上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽(bisulfite)處理,用多重PCR擴(kuò)增目的片段,添加barcode和測序通用接頭,在Illumina X10二代測序平臺對PCR產(chǎn)物進(jìn)行高通量測序,利用生物信息學(xué)方法,精確定量計算目標(biāo)區(qū)間內(nèi)的甲基化位點的甲基化狀態(tài),在完成目標(biāo)區(qū)域檢測的同時大幅降低研究費用。Hi-MethylSeq結(jié)合了亞硫酸鹽轉(zhuǎn)換、靶向擴(kuò)增子高通量測序技術(shù),可實現(xiàn)多區(qū)段、多位點的甲基化精確定量分析。本方法適用于感興趣的目的片段的甲基化研究,在大樣本中進(jìn)一步確認(rèn)全基因組甲基化研究挑選的陽性位點。重亞硫酸鹽處理是甲基化分析中基因組DNA處理的金標(biāo)準(zhǔn),是一個化學(xué)過程,可造成DNA的損傷,很難同時實現(xiàn)100%的轉(zhuǎn)換效率和保持DNA的完整性,二者需要做出一定的平衡。Hi-MethylSeq在CpG島之外選取3段內(nèi)參序列中的C作為內(nèi)對照,準(zhǔn)確評估樣本的轉(zhuǎn)化率。上海翼和生物通過亞硫酸氫鹽處理,用PCR擴(kuò)增目的片段,并結(jié)合二代測序平臺并對PCR產(chǎn)物進(jìn)行測序。北京目標(biāo)區(qū)間甲基化重測序報告
DNA甲基化一般是指DNA復(fù)制后,在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶的作用下,將S-腺甘酰甲硫氨酸分子上的甲基轉(zhuǎn)移到DNA分子中胞嘧啶殘基的第5位碳原子上,形成5-甲基胞嘧啶的過程,它是真核細(xì)胞生物基因組重要的修飾方式之一。DNA甲基化包括從頭甲基化和維持甲基化2種模式。從頭甲基化是指在從未發(fā)生甲基化的位點上發(fā)生甲基化修飾,建立DNA甲基化的過程;而維持甲基化是指維持甲基化的酶可識別新合成的半甲基化雙鏈DNA,并將甲基添加到新鏈的非甲基化胞嘧啶上。杭州目標(biāo)區(qū)間甲基化重測序DNA甲基化通常抑制基因表達(dá),去甲基化則誘導(dǎo)了基因的重新活化和表達(dá)。
真核生物基因表達(dá)受多種機(jī)制、多層面的綜合調(diào)控?;虻腄NA序列不發(fā)生改變的情況下,基因的表達(dá)水平與功能發(fā)生改變,并可遺傳現(xiàn)象,稱為表觀遺傳(epigenetic)現(xiàn)象。DNA甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下,DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被選擇性的添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,常見于基因的5′—CG—3′序列。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區(qū),DNA高度甲基化首先會影響DNA結(jié)構(gòu),進(jìn)而阻遏基因轉(zhuǎn)錄,引起基因沉默。人體內(nèi),DNA甲基轉(zhuǎn)移酶主要有四種:DNMT1、DNMT3A、DNMT3B和DNMT3L。在DNA復(fù)制完成后,DNMT1是催化甲基轉(zhuǎn)移至新合成的DNA鏈上,這一現(xiàn)象稱為維持甲基化;DNMT3A和DNMT3B負(fù)責(zé)催化核酸鏈上新的甲基化位點發(fā)生反應(yīng),成為形成甲基化;DNMT3L不具有甲級轉(zhuǎn)移酶活性,其主要作用是調(diào)節(jié)其他甲基轉(zhuǎn)移酶的活性。真核細(xì)胞內(nèi)甲基化狀態(tài)有3種:持續(xù)的低甲基化狀態(tài)(如持家基因的甲基化)、誘導(dǎo)的去甲基化狀態(tài)(如一些發(fā)育階段特異性基因的修飾)和高度甲基化狀態(tài)(如人類女性細(xì)胞內(nèi)縊縮-失活的X染色體的甲基化)。
