全基因組甲基化測序結(jié)合了亞硫酸氫鹽轉(zhuǎn)化（bisulfiteconversion）方法與新一代高通量測序技術(shù)，可在單堿基分辨率水平上高效地檢測全基因組DNA甲基化狀態(tài)。亞硫酸氫鹽處理可以使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶，而甲基化的胞嘧啶保持不變，PCR擴(kuò)增所需片段，則尿嘧啶全部轉(zhuǎn)化成胸腺嘧啶。對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行高通量測序，與參考序列比對(duì)，即可判斷CpG/CHG/CHH位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化。上海翼和生物是上海市遺傳學(xué)會(huì)理事單位，上海市高新技術(shù)企業(yè)，至今已有16年的歷史。上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽（bisulfite）處理，用多重PCR擴(kuò)增目的片段，添加barcode和測序通用接頭。上海bisulfite甲基化重測序公司
WGBS（Whole Genome Bisulfite Sequence）全基因組甲基化測序，利用重亞硫酸氫鹽使DNA中未發(fā)生甲基化的胞嘧啶(C)脫氨基轉(zhuǎn)變成尿嘧啶(U)，而甲基化的胞嘧啶保持不變，然后通過PCR將U變?yōu)锳，*有甲基化的C可以成功保留，***通過測序就可判斷CpG位點(diǎn)是否發(fā)生甲基化。特點(diǎn)是精確度高、重復(fù)性好，檢測范圍廣，可以覆蓋全基因組范圍內(nèi)的每一個(gè)C堿基的甲基化狀態(tài)；但需要的數(shù)據(jù)量比較大，成本較高。上海翼和生物是上海市遺傳學(xué)會(huì)理事單位，上海市高新技術(shù)企業(yè)，至今已有16年的歷史。江蘇全基因組甲基化重測序機(jī)構(gòu)DNA復(fù)制后胞嘧啶的甲基化會(huì)改變DNA的構(gòu)象，使DNA的大溝無法與DNA結(jié)合蛋白正常結(jié)合。
上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽（bisulfite）處理，用多重PCR擴(kuò)增目的片段，添加barcode和測序通用接頭，在Illumina X10二代測序平臺(tái)對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行高通量測序，利用生物信息學(xué)方法，精確定量計(jì)算目標(biāo)區(qū)間內(nèi)的甲基化位點(diǎn)的甲基化狀態(tài)，在完成目標(biāo)區(qū)域檢測的同時(shí)大幅降低研究費(fèi)用。Hi-MethylSeq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴(kuò)增子高通量測序技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)多區(qū)段、多位點(diǎn)的甲基化精確定量分析。本方法適用于感興趣的目的片段的甲基化研究，在大樣本中進(jìn)一步確認(rèn)全基因組甲基化研究挑選的陽性位點(diǎn)。重亞硫酸鹽處理是甲基化分析中基因組DNA處理的金標(biāo)準(zhǔn)，是一個(gè)化學(xué)過程，可造成DNA的損傷，很難同時(shí)實(shí)現(xiàn)100%的轉(zhuǎn)換效率和保持DNA的完整性，二者需要做出一定的平衡。Hi-MethylSeq在CpG島之外選取3段內(nèi)參序列中的C作為內(nèi)對(duì)照，準(zhǔn)確評(píng)估樣本的轉(zhuǎn)化率。
DNA 甲基化是早發(fā)現(xiàn)的基因表觀修飾方式之一,可能存在于所有高等生物中。DNA 甲基化能關(guān)閉某些基因的活性，去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。甲基化的主要形式有5-甲基胞嘧啶,N6-甲基腺嘌呤和7-甲基鳥嘌呤。原核生物中CCA/TGG和GATC常被甲基化，而真核生物中甲基化發(fā)生于胞嘧啶。DNA 的甲基化是在DNA 甲基化轉(zhuǎn)移酶（DNMTs）的作用下使CpG二核苷酸5'端的胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?'甲基胞嘧啶。這種DNA 修飾方式并沒有改變基因序列，但是它調(diào)控了基因的表達(dá)。在前期全基因組甲基化測序等工作基礎(chǔ)上，利用Hi-MethylSeq技術(shù)對(duì)大規(guī)模群體的候選基因甲基化水平進(jìn)行檢測。
