目前市場(chǎng)上有多個(gè)廠家提供HRM分析的儀器,包括IdahoTechnology、Corbett(QIAGEN)、Roche等,有些是HRM的儀器,有些則是附帶HRM功能的定量PCR儀。HRM的發(fā)明者—美國(guó)猶他大學(xué)醫(yī)學(xué)院的Wittwer實(shí)驗(yàn)室曾評(píng)估了市場(chǎng)上多臺(tái)儀器在基因分型和突變掃描上的性能1。他們發(fā)現(xiàn),對(duì)于大部分儀器的準(zhǔn)確基因分型來說,主要限制在于平板上的空間溫度差異(Tm的標(biāo)準(zhǔn)偏差為0.020-0.264°C)。其它差異如數(shù)據(jù)密度、信噪比和熔解速率,也會(huì)影響雜合體的掃描。經(jīng)過比較發(fā)現(xiàn),空氣加熱型儀器以及樣品溫度單獨(dú)控制的儀器有著更低的Tm標(biāo)準(zhǔn)偏差(0.018-0.065),而加熱塊型儀器則在0.092-0.274。對(duì)于候選SNP的遴選,有很多種考慮,總的趨勢(shì)和出發(fā)點(diǎn)是能夠涵蓋的SNP越多越好。山東STR/SSR基因SNP分型
以上就是小E對(duì)幾種SNP分型技術(shù)的簡(jiǎn)單介紹,大家可以看出分型技術(shù)多種多樣,各有各的優(yōu)點(diǎn)和限制。大家需要綜合考慮實(shí)驗(yàn)的各方面情況,如實(shí)驗(yàn)規(guī)模(多少位點(diǎn),多少樣本),實(shí)驗(yàn)周期,實(shí)驗(yàn)預(yù)算等,然后選擇一個(gè)適合自己實(shí)驗(yàn)的分型技術(shù)。上海翼和**團(tuán)隊(duì)富有開創(chuàng)精神,朝氣蓬勃,在肖君華博士的帶領(lǐng)下,秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神,為科研用戶提供性價(jià)比高、高質(zhì)量可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。上海翼和**團(tuán)隊(duì)富有開創(chuàng)精神,朝氣蓬勃,在肖君華博士的帶領(lǐng)下,秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神,為科研用戶提供性價(jià)比高、可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。上海SNP分型外包服務(wù)SNP一般來說,是全部體細(xì)胞一樣的基因型(除開嵌合體)。
高分辨率熔解(High-resolutionmelting,簡(jiǎn)稱HRM)分析是一門新興的技術(shù)。它通過PCR之后的熔解曲線分析,就能檢測(cè)PCR片段的微小序列差異,從而應(yīng)用在突變掃描、序列配對(duì)和基因分型等多個(gè)方面。憑借其速度和簡(jiǎn)便性,高分辨率熔解這種方法正在迅速普及。其實(shí)雙鏈DNA的熔解分析可追溯到上世紀(jì)六十年代,當(dāng)時(shí)是通過紫外吸收來監(jiān)測(cè)的。分析需要幾微克的DNA,而樣品以0.1-1.0°C/分鐘的速率緩慢加熱,常常要花上幾個(gè)小時(shí)才能完成。后來,LightCycler定量PCR儀的出現(xiàn),讓熒光熔解分析變得流行。樣品量因毛細(xì)管而縮減至納克級(jí),且熔解速率更快,達(dá)0.1-1.0°C/秒,這樣熔解時(shí)間縮短至幾分鐘。當(dāng)時(shí)使用的染料是SYBR?GreenI。
競(jìng)爭(zhēng)性等位基因特異性PCR法——KASP(KompetitiveAlleleSpecificPCR),是英國(guó)LGC(**化學(xué)家實(shí)驗(yàn)室)公司所開發(fā)的技術(shù),被比較常見用于少位點(diǎn),多樣本的SNP分型中,與TaqMan熒光探針法有一定相似性。KASP基于引物末端堿基的特異匹配來對(duì)SNP分型以及檢測(cè)InDels(Insertions and Deletions,插入和缺失)。上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司,微信公眾號(hào):上海翼和生物。 總公司地址位于:上海市松江區(qū)龍騰路1015弄中星創(chuàng)意園2號(hào)502、508 ,此外,無錫設(shè)有分公司目前在nature genetics和cell這樣的雜志,也不乏SNP的文章。
