;大健康檢測;遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù);生物醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)控檢測技術(shù)技術(shù)服務(wù);小鼠遺傳品系鑒定;轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定;細(xì)胞點突變檢測;細(xì)胞端粒長度和端粒酶活性檢測。等業(yè)務(wù)進(jìn)行到底。誠實、守信是對企業(yè)的經(jīng)營要求,也是我們做人的基本準(zhǔn)則。公司致力于打造***的細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測,生物技術(shù)服務(wù)。