全基因組重亞硫酸鹽甲基化測序（WGBS）可以在全基因組范圍內(nèi)精確的檢測所有單個胞嘧啶堿基（C堿基）的甲基化水平，是DNA甲基化研究的金標準。WGBS能為基因組DNA甲基化修飾的研究提供重要技術(shù)支持，能廣泛應(yīng)用在個體發(fā)育、衰老和cancer發(fā)生等生命過程的機制研究中。其原理是用 Bisulfite 處理DNA序列，首先將基因組中未發(fā)生甲基化的 C 堿基轉(zhuǎn)換成U（T），從而與原本具有甲基化修飾的堿基C區(qū)分開來，然后進行PCR擴增，結(jié)合高通量測序技術(shù)，適用于全基因組范圍內(nèi)繪制單堿基分辨率的DNA 甲基化圖譜。重亞硫酸氫鈉測序法（Bisulfite sequencing，BS-Seq）被認為是5mC鑒定的金標準。浙江多重PCR技術(shù)甲基化重測序技術(shù)服務(wù)
DNA甲基化作為重要的表觀遺傳學調(diào)控機制在許多關(guān)鍵的生物學過程如發(fā)育及疾病的進展中扮演著重要的作用，相對于基于PCR、芯片等傳統(tǒng)檢測手段，全基因組亞硫酸氫鹽測序(Whole Genome Bisulfite Sequencing, WGBS) 技術(shù)可通過將高效的亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化與高通量測序文庫構(gòu)建方法相結(jié)合 (Post-BS WGBS)，可在單堿基的分辨率下對來自更多樣本基因組中的甲基化位點進行準確的分析，既可以覆蓋所有甲基化位點，還能夠配合靶向技術(shù)檢測低頻甲基化信號，已成為目前在業(yè)界受到普遍關(guān)注的一種主流方法。亞硫酸鹽甲基化重測序Hi-Methylseq方案一次測序反應(yīng)每個位點測序上百次節(jié)約時間、成本、定量準確。
DNA去甲基化分為兩類：主動去甲基化（Active DNA Demethylation）和被動去甲基化（Passive DNA Demethylation）?；蚪M甲基化模式的形成主要依賴于主動去甲基化，主要涉及一類具有DNA去甲基化功能的蛋白，可能存在的五種機制a. DNA轉(zhuǎn)葡糖基酶參與的堿基切除修復(fù)（base excision repair；BER）：5-mC 由DNA 轉(zhuǎn)葡糖基酶直接去除。此途徑主要存在于植物體內(nèi)，動物體內(nèi)也可能存在。b.脫氨酶參與的堿基切除修復(fù)：5-mC 脫氨變成胸腺嘧啶T，形成G/T 錯配，進入BER 途徑。這一途徑主要存在于動物體中，植物體中也可能存在。c.核苷酸外切修復(fù)機制（nucleotide excision repair；NER）：直接移除甲基化的CpG 二核苷酸。d.氧化去甲基化：發(fā)生氧化反應(yīng)打開碳-碳鍵，直接去除甲基基團。e.水解去甲基化：水解胞嘧啶的甲基基團，使其以甲醇的形式被釋放。DNA被動去甲基化是指當DNMTs活性被抑制或濃度過低時，無法維持原有的甲基化狀態(tài)，使DNA甲基化程度降低的過程，這類去甲基化通常發(fā)生在細胞復(fù)制的兩個周期之間，涉及到某些可與DNMTs結(jié)合的因子，其結(jié)合后形成的復(fù)合物可以阻止DNMTs與DNA的結(jié)合。
DNA甲基化是表觀遺傳學的重要內(nèi)容。DNA甲基化是基因組DNA的一種主要表觀遺傳修飾形式。DNA甲基化修飾對于維持正常細胞功能、傳遞基因組遺傳印記、胚胎發(fā)育以及人類tumour發(fā)生，起著至關(guān)重要的作用。甲基化研究成為表觀遺傳學的熱點，相應(yīng)的技術(shù)也是層出不窮，根據(jù)實驗?zāi)康牡牟煌?，這些技術(shù)大體能夠分成兩類：全基因組甲基化檢測技術(shù)以及特異性位點甲基化檢測技術(shù)。翼和特色內(nèi)容目標區(qū)域甲基化測序自主知識產(chǎn)權(quán)超高重PCR為基礎(chǔ)，目標甲基化區(qū)段特異性捕獲，更具針對性，經(jīng)濟型基于二代測序，可以獲得目標區(qū)域內(nèi)所有C的甲基化數(shù)據(jù)~500X的測序深度，精確計算每個位點C的甲基化程度通量高，可同時對成百上千個區(qū)域進行甲基化程度分析適用于大樣本多區(qū)域的DNA甲基化水平檢測Q30＞80%檢出率90%以上，90%以上測序片段測序深度＞10X。WGBS（Whole Genome Bisulfite Sequence）全基因組甲基化測序.
