亞硫酸氫鈉轉(zhuǎn)化是分析胞嘧啶甲基化效果比較好的工具之一。該方法基于亞硫酸氫鈉對(duì) DNA 的處理，確定其甲基化模式。重亞硫酸鹽測(cè)序本質(zhì)上就是重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化與二代測(cè)序（NGS）的結(jié)合。甲基化的金標(biāo)準(zhǔn)是亞硫酸氫鹽測(cè)序法：用亞硫酸氫鹽處理DNA，未發(fā)生甲基化的胞嘧啶能夠被轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶則保持不變，通過后續(xù)的測(cè)序即可檢測(cè)。利用亞硫酸氫鹽的這種原理，可以衍生出多種甲基化檢測(cè)方法，如甲基化特異性的PCR和高分辨率熔解曲線法。DNA復(fù)制后胞嘧啶的甲基化會(huì)改變DNA的構(gòu)象，使DNA的大溝無法與DNA結(jié)合蛋白正常結(jié)合。蘇州目標(biāo)區(qū)域甲基化重測(cè)序公司
DNA甲基化是表觀遺傳調(diào)控的常見機(jī)制。啟動(dòng)子區(qū)域的高度甲基化可導(dǎo)致基因表達(dá)改變。甲基化多發(fā)生于胞嘧啶（cytosine, C）位置。在細(xì)胞和組織分化、疾病發(fā)生以及適應(yīng)環(huán)境等過程中，甲基化狀態(tài)可發(fā)生改變。高精確度全基因組甲基化修飾狀態(tài)的分析，將為發(fā)育、育種、tumour標(biāo)志物鑒定或藥物靶標(biāo)尋找等研究奠定基礎(chǔ)。全基因組甲基化測(cè)序結(jié)合了亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化（bisulfite conversion）方法與新一代高通量測(cè)序技術(shù)，可在單堿基分辨率水平上高效地檢測(cè)全基因組DNA甲基化狀態(tài)。亞硫酸氫鹽處理可以使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，PCR擴(kuò)增所需片段，則尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化成胸腺嘧啶。對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行高通量測(cè)序，與參考序列比對(duì)，即可判斷CpG/CHG/CHH位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化。杭州目標(biāo)區(qū)域甲基化重測(cè)序公司上海翼和生物甲基化測(cè)序采用的是重亞硫酸鹽擴(kuò)增子測(cè)序法，重亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化是研究DNA甲基化的金標(biāo)方法。
Hi-Methylseq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴(kuò)增子高通量測(cè)序技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)多區(qū)段、多位點(diǎn)的甲基化精確定量分析，適用于感興趣的目的片段的甲基化研究和在大樣本中進(jìn)一步確認(rèn)全基因組甲基化研究挑選的陽性位點(diǎn)。采用翼和自主知識(shí)產(chǎn)權(quán)的多重PCR捕獲技術(shù)，確保目的片段有效富集，經(jīng)亞硫酸氫鹽處理后，DNA序列復(fù)雜度嚴(yán)重降低，嚴(yán)格控制建庫PCR的循環(huán)數(shù)，降低非特異性擴(kuò)增，通過將參考序列中的C堿基全部替換為T堿基，然后將測(cè)序reads比對(duì)到轉(zhuǎn)換后的參考序列上，針對(duì)每一個(gè)CpG位點(diǎn)，統(tǒng)計(jì)C和T堿基的讀數(shù)（類似于SNP calling），來判斷該位點(diǎn)的甲基化。
