DNA甲基化是指生物體在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferase,DMT) 的催化下,以s-腺苷甲硫氨酸(SAM)為甲基供體,將甲基轉(zhuǎn)移到特定的堿基上的過程。DNA甲基化能降低某些基因的表達活性,去甲基化則能引起基因的重新活化和表達。DNA甲基化能引起染色質(zhì)的結(jié)構(gòu)、DNA構(gòu)象、DNA穩(wěn)定性及DNA與蛋白質(zhì)之間的相互作用方式的改變,從而影響基因表達。研究證實,CpG二核苷酸中胞嘧啶的甲基化導致了人體1/3以上由于堿基變異而引起的遺傳性疾病。由于DNA甲基化與人體發(fā)育和tumour疾病的密切關系,特別是CpG島甲基化引起的抑cancer基因的轉(zhuǎn)錄失活,使得DNA甲基化成為表觀遺傳學和表觀基因組學的重要研究內(nèi)容。DNA甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下,DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被選擇性的添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶。上海目標甲基化重測序
DNA甲基化一般是指DNA復制后,在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的作用下,將S-腺甘酰甲硫氨酸分子上的甲基轉(zhuǎn)移到DNA分子中胞嘧啶殘基的第5位碳原子上,形成5-甲基胞嘧啶的過程,它是真核細胞生物基因組重要的修飾方式之一。DNA甲基化包括從頭甲基化和維持甲基化2種模式。從頭甲基化是指在從未發(fā)生甲基化的位點上發(fā)生甲基化修飾,建立DNA甲基化的過程;而維持甲基化是指維持甲基化的酶可識別新合成的半甲基化雙鏈DNA,并將甲基添加到新鏈的非甲基化胞嘧啶上。上海全基因組甲基化重測序分析Hi-Methylseq方案一次測序反應每個位點測序上百次節(jié)約時間、成本、定量準確。
DNA甲基化主要形成5-甲基胞嘧啶(5-mC)和少量的N6-甲基嘌呤(N6-mA)及7-甲基鳥嘌呤(7-mG)結(jié)構(gòu)基因含有很多CpG 結(jié)構(gòu), 2CpG 和2GPC 中兩個胞嘧啶的5 位碳原子通常被甲基化, 且兩個甲基集團在DNA 雙鏈大溝中呈特定三維結(jié)構(gòu)?;蚪M中60%~ 90% 的CpG 都被甲基化, 未甲基化的CpG 成簇地組成CpG 島,位于結(jié)構(gòu)基因啟動子的core序列和轉(zhuǎn)錄起始點。有實驗證明超甲基化阻遏轉(zhuǎn)錄的進行。DNA 甲基化可引起基因組中相應區(qū)域染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化, 使DNA 失去核酶?限制性內(nèi)切酶的切割位點, 以及DNA 酶的敏感位點, 使染色質(zhì)高度螺旋化, 凝縮成團, 失去轉(zhuǎn)錄活性。5 位C 甲基化的胞嘧啶脫氨基生成胸腺嘧啶, 由此可能導致基因置換突變, 發(fā)生堿基錯配: T2G, 如果在細胞分裂過程中不被糾正,就會誘發(fā)遺傳病或cancer, 而且, 生物體甲基化的方式是穩(wěn)定的, 可遺傳的。
DNA甲基化作為一種重要的表觀修飾,在調(diào)控基因的時空特異性表達中扮演著關鍵的角色,參與了X染色體失活、基因組印記和重復序列抑制等諸多生命過程。哺乳動物細胞的DNA甲基化主要發(fā)生在CpG二核苷酸對的C(胞嘧啶)上,并在有絲分裂過程中得以相對穩(wěn)定的維持,這對細胞保持譜系特性有著重要的意義。上海翼和應用生物技術有限公司自主研發(fā)的Hi-MethylSeq技術,可對對大規(guī)模群體的候選基因甲基化水平進行檢測。上海翼和生物是上海市遺傳學會理事單位。DNA甲基化在DNA復制起始、錯配修復以及轉(zhuǎn)座子的失活等過程中對維持遺傳信息的穩(wěn)定性發(fā)揮著重要的作用。
亞硫酸氫鹽測序法用亞硫酸氫鈉對 DNA 進行化學處理會使甲基化特異性序列變異,從而可以通過NGS進行定位和量化,主要的DNA甲基化數(shù)據(jù)分析流程:獲得DNA甲基化數(shù)據(jù)之后,首先,需要對數(shù)據(jù)進行處理和質(zhì)量的基本控制,包括原始測序和芯片數(shù)據(jù)的讀取、轉(zhuǎn)換到產(chǎn)生準確的DNA甲基化圖譜;其次,需要對DNA甲基化位點的結(jié)果進行可視化,并且利用統(tǒng)計學方法鑒定樣本特異性差異的DNA甲基化位點;第三,驗證 DNA 甲基化差異位點,并且對其進行生物學解釋。上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽(bisulfite)處理,用多重PCR擴增目的片段,添加barcode和測序通用接頭。上海目標甲基化重測序
如果在細胞分裂過程中不被糾正,就會誘發(fā)遺傳病或tumour,而且,生物體甲基化的方式是穩(wěn)定的, 可遺傳的。上海目標甲基化重測序
上海翼和生物甲基化測序采用的是重亞硫酸鹽擴增子測序法(Bisulfite Amplicon Sequencing, BSAS),重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化是研究DNA甲基化的金標方法,該技術基于非甲基化胞嘧啶(C)向尿嘧啶(U)的化學轉(zhuǎn)化,即用重亞硫酸鹽處理基因組DNA,非甲基化胞嘧啶被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶,而甲基化胞嘧啶不發(fā)生這種轉(zhuǎn)化,從而能夠在單核苷酸水平上確定DNA甲基化(圖1)。轉(zhuǎn)化后的序列可以進行多種分析,包括重亞硫酸鹽測序、焦磷酸測序、甲基化特異性PCR、高分辨率熔解曲線分析、基于微陣列的方法和下一代測序。上海目標甲基化重測序
上海翼和應用生物技術有限公司一直專注于第三方檢測服務;生物專業(yè)領域內(nèi)的技術開發(fā)、技術咨詢、技術服務;健康衰老評估;大健康檢測;遺傳學技術服務;生物醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)控檢測技術技術服務;小鼠遺傳品系鑒定;轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定;細胞點突變檢測;細胞端粒長度和端粒酶活性檢測。,是一家醫(yī)藥健康的企業(yè),擁有自己獨立的技術體系。目前我公司在職員工以90后為主,是一個有活力有能力有創(chuàng)新精神的團隊。上海翼和應用生物技術有限公司主營業(yè)務涵蓋細胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測,生物技術服務,堅持“質(zhì)量保證、良好服務、顧客滿意”的質(zhì)量方針,贏得廣大客戶的支持和信賴。公司力求給客戶提供全數(shù)良好服務,我們相信誠實正直、開拓進取地為公司發(fā)展做正確的事情,將為公司和個人帶來共同的利益和進步。經(jīng)過幾年的發(fā)展,已成為細胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測,生物技術服務行業(yè)出名企業(yè)。