多倍體物種SNP分型的常用技術(shù)包括Sanger測序、SNP芯片、KASP等3種,這3種技術(shù)依賴于特異性的擴增或特異性的雜交,而多倍體物種亞基因組間高度同源,使得特異性擴增/雜交的難度**增加,這3種常用技術(shù)在無法保證特異性的前提下,得到的是混合結(jié)果,且無法對混合結(jié)果進行有效的拆分。這就導(dǎo)致多倍體物種SNP分型結(jié)果準確率不高。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是上海市遺傳學會理事單位,是上海市****,至今已有十六年歷史,專注于為國內(nèi)科研工作者和生物醫(yī)藥企業(yè)提供各類分子遺傳學技術(shù)服務(wù)(高同源區(qū)段SNP分型)和質(zhì)控試劑盒。多重長片段巢式PCR技術(shù),可以高效特異性捕獲高同源區(qū)段序列,將高同源區(qū)段問題轉(zhuǎn)換為常規(guī)SNP位點。廣州高同源SNP分型機構(gòu)
SNP基因分型技術(shù)原理是PCR擴增含有SNP的基因組片段,主要特點是準確性高、靈活性強、通量大,主要方法是TaqMan探針法。首先通過PCR擴增含有SNP的基因組片段,然后通過序列特異性引物實現(xiàn)單堿基延伸,隨后樣品分析物與芯片基質(zhì)共結(jié)晶后在真空管中受瞬時納秒 (10-9s) 強激光激發(fā)。核酸分子因此解吸附成為單電荷離子,由于電場中離子飛行時間與離子質(zhì)量成反比,通過檢測核酸分子在真空管中的飛行時間而獲得樣品分析物的精確分子量,從而檢測出SNP位點信息。北京分型怎么解決多重長片段PCR,同時擴增10個以上長片段,長片段區(qū)間內(nèi)覆蓋多個SNP位點,通過這種方法高效捕獲特異性序列。
將待檢測片段(包含待測SNP位點)進行PCR擴增并直接進行測序是SNP檢測方法中,準確的一種,堪稱SNP分型的“金標準”。獲得測序峰圖,純和位點為單峰,而雜合位點則為套峰,因此通過查看測序峰圖很容易將基因型區(qū)分開來。直接測序法不僅可用于對已知位點的檢測,還可用于發(fā)現(xiàn)未知的SNP位點。直接測序法的優(yōu)點是結(jié)果準確,能發(fā)現(xiàn)未知位點,但是其缺點是通量低,成本高。因此直接測序法適用于少位點,少樣本的分型規(guī)模,當然土豪實驗室除外!所以這種方法也很難在商業(yè)化大規(guī)模的分型實驗中得到推廣。
上海翼和多倍體擴增子測序SNP分型,結(jié)合多重PCR技術(shù)和高通量測序技術(shù),對需要檢測的位點設(shè)計特異性引物,在單管內(nèi)進行多重PCR擴增,不同的樣本以不同的Barcode引物區(qū)分,對擴增子進行高通量測序。測序結(jié)果使用生物信息學方法,區(qū)分不同的樣本。并且將多倍體的不同基因組進行拆分后,對測序短序列進行精細reads mapping,剔除HSV和PSV干擾,**終獲得每個位點準確的分型信息。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是上海市遺傳學會理事單位,是上海市****。組成DNA的堿基雖然有4種,但SNP一般只有兩種堿基組成。
序列的相似性和序列的同源性有一定的關(guān)系,一般來說序列間的相似性越高的話,它們是同源序列的可能性就越高,所以經(jīng)??梢酝ㄟ^序列的相似性來推測序列是否同源。正因為存在這樣的關(guān)系,很多時候?qū)π蛄械南嗨菩院屯葱跃蜎]有做很明顯的區(qū)分,造成經(jīng)常等價混用兩個名詞。所以有出現(xiàn)A序列和B序列的同源性為80%一說。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是上海市遺傳學會理事單位,上海市****,至今已有十六年歷史,專注于為國內(nèi)科研工作者和生物醫(yī)藥企業(yè)提供各類分子遺傳學技術(shù)服務(wù)和質(zhì)控試劑盒。高同源區(qū)段在多倍體物種中,又細分為橫向同源和部分同源。河南高同源區(qū)段SNP分型公司
針對已知SNP的分型,也有很多低通量的解決方案,但是高通量的解決方案還沒有很好的方法來解決。廣州高同源SNP分型機構(gòu)
隨著二代測序技術(shù)的普及,相比Sanger測序,二代測序雖然降低了測序讀長,但是**增加的測序通量同時大幅降低測序成本。利用二代測序進行SNP分型,不僅測序讀長滿足分型需求,并且可以同時對數(shù)十數(shù)百個位點,上千樣本進行分型。二代測序結(jié)果判斷準確直觀,相比RFLP,Taqman,LDR等方法都通過間接結(jié)果來進行分型結(jié)果的判定,直接測序或二代測序法分型能都直接看到位點具體序列情況,SNP位點判斷更加直觀。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是上海市遺傳學會理事單位,是上海市****,至今已有十六年歷史。廣州高同源SNP分型機構(gòu)
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