Hi-Methylseq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴增子高通量測序技術，可實現(xiàn)多區(qū)段、多位點的甲基化精確定量分析，適用于感興趣的目的片段的甲基化研究和在大樣本中進一步確認全基因組甲基化研究挑選的陽性位點。采用翼和自主知識產(chǎn)權(quán)的多重PCR捕獲技術，確保目的片段有效富集，經(jīng)亞硫酸氫鹽處理后，DNA序列復雜度嚴重降低，嚴格控制建庫PCR的循環(huán)數(shù)，降低非特異性擴增，通過將參考序列中的C堿基全部替換為T堿基，然后將測序reads比對到轉(zhuǎn)換后的參考序列上，針對每一個CpG位點，統(tǒng)計C和T堿基的讀數(shù)（類似于SNP calling），來判斷該位點的甲基化。DNA甲基化可引起基因組中相應區(qū)域染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化,使DNA失去核酶限制性內(nèi)切酶的切割位點,。成都亞硫酸鹽甲基化重測序機構(gòu)
全基因組重亞硫酸鹽甲基化測序（WGBS）可以在全基因組范圍內(nèi)精確的檢測所有單個胞嘧啶堿基（C堿基）的甲基化水平，是DNA甲基化研究的金標準。WGBS能為基因組DNA甲基化修飾的研究提供重要技術支持，能廣泛應用在個體發(fā)育、衰老和cancer發(fā)生等生命過程的機制研究中。其原理是用 Bisulfite 處理DNA序列，首先將基因組中未發(fā)生甲基化的 C 堿基轉(zhuǎn)換成U（T），從而與原本具有甲基化修飾的堿基C區(qū)分開來，然后進行PCR擴增，結(jié)合高通量測序技術，適用于全基因組范圍內(nèi)繪制單堿基分辨率的DNA 甲基化圖譜。安徽目標區(qū)域甲基化重測序技術服務亞硫酸氫鹽處理是一種分類5-甲基胞嘧啶和非甲基化堿基的有效方法之一。
DNA甲基化過程在一些生物學現(xiàn)象中起重要作用。例如，在原核生物中，它參與毒力、細胞周期調(diào)控、基因表達和對外源 DNA 導入的保護（DNA-宿主特異性）等過程。在高等真核生物中，DNA 甲基化參與調(diào)控染色體穩(wěn)定性、印記、X 染色體失活和cancer 變等多個細胞過程。在哺乳動物中，DNA 甲基化主要發(fā)生在胞嘧啶堿基的第五個碳原子上，形成 5-甲基胞嘧啶或 5-甲基胞嘧啶核苷 (5-mC)。DNA甲基化幾乎只存在于CpG二核苷酸上，是一個關鍵的表觀遺傳標記和基因表達調(diào)控因子。基因啟動子或 CpG 島處的甲基化 CpG 簇與基因失活有關。DNA 甲基化由一個被稱為 DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶并包括 DNMT1、DNMT3a 和 DNMT3b 的酶家族催化。DNMT3a 和 DNMT3b是從頭合成的甲基轉(zhuǎn)移酶，能夠甲基化之前未甲基化的 CpG二核苷酸。相反，DNMT1是一種維持性甲基轉(zhuǎn)移酶，在復制過程中修飾半甲基化的 DNA。
DNA甲基化作為一種重要的表觀修飾，在調(diào)控基因的時空特異性表達中扮演著關鍵的角色，參與了X染色體失活、基因組印記和重復序列抑制等諸多生命過程。哺乳動物細胞的DNA甲基化主要發(fā)生在CpG二核苷酸對的C（胞嘧啶）上，并在有絲分裂過程中得以相對穩(wěn)定的維持，這對細胞保持譜系特性有著重要的意義。上海翼和應用生物技術有限公司自主研發(fā)的Hi-MethylSeq技術，可對對大規(guī)模群體的候選基因甲基化水平進行檢測。上海翼和生物是上海市遺傳學會理事單位。DNA甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下，DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被選擇性的添加甲基，形成5-甲基胞嘧啶。
DNA甲基化是指針對DNA序列上的CpG島，由甲基化轉(zhuǎn)移酶將S腺苷甲硫氨酸的甲基轉(zhuǎn)移給胞嘧啶。其中，5’甲基胞嘧啶(5mC) 的甲基化是一個非常重要的表觀遺傳學修飾事件，該事件能夠調(diào)控基因活性，并影響著如細胞分化、轉(zhuǎn)錄調(diào)控和染色質(zhì)重塑等生物學過程。重亞硫酸鹽測序可以從單個堿基水平分析基因組中甲基化的胞嘧啶。首先，利用重煙硫酸鹽對基因組DNA進行處理，將未發(fā)生甲基化的胞嘧啶脫氨基變成尿嘧啶。而發(fā)生了甲基化的胞嘧啶未發(fā)生脫氨基，因而，可以基于此將經(jīng)重亞硫酸鹽處理的和未處理的測序樣本進行比較來發(fā)現(xiàn)甲基化的位點。DNA甲基化是在DNA甲基化轉(zhuǎn)移（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5'端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?'甲基胞嘧啶。廣州甲基化重測序哪個公司做
Hi-MethylSeq在研究DNA甲基化時，每一個read都相當于克隆測序時的一個單克隆。成都亞硫酸鹽甲基化重測序機構(gòu)
上海翼和生物甲基化測序采用的是重亞硫酸鹽擴增子測序法（Bisulfite Amplicon Sequencing， BSAS），重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化是研究DNA甲基化的金標方法，該技術基于非甲基化胞嘧啶（C）向尿嘧啶（U）的化學轉(zhuǎn)化，即用重亞硫酸鹽處理基因組DNA，非甲基化胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化胞嘧啶不發(fā)生這種轉(zhuǎn)化，從而能夠在單核苷酸水平上確定DNA甲基化（圖1）。轉(zhuǎn)化后的序列可以進行多種分析，包括重亞硫酸鹽測序、焦磷酸測序、甲基化特異性PCR、高分辨率熔解曲線分析、基于微陣列的方法和下一代測序。成都亞硫酸鹽甲基化重測序機構(gòu)
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