DNA甲基化過程在一些生物學(xué)現(xiàn)象中起重要作用。例如，在原核生物中，它參與毒力、細(xì)胞周期調(diào)控、基因表達(dá)和對(duì)外源 DNA 導(dǎo)入的保護(hù)（DNA-宿主特異性）等過程。在高等真核生物中，DNA 甲基化參與調(diào)控染色體穩(wěn)定性、印記、X 染色體失活和cancer 變等多個(gè)細(xì)胞過程。在哺乳動(dòng)物中，DNA 甲基化主要發(fā)生在胞嘧啶堿基的第五個(gè)碳原子上，形成 5-甲基胞嘧啶或 5-甲基胞嘧啶核苷 (5-mC)。DNA甲基化幾乎只存在于CpG二核苷酸上，是一個(gè)關(guān)鍵的表觀遺傳標(biāo)記和基因表達(dá)調(diào)控因子?；騿?dòng)子或 CpG 島處的甲基化 CpG 簇與基因失活有關(guān)。DNA 甲基化由一個(gè)被稱為 DNA 甲基轉(zhuǎn)移酶并包括 DNMT1、DNMT3a 和 DNMT3b 的酶家族催化。DNMT3a 和 DNMT3b是從頭合成的甲基轉(zhuǎn)移酶，能夠甲基化之前未甲基化的 CpG二核苷酸。相反，DNMT1是一種維持性甲基轉(zhuǎn)移酶，在復(fù)制過程中修飾半甲基化的 DNA。DNA甲基化主要發(fā)生在CpG位點(diǎn)。在哺乳動(dòng)物中，70%到80%的CpG位點(diǎn)的胞嘧啶是甲基化的。南京CPG島甲基化重測序哪里做
異常的DNA甲基化可參與調(diào)控疾病相關(guān)的分子信號(hào)通路,從而影響其正常功能。上海bisulfite甲基化重測序公司
DNA甲基化是表觀遺傳學(xué)修飾的主要形式，甲基化模式的異常促進(jìn)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化，參與tumour演進(jìn)。許多基因具有tumour特異性的甲基化表型，一方面基因組普遍的低甲基化引起原cancer基因活化，基因組不穩(wěn)定性增加；另一方面啟動(dòng)子區(qū)的高甲基化，引起抑cancer基因及錯(cuò)配修復(fù)基因表達(dá)沉默，導(dǎo)致tumour的發(fā)生。研究表明，基因組的低甲基化隨著細(xì)胞惡性度的增加而愈加明顯，是病情診斷的重要指標(biāo)；此外，CpG島局部的高甲基化發(fā)生于細(xì)胞惡變之前，能在早期預(yù)測tumour的發(fā)生，其也能有效地預(yù)測tumour的復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移，在tumour的鑒別診斷中亦發(fā)揮重要作用。因此，檢測tumour發(fā)生中相關(guān)基因的甲基化模式具有重要意義，現(xiàn)就近年來中外文獻(xiàn)報(bào)道的甲基化檢測方法進(jìn)行簡要的分析總結(jié)。上海bisulfite甲基化重測序公司
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司坐落在龍騰路1015弄中星創(chuàng)意園2號(hào)502，是一家專業(yè)的第三方檢測服務(wù)；生物專業(yè)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù)；健康衰老評(píng)估；大健康檢測；遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù)；生物醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)控檢測技術(shù)技術(shù)服務(wù)；小鼠遺傳品系鑒定；轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定；細(xì)胞點(diǎn)突變檢測；細(xì)胞端粒長度和端粒酶活性檢測。公司。公司目前擁有較多的高技術(shù)人才，以不斷增強(qiáng)企業(yè)重點(diǎn)競爭力，加快企業(yè)技術(shù)創(chuàng)新，實(shí)現(xiàn)穩(wěn)健生產(chǎn)經(jīng)營。公司業(yè)務(wù)范圍主要包括：細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控，大健康檢測，生物技術(shù)服務(wù)等。公司奉行顧客至上、質(zhì)量為本的經(jīng)營宗旨，深受客戶好評(píng)。公司力求給客戶提供全數(shù)良好服務(wù)，我們相信誠實(shí)正直、開拓進(jìn)取地為公司發(fā)展做正確的事情，將為公司和個(gè)人帶來共同的利益和進(jìn)步。經(jīng)過幾年的發(fā)展，已成為細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控，大健康檢測，生物技術(shù)服務(wù)行業(yè)出名企業(yè)。