DNA甲基化屬于表觀遺傳的范疇。表觀遺傳屬于一種可以對(duì)環(huán)境產(chǎn)生應(yīng)答和改變的遺傳機(jī)制。機(jī)體細(xì)胞在經(jīng)歷脅迫、創(chuàng)傷等環(huán)境變化后，會(huì)產(chǎn)生特定的應(yīng)答，并往往會(huì)用DNA甲基化、組蛋白修飾等形式將應(yīng)激的模式記錄在DNA修飾中。這種脅迫記憶可以幫助細(xì)胞在面臨下一次應(yīng)激的時(shí)候快速適應(yīng)。同時(shí)，這種表觀修飾可以通過遺傳的方式傳遞給下一代細(xì)胞。對(duì)于高等動(dòng)植物，通常壽命都比較漫長(zhǎng)。在漫長(zhǎng)的一生中，一方面機(jī)體會(huì)經(jīng)歷大量的環(huán)境應(yīng)答，另一方面細(xì)胞將會(huì)分裂多代。那么機(jī)體就更需要將應(yīng)答的信息，存儲(chǔ)在DNA甲基化中傳遞給后代的細(xì)胞，以提高這個(gè)物種的環(huán)境適應(yīng)能力。Hi-Methylseq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴(kuò)增子高通量測(cè)序技術(shù)，可實(shí)現(xiàn) 多區(qū)段、多位點(diǎn)的甲基化精確定量分析。
DNA甲基化可以抑制基因表達(dá)。其機(jī)制是當(dāng)DNA甲基化出現(xiàn)在啟動(dòng)子區(qū)，其會(huì)強(qiáng)化啟動(dòng)子序列的異染色質(zhì)化（染色體擰巴在一起），而使轉(zhuǎn)錄起始復(fù)合物無法接近和結(jié)合，從而強(qiáng)化基因的轉(zhuǎn)錄抑制。只有保持開放性常染色質(zhì)狀態(tài)的轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)，才能保證轉(zhuǎn)錄起始蛋白復(fù)合物可接近并結(jié)合這個(gè)區(qū)域，從而保證基因的轉(zhuǎn)錄表達(dá)。當(dāng)DNA甲基化出現(xiàn)在編碼基因不同區(qū)域的時(shí)候（上游，基因區(qū)或下游），其對(duì)基因表達(dá)的影響也是不同的。同時(shí)，DNA甲基化不僅只影響基因轉(zhuǎn)錄，實(shí)際上其與組蛋白修飾、DNA突變、小RNA表達(dá)等都有非常復(fù)雜的相互調(diào)控作用。表觀遺傳學(xué)研究已經(jīng)證實(shí)了特定基因區(qū)域的DNA甲基化修飾對(duì)于染色體構(gòu)象、基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制有著重要影響。蘇州目標(biāo)位點(diǎn)甲基化重測(cè)序報(bào)告
全基因組甲基化測(cè)序:利用Bisulfite(亞硫酸鹽)對(duì)基因組進(jìn)行處理后上機(jī)測(cè)序。蘇州目標(biāo)區(qū)域甲基化重測(cè)序公司
DNA甲基化主要形成5－甲基胞嘧啶（5-mC）和少量的N6-甲基嘌呤（N6-mA）及7－甲基鳥嘌呤（7-mG）。結(jié)構(gòu)基因含有很多CPG結(jié)構(gòu), 2CPG 和2GPC 中兩個(gè)胞嘧啶的5 位碳原子通常被甲基化, 且兩個(gè)甲基集團(tuán)在DNA 雙鏈大溝中呈特定三維結(jié)構(gòu)。基因組中60%～ 90% 的CPG 都被甲基化, 未甲基化的CPG 成簇地組成CPG 島,位于結(jié)構(gòu)基因啟動(dòng)子的core序列和轉(zhuǎn)錄起始點(diǎn)。有實(shí)驗(yàn)證明超甲基化阻遏轉(zhuǎn)錄的進(jìn)行。DNA 甲基化可引起基因組中相應(yīng)區(qū)域染色質(zhì)結(jié)構(gòu)變化, 使DNA 失去核酶ö限制性內(nèi)切酶的切割位點(diǎn), 以及DNA 酶的敏感位點(diǎn), 使染色質(zhì)高度螺旋化, 凝縮成團(tuán), 失去轉(zhuǎn)錄活性。5 位C 甲基化的胞嘧啶脫氨基生成胸腺嘧啶, 由此可能導(dǎo)致基因置換突變, 發(fā)生堿基錯(cuò)配: T2G, 如果在細(xì)胞分裂過程中不被糾正,就會(huì)誘發(fā)遺傳病或cancer, 而且, 生物體甲基化的方式是穩(wěn)定的, 可遺傳的。蘇州目標(biāo)區(qū)域甲基化重測(cè)序公司
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司主要經(jīng)營(yíng)范圍是醫(yī)藥健康，擁有一支專業(yè)技術(shù)團(tuán)隊(duì)和良好的市場(chǎng)口碑。公司業(yè)務(wù)涵蓋細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控，大健康檢測(cè)，生物技術(shù)服務(wù)等，價(jià)格合理，品質(zhì)有保證。公司注重以質(zhì)量為中心，以服務(wù)為理念，秉持誠(chéng)信為本的理念，打造醫(yī)藥健康良好品牌。翼和生物立足于全國(guó)市場(chǎng)，依托強(qiáng)大的研發(fā)實(shí)力，融合前沿的技術(shù)理念，飛快響應(yīng)客戶的變化需求。