SNP全稱SingleNucleotidePolymorphism,即單核苷酸多態(tài)性,是指在基因組上單個核苷酸的變異,包括轉換,顛換,插入和缺失,形成的遺傳標記,其數(shù)量很多,多態(tài)性豐富,有些SNP位點直接影響基因功能,從而導致生物性狀改變。SNP是研究人類家族和動植物品系遺傳變異的重要依據(jù),因此被比較常見用于群體遺傳學研究和疾病相關基因的研究。上海翼和應用生物公司開展此業(yè)務有十余年了,技術水平過硬和售后服務周到,得到客戶的一致好評,而且價格優(yōu)惠。理論上講,SNP既可能是二等位多態(tài)性,也可能是3個或4個等位多態(tài)性。上海SSR基因SNP分型周期
高分辨率熔解(High-resolutionmelting,簡稱HRM)分析是一門新興的技術。它通過PCR之后的熔解曲線分析,就能檢測PCR片段的微小序列差異,從而應用在突變掃描、序列配對和基因分型等多個方面。憑借其速度和簡便性,高分辨率熔解這種方法正在迅速普及。其實雙鏈DNA的熔解分析可追溯到上世紀六十年代,當時是通過紫外吸收來監(jiān)測的。分析需要幾微克的DNA,而樣品以0.1-1.0°C/分鐘的速率緩慢加熱,常常要花上幾個小時才能完成。后來,LightCycler定量PCR儀的出現(xiàn),讓熒光熔解分析變得流行。樣品量因毛細管而縮減至納克級,且熔解速率更快,達0.1-1.0°C/秒,這樣熔解時間縮短至幾分鐘。當時使用的染料是SYBR?GreenI。江蘇微衛(wèi)星標記SNP分型分析組成DNA的堿基雖然有4種,但SNP一般只有兩種堿基組成。
隨著二代測序技術的普及,相比Sanger測序,以降低測序讀長的前提,極大增加的測序通量同時大幅降低測序成本。利用二代測序進行SNP分型,不僅測序讀長滿足分型需求,可以同時對數(shù)十數(shù)百個位點,上千樣本進行分型。該方法相比直接測序法,除了保留測序法的優(yōu)點外,彌補了其通量不足的限制,二代測序分型法也正在快速在領域內推廣。無錫分公司(無錫翼和應用生物技術有限公司)地址:無錫市濱湖區(qū)梅梁西路138號七號樓一樓。微信公眾號:上海翼和生物
SNP基因分型技術原理是PCR擴增含有SNP的基因組片段,主要特點是準確性高、靈活性強、通量大,主要方法是TaqMan探針法。首先通過PCR擴增含有SNP的基因組片段,然后通過序列特異性引物實現(xiàn)單堿基延伸,隨后樣品分析物與芯片基質共結晶后在真空管中受瞬時納秒(10-9s)強激光激發(fā)。核酸分子因此解吸附成為單電荷離子,由于電場中離子飛行時間與離子質量成反比,通過檢測核酸分子在真空管中的飛行時間而獲得樣品分析物的精確分子量,從而檢測出SNP位點信息。多態(tài)性是一個群體概念,多態(tài)性指這個差異占群體的1%以上。否則就叫突變(小于1%)。
3、SNP等位基因頻率的容易估計。采用混和樣本估算等位基因的頻率是種高效快速的策略。該策略的原理是:首先選擇參考樣本制作標準曲線,然后將待測的混和樣本與標準曲線進行比較,根據(jù)所得信號的比例確定混和樣本中各種等位基因的頻率。4、易于基因分型。SNPs的二態(tài)性,也有利于對其進行基因分型。對SNP進行基因分型包括三方面的內容:(1)鑒別基因型所采用的化學反應,常用的技術手段包括:DNA分子雜交、引物延伸、等位基因特異的寡核苷酸連接反應、側翼探針切割反應以及基于這些方法的變通技術;(2)完成這些化學反應所采用的模式,包括液相反應、固相支持物上進行的反應以及二者皆有的反應。(3)化學反應結束后,需要應用生物技術系統(tǒng)檢測反應結果。SNP已經(jīng)廣泛應用于人類致病基因篩選、致病風險診斷及預測、個體化藥物篩選等生物、醫(yī)學研究領域。廣東基因SNP分型
SNP本身是針對“群體”而言的(within a population)。上海SSR基因SNP分型周期
理論上講,SNP既可能是二等位多態(tài)性,也可能是3個或4個等位多態(tài)性,但實際上,后兩者非常少見,幾乎可以忽略。因此,通常所說的SNP都是二等位多態(tài)性的。這種變異可能是轉換(CT,在其互補鏈上則為GA),也可能是顛換(CA,GT,CG,AT)。轉換的發(fā)生率總是明顯高于其它幾種變異,具有轉換型變異的SNP約占2/3,其它幾種變異的發(fā)生幾率相似。Wang等的研究也證明了這一點。轉換的幾率之所以高,可能是因為CpG二核苷酸上的胞嘧啶殘基是人類基因組中,易發(fā)生突變的位點,其中大多數(shù)是甲基化的,可自發(fā)地脫去氨基而形成胸腺嘧啶。在基因組DNA中,任何堿基均有可能發(fā)生變異,因此SNP既有可能在基因序列內,也有可能在基因以外的非編碼序列上。總的來說,位于編碼區(qū)內的SNP(codingSNP,cSNP)比較少,因為在外顯子內,其變異率及周圍序列的1/5.但它在遺傳性疾病研究中卻具有重要意義,因此cSNP的研究更受關注。上海SSR基因SNP分型周期
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