將待檢測(cè)片段(包含待測(cè)SNP位點(diǎn))進(jìn)行PCR擴(kuò)增并直接進(jìn)行測(cè)序是SNP檢測(cè)方法中,準(zhǔn)確的一種,堪稱SNP分型的“金標(biāo)準(zhǔn)”。獲得測(cè)序峰圖,純和位點(diǎn)為單峰,而雜合位點(diǎn)則為套峰,因此通過查看測(cè)序峰圖很容易將基因型區(qū)分開來。直接測(cè)序法不僅可用于對(duì)已知位點(diǎn)的檢測(cè),還可用于發(fā)現(xiàn)未知的SNP位點(diǎn)。直接測(cè)序法的優(yōu)點(diǎn)是結(jié)果準(zhǔn)確,能發(fā)現(xiàn)未知位點(diǎn),但是其缺點(diǎn)是通量低,成本高。因此直接測(cè)序法適用于少位點(diǎn),少樣本的分型規(guī)模,當(dāng)然土豪實(shí)驗(yàn)室除外!所以這種方法也很難在商業(yè)化大規(guī)模的分型實(shí)驗(yàn)中得到推廣。SNP應(yīng)該在群體中占一定的比例,比如至少是1%。北京微衛(wèi)星標(biāo)記strSNP分型準(zhǔn)確度高
理論上講,SNP既可能是二等位多態(tài)性,也可能是3個(gè)或4個(gè)等位多態(tài)性。山東STR/SSR基因SNP分型
目前翼和業(yè)務(wù)領(lǐng)域涵蓋靶向捕獲二代測(cè)序、細(xì)胞系STR遺傳背景鑒定和SNP基因分型三大板塊。在基因檢測(cè)應(yīng)用中,公司采用TaqMan、LDR與等位基因PCR技術(shù),為客戶提供高性價(jià)比的服務(wù)。翼和**團(tuán)隊(duì)將繼續(xù)秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神,致力于應(yīng)用遺傳學(xué)診斷技術(shù)服務(wù)人類健康、推動(dòng)生命科學(xué)相關(guān)研究發(fā)展。上海翼和**團(tuán)隊(duì)富有開創(chuàng)精神,朝氣蓬勃,在肖君華博士的帶領(lǐng)下,秉承“專業(yè)、協(xié)作、進(jìn)取”的企業(yè)精神,為科研用戶提供性價(jià)比高、可靠的遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)和產(chǎn)品。山東STR/SSR基因SNP分型
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司一直專注于第三方檢測(cè)服務(wù);生物專業(yè)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù);健康衰老評(píng)估;大健康檢測(cè);遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù);生物醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)控檢測(cè)技術(shù)技術(shù)服務(wù);小鼠遺傳品系鑒定;轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定;細(xì)胞點(diǎn)突變檢測(cè);細(xì)胞端粒長(zhǎng)度和端粒酶活性檢測(cè)。,是一家醫(yī)藥健康的企業(yè),擁有自己**的技術(shù)體系。公司目前擁有專業(yè)的技術(shù)員工,為員工提供廣闊的發(fā)展平臺(tái)與成長(zhǎng)空間,為客戶提供高質(zhì)的產(chǎn)品服務(wù),深受員工與客戶好評(píng)。公司以誠(chéng)信為本,業(yè)務(wù)領(lǐng)域涵蓋細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測(cè),生物技術(shù)服務(wù),我們本著對(duì)客戶負(fù)責(zé),對(duì)員工負(fù)責(zé),更是對(duì)公司發(fā)展負(fù)責(zé)的態(tài)度,爭(zhēng)取做到讓每位客戶滿意。公司憑著雄厚的技術(shù)力量、飽滿的工作態(tài)度、扎實(shí)的工作作風(fēng)、良好的職業(yè)道德,樹立了良好的細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測(cè),生物技術(shù)服務(wù)形象,贏得了社會(huì)各界的信任和認(rèn)可。