杭州亞硫酸鹽甲基化重測(cè)序哪里好

來(lái)源: 發(fā)布時(shí)間:2021-11-19

DNA甲基化是研究 為普遍的表觀遺傳修飾,它被認(rèn)為在許多生物學(xué)過(guò)程和疾病中有著重要的作用。隨著測(cè)序技術(shù)的快速發(fā)展,二代測(cè)序與重亞硫酸鹽處理基因組DNA相結(jié)合產(chǎn)生了可以在全基因組單堿基水平上測(cè)量DNA甲基化水平的全基因組重亞硫酸鹽測(cè)序(whole-genome bisulfite sequencing,WGBS)技術(shù)。WGBS的流程與全基因組DNA測(cè)序主要區(qū)別于DNA文庫(kù)的構(gòu)建。以MethlyC-seq為例,將DNA 段化后收集特定長(zhǎng)度的片段并修復(fù)DNA末端,再將雙端加上3′-dAMP然后連接上甲基化的接頭,接著用重亞硫酸鹽處理DNA使未甲基化的胞嘧啶(C)轉(zhuǎn)化為尿嘧啶(U), 終進(jìn)行低循環(huán)數(shù)的PCR擴(kuò)增后完成建庫(kù),建庫(kù)完后上機(jī)測(cè)序,得到原始數(shù)據(jù)(fastq文件)后,完成一定的質(zhì)量控制后就可以進(jìn)行mapping分析。DNA甲基化可引起基因組中相應(yīng)區(qū)域染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化,使DNA失去核酶限制性內(nèi)切酶的切割位點(diǎn),。杭州亞硫酸鹽甲基化重測(cè)序哪里好

表觀遺傳學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)了特定基因區(qū)域的DNA甲基化修飾對(duì)于染色體構(gòu)象、基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制有著重要影響,而全基因組DNA甲基化研究將是表觀基因組學(xué)為關(guān)注的內(nèi)容之一。Bisulfite處理能夠?qū)⒒蚪M中未發(fā)生甲基化的C堿基轉(zhuǎn)換成U,進(jìn)行PCR擴(kuò)增后變成T,與原本具有甲基化修飾的C堿基區(qū)分開(kāi)來(lái),再結(jié)合高通量測(cè)序技術(shù),可繪制單堿基分辨率的全基因組DNA甲基化圖譜。特定物種的高精確度甲基化修飾模式的分析,必將在表觀基因組學(xué)研究中具有里程碑式的意義,并且為細(xì)胞分化、組織發(fā)育等基礎(chǔ)機(jī)制研究,以及動(dòng)植物育種、人類(lèi)健康與疾病研究奠定基礎(chǔ)。浙江目標(biāo)區(qū)域甲基化重測(cè)序哪里好常規(guī)全基因組甲基化測(cè)序技術(shù)通過(guò)T4-DNA連接酶,在超聲波打斷基因組DNA*段的兩端連接接頭序列。

Hi-Methylseq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴(kuò)增子高通量測(cè)序技術(shù),可實(shí)現(xiàn)多區(qū)段、多位點(diǎn)的甲基化精確定量分析,適用于感興趣的目的片段的甲基化研究和在大樣本中進(jìn)一步確認(rèn)全基因組甲基化研究挑選的陽(yáng)性位點(diǎn)。采用翼和自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的多重PCR捕獲技術(shù),確保目的片段有效富集,經(jīng)亞硫酸氫鹽處理后,DNA序列復(fù)雜度嚴(yán)重降低,嚴(yán)格控制建庫(kù)PCR的循環(huán)數(shù),降低非特異性擴(kuò)增,通過(guò)將參考序列中的C堿基全部替換為T(mén)堿基,然后將測(cè)序reads比對(duì)到轉(zhuǎn)換后的參考序列上,針對(duì)每一個(gè)CpG位點(diǎn),統(tǒng)計(jì)C和T堿基的讀數(shù)(類(lèi)似于SNP calling),來(lái)判斷該位點(diǎn)的甲基化。

DNA甲基化能引起染色質(zhì)結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因+表達(dá)。在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下,DNA的CG兩個(gè)核苷酸的胞嘧啶被選擇性地添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,這常見(jiàn)于基因的5'-CG-3'序列。大多數(shù)脊椎動(dòng)物基因組DNA都有少量的甲基化胞嘧啶,主要集中在基因5’端的非編碼區(qū),并成簇存在。甲基化位點(diǎn)可隨DNA的復(fù)制而遺傳,因?yàn)镈NA復(fù)制后,甲基化酶可將新合成的未甲基化的位點(diǎn)進(jìn)行甲基化。DNA的甲基化可引起基因的失活。表觀遺傳屬于一種可以對(duì)環(huán)境產(chǎn)生應(yīng)答和改變的遺傳機(jī)制。

DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)領(lǐng)域研究的重點(diǎn)之一。DNA甲基化是指在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferase, 縮寫(xiě)DNMT)的作用下,基因組DNA序列上CpG島的二核苷酸5′端胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?′甲基胞嘧啶(5′ methylcytosine, 縮寫(xiě)5mC)。這種DNA修飾的方式并未改變基因的序列, 但能改變某些基因的表達(dá),從而影響生物學(xué)功能。DNA 甲基化參與眾多的細(xì)胞生命活動(dòng),包括細(xì)胞分化、組織特異性基因表達(dá)、基因組印記、X 染色體失活等。異常的 DNA 甲基化會(huì)導(dǎo)致發(fā)育異常、tumour等疾病的發(fā)生?;蚣谆瘞缀醢l(fā)生在CpG島(70%啟動(dòng)子)會(huì)損害轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合,發(fā)生在基因區(qū)間能抑制有害元件的表達(dá)。成都目標(biāo)甲基化重測(cè)序報(bào)告

表觀遺傳學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)了特定基因區(qū)域的DNA甲基化修飾對(duì)于染色體構(gòu)象、基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制有著重要影響。杭州亞硫酸鹽甲基化重測(cè)序哪里好

DNA甲基化(DNA methylation)為DNA化學(xué)修飾的一種形式,能夠在不改變DNA序列的前提下,改變遺傳表現(xiàn)。所謂DNA甲基化是指在DNA甲基化轉(zhuǎn)移酶的作用下,在基因組CpG二核苷酸的胞嘧啶5號(hào)碳位共價(jià)鍵結(jié)合一個(gè)甲基基團(tuán)。大量研究表明,DNA甲基化能引起染結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)相互作用方式的改變,從而控制基因表達(dá)。WGBS是基于重亞硫酸鹽的甲基化分析方法,首先通過(guò)Bisulfite對(duì)樣本DNA進(jìn)行處理,將未甲基化的C堿基轉(zhuǎn)化為U堿基,而甲基化的C堿基則不會(huì)改變,進(jìn)行PCA擴(kuò)增后U堿基會(huì)變成T,與原本甲基化的C堿基區(qū)分開(kāi),再結(jié)合高通量測(cè)序技術(shù),可繪制單堿基分辨率的全基因組DNA甲基化圖譜。杭州亞硫酸鹽甲基化重測(cè)序哪里好

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