DNA甲基化是表觀遺傳學領(lǐng)域研究的重點之一。DNA甲基化是指在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶（DNA methyltransferase, 縮寫DNMT）的作用下，基因組DNA序列上CpG島的二核苷酸5′端胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?′甲基胞嘧啶（5′ methylcytosine, 縮寫5mC）。這種DNA修飾的方式并未改變基因的序列, 但能改變某些基因的表達，從而影響生物學功能。DNA 甲基化參與眾多的細胞生命活動，包括細胞分化、組織特異性基因表達、基因組印記、X 染色體失活等。異常的 DNA 甲基化會導(dǎo)致發(fā)育異常、tumour等疾病的發(fā)生。DNA甲基化主要發(fā)生在CpG位點。在哺乳動物中，70%到80%的CpG位點的胞嘧啶是甲基化的。天津目標區(qū)域甲基化重測序哪里好
5 位C 甲基化的胞嘧啶脫氨基生成胸腺嘧啶, 由此可能導(dǎo)致基因置換突變, 發(fā)生堿基錯配: T2G。浙江多重PCR技術(shù)甲基化重測序技術(shù)服務(wù)
上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽（bisulfite）處理，用多重PCR擴增目的片段，添加barcode和測序通用接頭，在Illumina X10二代測序平臺對PCR產(chǎn)物進行高通量測序，利用生物信息學方法，精確定量計算目標區(qū)間內(nèi)的甲基化位點的甲基化狀態(tài)，在完成目標區(qū)域檢測的同時大幅降低研究費用。Hi-MethylSeq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴增子高通量測序技術(shù)，可實現(xiàn)多區(qū)段、多位點的甲基化精確定量分析。本方法適用于感興趣的目的片段的甲基化研究，在大樣本中進一步確認全基因組甲基化研究挑選的陽性位點。重亞硫酸鹽處理是甲基化分析中基因組DNA處理的金標準，是一個化學過程，可造成DNA的損傷，很難同時實現(xiàn)100%的轉(zhuǎn)換效率和保持DNA的完整性，二者需要做出一定的平衡。Hi-MethylSeq在CpG島之外選取3段內(nèi)參序列中的C作為內(nèi)對照，準確評估樣本的轉(zhuǎn)化率。浙江多重PCR技術(shù)甲基化重測序技術(shù)服務(wù)
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司主要經(jīng)營范圍是醫(yī)藥健康，擁有一支專業(yè)技術(shù)團隊和良好的市場口碑。公司業(yè)務(wù)涵蓋細胞組織小鼠質(zhì)控，大健康檢測，生物技術(shù)服務(wù)等，價格合理，品質(zhì)有保證。公司注重以質(zhì)量為中心，以服務(wù)為理念，秉持誠信為本的理念，打造醫(yī)藥健康良好品牌。翼和生物立足于全國市場，依托強大的研發(fā)實力，融合前沿的技術(shù)理念，飛快響應(yīng)客戶的變化需求。