DNA甲基化一直以來都是表觀遺傳學(xué)領(lǐng)域研究的重點之一。DNA甲基化(Methylation)是指在DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(DNA methyltransferase, 縮寫DNMT)的作用下,基因組DNA序列上CpG島的二核苷酸5′端胞嘧啶轉(zhuǎn)變?yōu)?′甲基胞嘧啶(5′ methylcytosine, 縮寫5mC)。這種DNA修飾的方式并未改變基因的序列, 但能抑制某些基因的表達(dá)。在哺乳動物中,基因組DNA的甲基化可分為兩種類型:維持甲基化(maintenance DNA methylation)和重新甲基化(de novo methylation)。維持甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的作用下,DNA的半保留復(fù)制過程中,會在子鏈的相應(yīng)的位置進(jìn)行甲基化修飾的過程。重新甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的作用下,原來沒有甲基化的DNA雙鏈上,進(jìn)行甲基化的過程,之后由維持甲基化酶來維持穩(wěn)定的DNA甲基化狀態(tài)。對于這兩種甲基化機(jī)制來說,有兩種對應(yīng)類型的甲基化酶:維持甲基轉(zhuǎn)移酶和重新甲基轉(zhuǎn)移酶。翼和生物目標(biāo)區(qū)域甲基化項目結(jié)合亞硫酸鹽轉(zhuǎn)化和多重PCR擴(kuò)增建庫測序技術(shù),對目標(biāo)區(qū)域甲基化位點進(jìn)行分析。
表觀遺傳學(xué)研究已經(jīng)證實了特定基因區(qū)域的DNA甲基化修飾對于染色體構(gòu)象、基因表達(dá)調(diào)控機(jī)制有著重要影響,而全基因組DNA甲基化研究將是表觀基因組學(xué)為關(guān)注的內(nèi)容之一。Bisulfite處理能夠?qū)⒒蚪M中未發(fā)生甲基化的C堿基轉(zhuǎn)換成U,進(jìn)行PCR擴(kuò)增后變成T,與原本具有甲基化修飾的C堿基區(qū)分開來,再結(jié)合高通量測序技術(shù),可繪制單堿基分辨率的全基因組DNA甲基化圖譜。特定物種的高精確度甲基化修飾模式的分析,必將在表觀基因組學(xué)研究中具有里程碑式的意義,并且為細(xì)胞分化、組織發(fā)育等基礎(chǔ)機(jī)制研究,以及動植物育種、人類健康與疾病研究奠定基礎(chǔ)。DNA甲基化是一種表觀遺傳修飾,是由DNA甲基轉(zhuǎn)移酶催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosylmethionine)作為甲基供體.北京目標(biāo)區(qū)間甲基化重測序報告
全基因組甲基化測序:利用Bisulfite(亞硫酸鹽)對基因組進(jìn)行處理后上機(jī)測序。北京目標(biāo)區(qū)間甲基化重測序報告
DNA甲基化是指在甲基轉(zhuǎn)移酶的催化下,DNA的CG二核苷酸中的胞嘧啶被選擇性的添加甲基,形成5-甲基胞嘧啶,常見于基因的5′—CG—3′序列。DNA甲基化的位置主要集中在基因5′端的非編碼區(qū),DNA高度甲基化首先會影響DNA結(jié)構(gòu),進(jìn)而阻遏基因轉(zhuǎn)錄,引起基因沉默。DNA甲基化為非編碼區(qū)(如內(nèi)含子等)的長期沉默提供了一種有效的抑制機(jī)制。基因啟動區(qū)域內(nèi)CpG位點的甲基化通過三種方式影響基因轉(zhuǎn)錄活性:DNA序列甲基化直接阻礙轉(zhuǎn)錄因子的結(jié)合;甲基CpG結(jié)合蛋白結(jié)合到甲基化CpG位點與其他轉(zhuǎn)錄抑制因子相互作用;染色質(zhì)結(jié)構(gòu)的凝集阻礙了轉(zhuǎn)錄因子與其調(diào)控序列的結(jié)合。北京目標(biāo)區(qū)間甲基化重測序報告
上海翼和應(yīng)用生物技術(shù)有限公司是一家第三方檢測服務(wù);生物專業(yè)領(lǐng)域內(nèi)的技術(shù)開發(fā)、技術(shù)咨詢、技術(shù)服務(wù);健康衰老評估;大健康檢測;遺傳學(xué)技術(shù)服務(wù);生物醫(yī)藥行業(yè)質(zhì)控檢測技術(shù)技術(shù)服務(wù);小鼠遺傳品系鑒定;轉(zhuǎn)基因小鼠基因型鑒定;細(xì)胞點突變檢測;細(xì)胞端粒長度和端粒酶活性檢測。的公司,致力于發(fā)展為創(chuàng)新務(wù)實、誠實可信的企業(yè)。公司自創(chuàng)立以來,投身于細(xì)胞組織小鼠質(zhì)控,大健康檢測,生物技術(shù)服務(wù),是醫(yī)藥健康的主力軍。翼和生物致力于把技術(shù)上的創(chuàng)新展現(xiàn)成對用戶產(chǎn)品上的貼心,為用戶帶來良好體驗。翼和生物始終關(guān)注醫(yī)藥健康行業(yè)。滿足市場需求,提高產(chǎn)品價值,是我們前行的力量。